O transplante de pâncreas é um tratamento curativo para pessoas com diabetes. No entanto, os órgãos são escassos e estratégias para melhorar o pool de doadores são necessárias. A perfusão normotérmica ex vivo já foi bem sucedida para outros órgãos que poderiam potencialmente permitir a avaliação e o reparo de aloenxertos pancreáticos.
O pâncreas é o órgão mais frequentemente descartado para transplante. Esta técnica tem um potencial para aumentar o pool de órgãos para pessoas que vivem com diabetes complicado. Esse método também permitirá compreender melhor a lesão de isquemia-reperfusão e identificar biomarcadores de lesão pancreática.
A configuração pode ser um pouco complicada, e considerando que o pâncreas é um órgão muito sensível, a prática para sua recuperação é necessária. Para começar, desinfete e cubra o campo cirúrgico. Realizar incisão mediana desde o xifoide até a sínfise púbica e estender o campo cirúrgico com incisão lateral esquerda para melhor exposição.
Dissecar a veia cava inferior da aorta abdominal. Libere ainda mais a aorta do tecido circundante e ligue os pequenos ramos da aorta lombar. Identificar e colocar ligaduras ao redor de ambas as artérias renais.
Uma vez que o dorso da aorta esteja livre, passe duas ligaduras ao seu redor, onde a ligadura inferior acabará sendo amarrada logo acima da bifurcação da artéria ilíaca, e a ligadura superior será amarrada cinco centímetros acima da gravata anterior. Depois de dissecar o hilo hepático, amarre todas as artérias o mais próximo possível do fígado. Em seguida, identifique o ducto biliar comum.
Coloque duas ligaduras próximas ao fígado e divida a estrutura. Em seguida, identifique e disseque ao redor da porção supra-hepática da aorta e coloque uma gravata ao redor dela. Em seguida, abra o saco menor para permitir que o gelo resfrie o pâncreas e mobilize o pâncreas o mínimo possível antes da lavagem.
Em seguida, administrar 500 unidades internacionais de heparina por quilograma de peso do doador através da linha central, e iniciar a coleta de sangue em bolsas de citrato, fosfato, dextrose, soro fisiológico, adenina, glicose e manitol utilizando o cateter jugular. Após amarrar a ligadura da aorta inferior, canular a aorta com uma linha de nivelamento acima do laço da bifurcação ilíaca. Fixar a cânula com o laço superior e ligar ambas as artérias renais.
Uma vez que o sangue suficiente tenha sido coletado, amarre a aorta supracelíaca e coloque uma pinça acima da gravata. Em seguida, inicie um flush com a University of Wisconsin Preservation Solution. Em seguida, corte uma abertura na veia porta e cava para ventilação.
Depois de lavar um litro da University of Wisconsin Solution avaliar a cauda do pâncreas e duodeno C-loop. E uma vez adequadamente lavado, iniciar a dissecção identificando e pinçando os vasos mesentéricos. Recuperar o enxerto pancreático, e um segmento da cava ou veia ilíaca, para extensão da veia porta.
E coloque o órgão dentro de uma bolsa de órgãos que é colocada dentro de uma bacia cheia de gelo. Depois de remover a linha de lavagem da parte distal da aorta, feche-a com uma gravata e encha a bolsa do órgão com a solução de UW restante. Em seguida, realizar extensão da veia porta utilizando cava ou veia ilíaca previamente recuperada com Prolene 6-0 e canular a veia porta e aorta proximal com um quarto vezes 3/8 Redutor.
Em seguida, canular a parte distal do duodeno com um cateter Malecot e amarrar. Em seguida, pinçar a extremidade do cateter para evitar derramamento de conteúdo duodenal e supervisionar os vasos mesentéricos com Prolene 4-0. Após o registro do peso do enxerto, mantê-lo em câmara fria estática até o início da Perfusão Ex Vivo do Pâncreas.
