Este vídeo está mostrando a indução in vitro de células-tronco de polpa dentária humana em direção a linhagens pancreáticas. As células-tronco dão um tratamento alternativo em muitas doenças, incluindo diabetes tipo I que causam biolaging de células beta. O transplante de células produtoras de insulina será o novo método promissor para causar ao longo da vida.
Neste vídeo são descritas duas abordagens para geração de células produtoras de insulina, incluindo o protocolo de indução integrativa e não integrativa. E nesta parte explica-se o protocolo de integração para induzir células produtoras de insulina a partir de células-tronco de polpa dentária humana. Para o protocolo de indução é o para misturar o processo natural de desenvolvimento pancreático.
Para obter as células produtoras de insulina natural e funcional. Para a geração de células produtoras de insulina a partir de células-tronco mesenquimais como células-tronco de polpa dentária, o protocolo de indução de várias etapas é empregado. Células-tronco mesenquimais são usadas na palavra endoderme definitivo, endoderme pancreático, endócrina pancreática e, em seguida, células beta-célula pancreáticas ou insulina, respectivamente.
Para induzir as células, a abordagem de indução de três passos é usada como protocolo de espinha dorsal. O protocolo integrativo utilizou a expiração excessiva do fator de transcrição pancreática essencial, PDX-1, por células-tronco de polpa dentária humana. Em seguida, o PDX-1 sobre células-tronco expressas será ainda mais induzido usando o protocolo de diferenciação de três etapas.
O potencial de diferenciação pancreática, pelo protocolo integrativo, será comparado com o protocolo não integrativo como ilustrado na animação. Essa ideia foi realizada sob o protocolo aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Humana, Faculdade de Odontologia da Universidade chulalongkorn com consentimento informado pelos pacientes. Este protocolo começou com a expiração do PDX-1.
Células-tronco de polpa dentária humana em partes de 2 a 5, com confluência de 70-80%, são utilizadas para a transdução. As células são experimentadas e contadas. Em seguida, um milhão de células estão sentadas no vaso de transfecção e incubadas durante a noite.
24 horas depois, o antivírus recém-preparado que carrega o gene PDX-1 é adicionado ao vaso cultivado de acordo com a multiplicidade desejada de infecção. As células transfeinadas são então mantidas na incubadora por 24 horas. Em seguida, o meio cultivado fresco é alterado e mantido por mais 48 períodos.
A morfologia das células transfeinadas é verificada antes de usar para mais etapa de indução. As células-tronco de polpa dentária humana com PDX-1 ao longo da expiração são então experimentadas e suspensas no primeiro meio de indução pancreática, o chamado meio A.In este passo, o vaso cultivado de baixa fixação é usado. Morfologia de PDX-1 sobre células-tronco de polpa dentária humana expressa no dia 3 após a indução média A é observada.
Células com boa morfologia serão então usadas para novas induções. No próximo passo, o segundo meio de indução, o chamado médio B, é adicionado ao vaso cultivado. A morfologia do PDX-1 sobre células-tronco de polpa dentária humana expressa no segundo dia após a indução média é observada.
Células com boa morfologia serão então usadas para mais etapas de indução. O próximo passo, a terceira mídia de indução, o chamado médio C é adicionado ao navio cultivado. 5 dias depois, observa-se morfologia celular.
Colônias de células são coletadas para análise suplementar. Incluindo morfologia e tamanho da colônia, expressão de marcador genético pancreático e propriedade funcional em relação à secreção de C-peptídeo estimulada pela glicose ou ensaio GSCS. Para a abordagem de indução não integrativa, é empregado o protocolo de indução de três etapas mencionado anteriormente.
Um milhão de células são reinsu suspensadas no meio A e sentadas em um vaso de cultura de baixa fixação. Depois, cultuado por três dias. Após a verificação da morfologia, séries de meios de indução, incluindo os médios B e C, são posteriormente adicionadas ao vaso cultivado nos dias três e cinco, respectivamente.
No dia 10, observa-se morfologia celular. Colônias celulares são coletadas para análise suplementar, incluindo morfologia e tamanho de colônias, expressão de marcador genético pancreático e propriedade funcional em relação à secreção de C-peptídeo estimulada pela glicose ou ensaio GSCS. Os resultados de ambos os protocolos de indução são comparados em ambos os protocolos.
As células-tronco da polpa dentária humana são capazes de formar colônia como estrutura desde o primeiro dia da indução. A aparência das colônias é redonda e densa. Todas as colônias estão flutuando nos vasos culturais durante todo o período de indução.
A contagem total de colônias do protocolo de indução integrativa é um pouco maior do que a indução não integrativa. A evolução sob percentual de colônia mostra uma tendência benéfica, desde a formação de colônias de pequeno a médio porte após a indução integrativa, importante para reduzir o núcleo necrosado dentro da colônia. A análise do marcador genético pancreático revelou que o protocolo indutivo integrativo produz as colônias com alta expiração de marcadores pancreáticos, incluindo MAP-A, GLUT-2, insulina e GLP-1R, sugerindo a diferenciação para as células produtoras de insulina medidas.
Para a função glicose C-peptídeo secreção é importante. Os resultados mostram que ambos os protocolos de indução rendem às colônias uma boa resposta ao desafio da glicose. A partir deste estudo, ambos os protocolos de indução pancreática são capazes de gerar as células produtoras de insulina in vitro em termos de expiração de marcadores pancreáticos e propriedade funcional, os protocolos mostram uma melhor qualidade da formação celular produtora de insulina.
Sugerindo as tendências das células-tronco mesenquimais humanas, como a aplicação de células-tronco de polpa dentária humana no tratamento de diabetes baseado em células-tronco em um futuro próximo.
