A administração crônica de isoproterenol através de uma bomba osmótica tem sido amplamente usada para recapitular alterações na insuficiência cardíaca avançada em camundongos. Este método é simples e requer menos conhecimento cirúrgico do que outros modelos, como LAD e TAC. Demonstrando o procedimento estará o Dr. Vincent Ren, um cientista do laboratório do Dr. Yibin Wang.
Após a pesagem e o registro do peso corporal de cada camundongo, calcule a quantidade e concentração adequadas de isoproterenol para cada animal, e dissolva o isoproterenol em 120 microlitrais de cloreto de sódio estéril de 0,9%. Misture bem por um minuto para solubilizar completamente o isoproterenol, e pese e grave o peso de uma bomba osmótica vazia, juntamente com e sem seu moderador de fluxo, por mouse. Conecte um tubo de enchimento de 27 bitolas, com pontas cegas fornecido com as bombas osmóticas, e carregue uma seringa de um mililitro com 120 microlitres da solução isoproterenol por mouse.
Segurando uma bomba na posição vertical, insira o tubo de enchimento através da abertura da bomba na parte superior até que a ponta do tubo de enchimento fique perto da parte inferior do reservatório da bomba, e pressione lentamente o êmbolo da seringa até que a solução de isoproterenol encha a abertura da bomba. Quando a bomba estiver carregada, retire cuidadosamente o tubo de enchimento e limpe a solução em excesso. Insira de volta o moderador de fluxo para fechar a bomba e limpe qualquer solução em excesso.
Em seguida, ressunuda a bomba para confirmar que mais de 90% do volume do reservatório foi preenchido. Coloque o mouse na posição supina em uma almofada aquecida e remova o ar do abdômen inferior. Para implantação da bomba osmótica cirúrgica, confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do pé em um camundongo anestesiado e aplique pomada nos olhos do animal.
Limpe a pele exposta com um desinfetante adequado e faça uma incisão de pele média de um centímetro. Use um par de tesouras sem corte para dissecar cuidadosamente a pele das paredes peritoneal subjacentes, e use fórceps para puxar as paredes peritoneal para longe do intestino subjacente. Use uma tesoura fina para cortar um orifício de 0,8 centímetros na parede peritoneal e inserir o moderador de fluxo da bomba osmótica final primeiro na cavidade peritoneal.
Quando a bomba estiver no lugar, use suturas absorvíveis de 5 a 0 de forma interrompida para fechar o orifício na parede peritoneal e use 6-0 suturas nãoabsorbáveis para fechar a pele. Em seguida, coloque o rato em uma incubadora dedicada com monitoramento até a recumbência total antes de devolver o animal à sua gaiola doméstica. Aqui, um resumo das mudanças semanais com base nos parâmetros ecocardiográficos selecionados e no tempo esperado para o desenvolvimento do modelo são apresentados.
Embora sejam observadas variações entre as cepas do camundongo, em média, a espessura da parede septal interventricular no estatolo final e o encurtamento fracionado aumentam na primeira semana, mas diminuem em pontos de tempo posteriores. O diâmetro interno ventricular esquerdo na estatóstola final e a massa ventricular esquerda aumentam durante um período de três semanas. Além disso, os corações dos camundongos demonstram dimensões visivelmente maiores da câmara ventricular esquerda sob isoproterenol, bem como maiores quantidades de fibrose em relação aos controles tratados com soro fisiológico.
É fundamental manter um ambiente cirúrgico estéril durante a cirurgia de sobrevivência para minimizar a infecção pós-operatória e a morbidade. A criação bem-sucedida do modelo pode ser avaliada in vivo por ecocardiografia serial para hipertrofia, dilatação e disfunção, bem como ex vivo via avaliação histológica e molecular do tecido cardíaco colhido. Aplicamos este método a mais de 100 cepas de camundongos de raça para avaliar traços de remodelação cardíaca devido à estimulação beta-adrenérgica crônica.
Os resultados são publicados e prontamente disponíveis.
