Este protocolo é o primeiro a descrever como a terapêutica pode ser efetivamente administrada a toda uma alusão cardíaca no grande modelo animal de transplante cardíaco. A principal vantagem deste protocolo é que permite aos pesquisadores testar os efeitos de uma terapêutica em toda uma alusão cardíaca durante longos períodos de tempo após o transplante. Esta técnica pode ser usada para investigar intervenções que previnem a rejeição do a looenxerto cardíaco, disfunção primária do enxerto, minimizar a necessidade de imunossupressão pós-operatória ou prolongar a vida útil de um aoenxerto cardíaco.
Otimizar a exposição é a parte mais desafiadora do procedimento de transplante e requer que vários membros da equipe completem. Da mesma forma, perfusionistas experientes são necessários para coordenar e monitorar a perfusão ex vivo. Para começar, faça uma incisão de 20 a 30 centímetros de comprimento usando a lâmina número 10 do manúbrio até o xifoide, dependendo do tamanho do porco.
Use eletrocauteria para dividir o peitoral maior do esterno até o xifoide ter o cuidado de dividir ao longo da linha média do esterno. Uma vez até o esterno, marque a linha média e comece a esternotomia a partir do xiphoide dividindo-o com uma tesoura pesada. Em seguida, estenda a cefaleia de esternotomia após cada corte.
Separe sem rodeio o coração do esterno usando varreduras de dedos e complete a esternotomia através do manúbrio. Depois de otimizar a exposição do campo cirúrgico usando um retrátil severo, identifique e remova o timo com eletrocauteria entrando no pericárdio longitudinalmente do diafragma até a aorta e criando um berço pericárdico usando suturas de seda. Divida totalmente o tecido entre a aorta e a artéria pulmonar e visualize a localização do arco aórtico e do tronco braquicefálico para facilitar a colocação adequada do grampo cruzado aórtico.
Usando tesoura e dissecção contundente, liberte circunferencialmente a veia cava superior e amarre duas suturas de seda de tamanho zero ao redor da veia cava superior. Aplique sutura de polipropileno tamanho 4-0 à aorta ascendente de forma u-stitch e ao átrio direito de forma de bolsa-corda. Insira uma cânula de raiz aórtica pediátrica presa pelo ponto U previamente colocado.
E depois de des-arejar a cânula, fixe no lugar com um torniquete Rummel. Conecte a cânula raiz aórtica à tubulação de cardioplegia depois que a tubulação tiver sido lavada com cardioplegia del Nido. Crie uma atriotomia direita dentro da corda de bolsa previamente colocada.
Insira uma cânula venosa no átrio direito e fixe com um torniquete Rummel. Conecte a cânula venosa a uma linha de sucção estéril conectada à cardiotomia do protetor celular e colete aproximadamente 1 a 1,3 litros de sangue. Em seguida, aplique o grampo cruzado aórtico, garantindo cuidadosamente que o grampo oclui completamente a aorta ascendente.
Depois de colocar lama de gelo estéril no coração, divida a veia cava inferior e superior apenas proximal à veia azígo. A aorta ao nível do arco apenas distal para a artéria innominada e a artéria pulmonar principal na bifurcação. Identifique e liga as veias pulmonares, depois remova o coração do peito e coloque-o em um recipiente com gelo estéril.
Para preparar a aorta para colocação do conector aórtico, coloque quatro suturas de polipropileno tamanho 4-0 em uma forma simples de colchão horizontal ao redor do interior da aorta distal a uma profundidade de cinco milímetros abaixo da borda de corte, e depois amarre-as para baixo. Enquanto segura as suturas aórticas penhoradas, insira o conector aórtico na aorta e amarre uma fita umbilical ao redor da aorta para fixar o conector. Coloque uma bolsa de polipropileno tamanho 4-0 ao redor da borda do corte distal da artéria pulmonar principal.
