O objetivo geral deste procedimento é implantar etiquetas acústicas em miniatura dentro das cavidades corporais de lamprey do Pacífico juvenil e enguia americana e monitorar seu comportamento e efeitos físicos após o processo de marcação. Inúmeros estudos têm sido realizados para entender a sobrevivência dos peixes, o comportamento e os movimentos próximos às estruturas dos rios, como hidrelétricas, que podem impedir rotas migratórias a montante ou a jusante. Para ajudar a resolver essa necessidade contínua e de uso, o Pacific Northwest National Lab desenvolveu uma nova etiqueta acústica em miniatura que foi projetada especificamente para o uso em lamprey juvenil e enguias chamadas lamprey e eel tag.
Este método identifica os protocolos de utilização de taxas de dose aceitáveis, manuseio de peixes sem ferimentos ou desfazendo estresse e identificando o local ideal onde as etiquetas podem ser implantadas. A principal vantagem dessa técnica de marcação é a velocidade do processo, pois não são necessárias suturas. A localização da tag dentro da cavidade corporal minimiza o estresse fisiológico, promove a retenção de etiquetas e não causa efeitos prejudiciais à capacidade ou comportamento de natação dos peixes.
Para começar, prepare as etiquetas para implantação desinfetando-as. Coloque as etiquetas na solução de 70% de etanol a partir de 20 minutos. Em seguida, remova as etiquetas usando pinças de plástico e coloque em um pequeno prato de vidro contendo água estéril.
Em seguida, remova as etiquetas e coloque em um copo de pílula estéril. O próximo passo envolve a preparação do banho anestésico que permite que os peixes sejam manuseados e marcados. Em um pequeno copo de plástico, peso 40 gramas de tricaine.
Dissolva o pó em um béquer de 500 mililitros de água da torneira em uma placa de mexida e barra de batedeira. Em seguida, transfira para uma garrafa plástica de 500 mililitros para obter uma solução de estoque de 80 gramas por litro. Repita o mesmo procedimento com bicarbonato de sódio e adicione a uma garrafa separada de 500 mililitros.
Encha uma banheira de plástico de 10 litros com cinco litros de água da mesma fonte que o peixe a ser marcado. Adicione 6,25 mililitros de solução tricaine e 6,25 mililitros de sódio bicarbonato, usando um medidor de medição ligado ao topo das garrafas de 500 mililitros. Isso resulta em uma dose de 100 miligramas por litro para a banheira.
O bicarbonato de sódio é adicionado em uma dose igual à tricaine para manter o pH equilibrado, porque a tricaina é ácida. Mexa para misturar bem a solução, na banheira, e tenha uma tampa disponível para cobrir a banheira para garantir que lamprey não escape enquanto estiver na solução anestéstica. Isso completa a preparação da solução anestésico.
Coloque um lamprey individual no banho anestésico, usando uma pequena rede de mergulho. Espere de quatro a cinco minutos para lamprey ficar totalmente desmobilizado e parar de nadar, mantendo um movimento lento, mas constante da brânquia. Use uma rede de mergulho para remover lamprey.
Faça a medição do comprimento e do peso e regise o código de identificação exclusivo da tag acústica. Enquanto isso, prepare uma almofada de espuma de células fechadas de 1,3 centímetros de espessura, saturada de água primeiro, e depois 150 microliters por litro de solução protetora de revestimento. O revestimento ajuda a neutralizar a interrupção das membranas mucosas durante o procedimento cirúrgico.
Coloque o lado ventral do lamprey sobre a espuma preparada. Posicione uma pequena seção de tubulação para que um fornecimento regulamentado de água de um reservatório de água elevado flua através da região da boca do lamprey. Isso permite a respiração enquanto o peixe está sendo submetido à implantação de etiquetas.
Em seguida, localize onde a incisão deve ser feita, aproximadamente 20 milímetros posteriores aos poros de brânquia no lado lateral esquerdo ou direito. Uma régua pode ser usada para referência ou marcadores colocados na almofada de espuma. Usando um bisturi microcirúrgico estéril de 3,0 milímetros com uma lâmina de 15 graus, faça cuidadosamente uma abertura de 2,5 a três milímetros na direção lateral, garantindo que o bisturi esteja cortando apenas através da parede interna da pele.
Em seguida, coloque cuidadosamente a etiqueta desinfetada anteriormente na cavidade corporal, à mão. Aplique uma leve pressão no local de marcação para garantir que a tag tenha se movido para a cavidade corporal. Em seguida, coloque lamprey marcado em um balde de recuperação, contendo abastecimento de água do rio fresco com tubos de bomba de oxigênio e pedra de ar.
Certifique-se de que lamprey se recuperou do anestésico e transfira para segurar tanque para estudo futuro. Siga os mesmos passos para marcar a enguia americana de fase amarela com essas diferenças. Para alcançar uma taxa de dose de 240 miligramas por litro, use a solução anestésico descrita anteriormente de 80 gramas por litro de tricaine e bicarbonato de sódio.
Adicione 15 mililitros de cada um ao banho de água de cinco litros. A incisão deve ser feita 25 milímetros na base da barbatana peitoral no lado lateral esquerdo ou direito ou aproximadamente 1/3 do comprimento total da enguia. Certifique-se de que os peixes estão nadando normalmente no recipiente de recuperação.
Esta figura ilustra a duração do impacto em um tubo de natação de velocidade de água constante para os quatro grupos de tamanho testados, de 120 a 160 milímetros. Os resultados não mostram diferença estatística entre os grupos de controle marcados e não marcados. Esta figura ilustra a velocidade crítica de natação em comprimentos corporais por segundo para testes realizados em uma câmara de natação.
Os grupos de tamanho variam de 111 a 120 a 161 a 175 milímetros. Os resultados mostram que não há diferença estatística entre os grupos de controle marcados e não marcados. Este número mostra a velocidade média de natação em comprimentos do corpo por segundo para todos os grupos de tamanho testados.
As velocidades foram de 4,12 comprimentos de corpo por segundo para marcados e 3,88 para o grupo controle. Novamente, não há diferença estatística entre os grupos marcados e de controle. Os resultados desses estudos laboratoriais demonstram que o procedimento de marcação e os efeitos de marcação não têm impactos adversos à sobrevivência dos peixes ou à capacidade de natação.
O procedimento de implantação da etiqueta foi eficaz na colocação de etiquetas na cavidade corporal sem causar hemorragia significativa ou infecções no local da marcação. A duração do processo de marcação, inferior a 60 segundos, é benéfica na redução do estresse associado ao anestimado do peixe. Esses achados caracterizam uma nova ferramenta para a pesquisa de passagem de lamprey juvenil e enguia e podem ser utilizados em estudos futuros.
Essa tecnologia permitirá que os pesquisadores rastreiem os movimentos de lamprey e enguias dentro dos sistemas fluviais à medida que se aproximam de barragens hidrelétricas ou outras estruturas que possam impedir a passagem de peixes. Por sua vez, os resultados podem informar melhor as decisões de manejo para ajudar a conservar essas espécies ao longo de suas fases de vida juvenil.
