Modelo de carcinogênese cutânea induzida por produtos químicos usando dimetilbenz[a]Anthracene e 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetato (DMBA-TPA)

Este modelo de câncer de pele de duas etapas permite o estudo do papel da inflamação no câncer de pele e permite ao estudo a iniciação do tumor como um processo separado da progressão do tumor. A formação de tumores neste modelo é quimicamente induzida e permite o uso de cepas de nocaute para estudar os efeitos de fatores ambientais ou candidatos terapêuticos. O modelo é adequado para estudar o papel do sistema imunológico e da angiogênese no câncer.

Demonstra uma patologia da doença semelhante ao carcinoma escamoso celular em pacientes humanos. Embora este método seja relativamente fácil de conduzir, o tempo preciso é essencial. Também é importante tomar as medidas de segurança adequadas ao lidar com o DMBA, que é um cancerígeno.

Antes de começar o experimento, abriga qualquer camundongo agressivo de sete a nove semanas em gaiolas separadas para evitar lutas e lesões na pele. Para indução de papiloma de pele, primeiro raspe as peles traseiras dos animais experimentais e pese os camundongos individualmente. 48 horas após a barba, use uma pipeta para aplicar 50 microgramas de DMBA em 200 microliters de acetona na área raspada de cada rato anestesiado.

Para a promoção do papiloma de pele, sete dias após a aplicação de DMBA tratar a pele com cinco microgramas de TPA em 200 microlitros de acetona duas vezes por semana até o final do experimento. Examine os animais para papilomas e fotografe e grave o tamanho de cada papiloma individual em um mapa a cada semana. Uma massa palpável maior que um milímetro de diâmetro é considerada um papiloma se permanecer por mais de uma semana.

Quando a resposta do tumor atingir um platô, colde o material amostral apropriado dos animais 24 horas após a última aplicação do TPA e cole moscotomas de espessura total da pele para análise imunohistoquímica. Use um soco de biópsia para coletar pedaços de pele de papiloma e amostras de pele não papiloscópica para expressão genética e ou anaylses proteicas e use um bisturi para coletar pedaços de papiloma e pele não papiloma para análise imunohistoquímica. Em seguida, colete os linfonodos de drenagem da pele e um pedaço do baço para análise citométrica de fluxo conforme desejado.

Uma diferença estatisticamente significativa no tempo livre do papiloma e no número de papilomas entre os grupos experimentais é tipicamente observada no modelo de tumor DMBA TPA. Análises histológicas são adequadas para estudar a estrutura dos papiloscopes, a morfologia da pele ou a infiltração de células imunes de interesse. É essencial aplicar o DMBA e o TPA uniformemente na pele e aplicar TPA em intervalos consistentes.

Também é importante contar os papilomas regularmente. Os mecanismos que afetam o número e o tempo de formação do tumor podem ser estudados utilizando diferentes métodos, incluindo imunohistoquímica, citometria de fluxo, PCR quantitativo e análise de proteínas. Esta técnica convencional pode ser facilmente adaptada e aplicada para estudar os efeitos de diferentes genes, fatores ambientais ou terapêuticas de interesse na iniciação e progressão do tumor.

É necessário cautela ao executar a técnica, já que o DMBA é cancerígeno e a acetona evapora rapidamente. Recomenda-se uma máscara de respiração adequada e o uso de armário de fluxo.