Insira a cânula da artéria pulmonar e amarre as extremidades da corda da bolsa para fixar a cânula. Em seguida, conecte-se à cânula da artéria pulmonar ao conector da artéria pulmonar no dispositivo e fixá-la com a gravata. Leve o enxerto preparado da mesa de trás para o dispositivo de perfusão ex vivo e conecte o conector aórtico ao local do dispositivo.
A ventilação ventrículo esquerda escorre pela veia pulmonar desamasteada no átrio esquerdo e através da válvula mitral para o ventrículo esquerdo. Usando a lâmina número 10, faça uma incisão de pele de 20 a 30 centímetros de comprimento e, em seguida, continue a dissecção até a fáscia usando eletrocauteria. Depois de levantar a fáscia e o peritônio com dois grampos Kocher, faça cuidadosamente uma pequena incisão na cavidade peritoneal usando uma tesoura Metzenbaum.
Estenda a abertura peritoneal para toda a extensão da incisão usando eletrocauteria. Colocando um dedo por baixo para proteger as vísceras subjacentes. Coloque um retratedor Balfour para otimizar a exposição e retrair-se ao intestino delgado cranialmente usando uma toalha molhada.
Leve a dissecção até a aorta abdominal em veia cava inferior, em seguida, liga os linfáticos com clipes médios e grandes. Na mesa de trás, quando a veia pulmonar deixou atriotomia onde a ventilação ventrículo esquerda foi inserida é sobresewed, corte o aspecto distal da aorta e artéria pulmonar onde a fixação às cânulas pode ter esmagado o tecido. Coloque um grampo satinsky na cava vena inferior e crie uma venotomia longitudinal medindo aproximadamente 1,5 centímetros usando a lâmina número 11 e a tesoura de Pott.
Anastomose o enxerto de artéria pulmonar para a veia infra-renal inferior do receptor, de forma de ponta a ponta usando uma sutura de polipropileno tamanho 4-0. Em seguida, anastomose o enxerto de aorta para a aorta infrarenal do destinatário de forma de ponta a ponta usando uma sutura de polipropileno tamanho 4-0. Coloque cuidadosamente o coração no espaço retroperitoneal direito, evitando tensão na anastomose e torção dos vasos.
Em seguida, substitua o intestino delgado. Feche a fáscia com sutura maxon tamanho zero em uma forma de corrida começando de ambas as extremidades da incisão e amarrando no meio, evitando qualquer lesão no intestino. Feche a camada dérmica profunda com tamanho 2-0 Vicryl em uma forma de corrida e a pele com tamanho 4-0 Monocril em uma forma de corrida.
Foram adquiridos vários parâmetros diferentes de perfusão. As taxas de fluxo circulatório foram medidas a partir da artéria pulmonar, da aorta e das artérias coronárias. A pressão aórtica, incluindo pressão média, pressão sistólica, pressão diastólica também foram medidas.
Durante a perfusão ex vivo, a frequência cardíaca e a temperatura do artorgrafo cardíaco também foram medidas. Durante o período de perfusão, a saturação de oxigênio venoso misto e os valores hematócritos foram medidos a partir do perfusato. A viabilidade do coração heterotópico intrabdominal em 35 dias indica transplante bem sucedido usando este protocolo.
A coisa mais importante a se lembrar é selecionar um site para o aloenxerto que minimize o potencial de tensão e torção das anastomoses. Seguindo este procedimento, o pesquisador poderá testar vários tipos diferentes de terapêuticas para determinar seus efeitos sobre as respostas imunológicas contra o aoenxerto, bem como determinar a longevidade de um efeito terapêutico no aoenxerto. Após o desenvolvimento deste protocolo, nosso grupo tem sido capaz de testar diferentes veículos vetoriais virais para entrega de genes, bem como um modelo de rejeição aguda de alograma para obter uma compreensão da fisiopatologia da rejeição e eficácia da entrega de genes usando vetores virais.