Coloque a câmara do pâncreas sobre uma mesa Mayo e introduza a tubulação arterial e venosa através dos orifícios destinados a este fim. Conecte e ligue a unidade aquecedora externa. Depois de colocar o tubo de sucção dentro da bomba de roletes, conecte uma extremidade à tubulação que sai da câmara para coletar os fluidos, e a outra extremidade ao reservatório venoso para coletar toda a perda de perfusato do órgão.
Em seguida, conecte a tubulação de oxigênio ao tanque de gás que contém a mistura de carbono e ao oxigenador. Em seguida, conecte a tubulação da unidade da bomba de aquecimento ao oxigenador. Linhas de pinça arterius e de saída venosa, bem como a saída do reservatório venoso.
Após o preenchimento do reservatório venoso com o perfusato, administrar continuamente o vasodilatador a oito mililitros por hora na linha arterial, utilizando uma bomba de seringa. Em seguida, usando uma segunda bomba de seringa, administre continuamente o inibidor enzimático diretamente no reservatório venoso. Depois de ligar a máquina coração-pulmão, ligue os painéis de pressão, temperatura e temporizador.
Em seguida, ligue a bomba de aquecimento para aquecer a solução de perfusão a 38 graus Celsius e abra o suprimento de dióxido de carbono de oxigênio. Em seguida, retire a pinça de tubulação colocada na saída do reservatório venoso e ligue a bomba centrífuga, levando-a até 1.500 RPM. Em seguida, pinça a tubulação contornando o filtro arterial.
E liberar ar do filtro arterial. Em seguida, zerar as linhas de pressão arterial e venosa. Depois de abrir a bolsa do órgão onde o pâncreas está armazenado, lave com 200 mililitros de albumina através da cânula arterial.
Em seguida, retire o pâncreas do gelo e posicione-o dentro da câmara do órgão, garantindo que a tubulação arterial e venosa esteja livre de ar. Em seguida, após soltar a pinça do lado arterial, pinça o atalho entre a tubulação arterial e venosa. Assim que o sangue começar a sair da tubulação arterial, conecte a linha à cânula arterial.
Em seguida, ajuste a pressão arterial para 20 a 25 milímetros de mercúrio, regulando a velocidade da bomba centrífuga, e conecte a tubulação venosa assim que o sangue começar a sair da cânula venosa. Em seguida, administrar um frasco de verapamil diretamente no lado arterial quando o pâncreas estiver completamente conectado e nenhum sangramento de medida for observado. Após o registro dos vários parâmetros descritos no manuscrito.
Colher as amostras para análise. Desconectar a tubulação arterial e venosa quando a perfusão terminar. depois de remover o enxerto da câmara do órgão, lave com solução fria da Universidade de Wisconsin e pese.
Em seguida, armazenar o enxerto em gelo em uma bolsa de órgão estéril até o momento do transplante. A pressão e o fluxo foram medidos através de toda a perfusão, e os resultados demonstraram que ela permanece estável. A atividade metabólica foi estimada pelo cálculo do consumo médio de oxigênio do enxerto.
Os resultados mostram que as medidas de pH, sódio, cálcio e bicarbonato estiveram dentro dos valores fisiológicos durante toda a perfusão. Observou-se que os níveis de lactato e potássio diminuíram durante a perfusão e atingiram valores próximos do normal em três horas. Como o circuito é um sistema fechado, esperava-se que os níveis de amilase e lipase aumentassem durante a perfusão.
Entretanto, o aumento dos níveis não parece correlacionar-se com o dano ao enxerto. É muito importante lembrar que o pâncreas deve ser manipulado o mínimo possível antes da lavagem e durante a extração. Esperamos que, no futuro, esse modelo permita intervenções terapêuticas para reparar órgãos impróprios para transplante.
Essa técnica permitirá aos pesquisadores aprofundar o estudo da lesão de isquemia-reperfusão do pâncreas, preservação, avaliação e, eventualmente, reparo.
