Este protocolo pode ajudar os cientistas a estudar os resultados após lesões no nervo facial e métodos para melhorar a regeneração em muitos parâmetros diferentes. A principal vantagem dessa técnica é que a anatomia de ratos permite fácil acesso ao nervo facial, e sua grande escala nos permite estudar todos os padrões de lesões relevantes. As aplicações desta técnica se estendem para a reabilitação dos pacientes após lesão do nervo facial.
Como potencial regenerativo, o rato fornece um modelo experimental reprodutível e conciso. E este método pode fornecer insights sobre terapias cirúrgicas e médicas para parese de nervos faciais ou paralisia. E é traduzível para outros modelos de cabeça e pescoço ou outros nervos periféricos.
Operar sob um microscópio usando ambas as mãos pode ser um desafio. Recomendo praticar usando a versão binóculo sob o microscópio antes de tentar uma dissecção do nervo facial. Após confirmar a falta de resposta ao aperto do dedo do pé, aplique pomada nos olhos do rato e raspe a área cirúrgica.
Estabeleça um método para identificação de ratos e coloque um rolo de gaze sob o pescoço. Desinfete a pele exposta com três clorexidinas alternadas e 70% de etanol e coloque o rato sob um microscópio estéreo. Manipule o ouvido ipsilateral em uma direção anterior-posterior para determinar a dobra natural da pele pós-uricular.
Use uma lâmina número 15 para fazer uma incisão de dois a três milímetros no vinco pós-auricular. O planejamento e a colocação da incisão são os passos mais críticos para garantir a identificação confiável do nervo facial, minimizando o tamanho da ferida. Disseca sem rodeios através da fáscia subcutânea imediata e coloque um retrátil micro-Weitlaner para aumentar a exposição ao tecido.
Identifique o músculo digastric anterior enquanto ele viaja em uma direção inferior a superior em direção à sua inserção ao longo da base do crânio. Espalhe suavemente pela barriga muscular ao longo do ponto de inserção muscular para revelar o tendão da barriga digastrica anterior. O tendão aparecerá como um processo branco filmado emanando do músculo com uma inserção sólida na base do crânio.
Após a identificação do músculo digastric anterior e seu tendão, ajuste o retrátil weitlaner para retrair ainda mais a barriga muscular. A região exposta é o espaço tridimensional no qual está o tronco principal do nervo facial. Dissecar ao longo do nervo em uma direção inferior distally a partir da saída do foramen estilomastoide.
Para induzir um padrão de lesão de esmagamento, use fórceps de joalheiro de superfície lisa para agarrar firmemente e comprimir o nervo aplicando pressão constante e reprodutível por 30 segundos para garantir uma lesão de esmagamento apropriada. Para uma simples transeção, segure o epineurium imediato sobredilhando o nervo com fórceps de dentes finos, e use microscissores afiados para transectar o nervo de forma limpa no ponto desejado com um único corte. Para um modelo de lacuna nervosa, use pinças ajustáveis para definir o comprimento da lacuna nervosa desejada para garantir padrões de lesão semelhantes entre os animais e transectar o nervo como apenas demonstrado.
Após a ção experimental, irrigar a ferida com soro fisiológico e secar o tecido com gaze estéril. antes de fechar a incisão da pele de acordo com as diretrizes institucionais. Aqui, imagens ao vivo do tronco principal do nervo facial com uma lesão de esmagamento aproximadamente dois a três milímetros distal até o ponto de ramificação do primeiro PES em um rato adulto transgênico Thy1-GFP é mostrado.
A avaliação do retorno gradual da fluorescência em uma, duas, três e quatro semanas após a lesão pode ser usada como marcador para monitorar a regeneração nervosa nesses animais transgênicos. A análise histomorfométrica pode ser usada para obter imagens transversais da divisão mandibular marginal permitindo quantificação do diâmetro axonal, quantidade de detritos, fibra nervosa, porcentagem de medidas nervosas e de densidade. É importante ajustar frequentemente a colocação do retrátil conforme necessário para garantir que os nervos anatômicos relevantes sejam visíveis ao identificar o nervo facial.
Após este procedimento, os nervos e músculos relevantes podem ser colhidos para análise imunohistoquímica para avaliar o grau de regeneração em relação a outros grupos experimentais. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para os pesquisadores no estudo dos desfechos funcionais após lesão do nervo facial. Especificamente, como realizar o fenômeno da sintetização.
