Assim, em nosso protocolo, a instilação intra-cólon de TNBS leva à inflamação transmural no local de instilação e à distensão mecânica no segmento proximal à inflamação. Então isso imita a doença de Crohn estenótico. Como o segmento proximal é mecanicamente distendido, mas não mostra uma inflamação visível, um estudo comparativo do segmento proximal e do local da inflamação ajuda a determinar se o estresse mecânico desempenha um papel na colite de Crohn.
Estudos anteriores focam apenas no local da inflamação. Nosso protocolo de trabalho em diferentes locais no modelo destaca um papel crítico do estresse mecânico na doença de Crohn, particularmente na doença de Crohn estentica. Para começar, coloque os ratos na mesa de anestesia em uma posição supina.
Para induzir colite, insira um cateter de poliuretano de grau médico, de ponta aberta através do ânus por aproximadamente sete a oito centímetros da beira anal, e insira suavemente TNBS no cólon. Administre os ratos de controle falsos com 250 microlitres de soro fisiológico. Para ajudar na distribuição de TNBS ou soro fisiológico e evitar derramamentos, mantenha os ratos em uma posição supina com a cabeça virada para baixo em um ângulo de aproximadamente 30 graus, com o ânus fechado por dois minutos.
Abra o abdômen de rato usando tesouras de grau cirúrgico e fórceps. Remova cuidadosamente todo o cólon acima do canal anal e transfira o cólon imediatamente para o tampão HBSS 1x gelado. Endireitar o cólon no tampão e medir o comprimento do cólon usando uma régua.
Pegue um fio de nylon e circule-o ao redor do cólon para medir a circunferência externa dos segmentos de cólon em controle e ratos tratados com TNBS. Tome tecidos de espessura total para histologia. Abra o cólon ao longo da placa mesentérica e limpe o cólon completamente com tampão HBSS.
Avalie o cólon para escore de inflamação macroscópica com base nos critérios predefinidos com modificações mínimas. Coletar amostras de tecido cólon de ratos tratados com TNBS nos locais P, I e D.Site P é a porção de dois a três centímetros antes da margem oral do local da inflamação. O local I é o local de inflamação onde o TNBS é instilado, tipicamente de quatro a seis centímetros do final do cólon.
Por fim, o local D é a porção de um a dois centímetros distal à margem aboral do local da inflamação. A instilação intra-cólon de TNBS em ratos induziu uma inflamação transmural localizada de aproximadamente dois centímetros de comprimento com parede intestinal espessa e lúmen estreito no local da instilação no cólon distal. O local da instilação do TNBS foi referido como local I.As resultado de inflamação transmural e estenose, tanto inflamação quanto estresse mecânico estavam presentes no local I.A estenose no local eu levei à distensão de lumen marcada no segmento proximal ao local da instilação TNBS, referida como local P.A circunferência do cólon foi significativamente aumentada nos locais P e Eu comparado ao controle sham colon.
Embora mecanicamente distendido, o local P não apresentou inflamação visível. Pelo contrário, o segmento cólon distal à instilação TNBS referido como local D não apresentou inflamação nem distensão mecânica. O escore macroscópico de inflamação no local I nos ratos tratados com TNBS foi dramaticamente aumentado em comparação com os controles falsos nos locais P e D de ratos de colite.
Os escores de inflamação nos locais P e D não foram significativamente aumentados em comparação com sham. Por isso, é importante estudar não apenas o site I, mas os locais P e D no modelo, pois isso ajuda a reconhecer a significância patogênica do estresse mecânico na doença de Crohn. Para determinar ainda mais se o estresse mecânico é um fator patogênico na inflamação intestinal, pode-se também tentar liberar a distensão mecânica alimentando os animais exclusivamente com dieta líquida e ver se isso ajuda com inflamação e função intestinal.
