Il trapianto di pancreas è un trattamento curativo per le persone con diabete. Tuttavia, gli organi sono scarsi e sono necessarie strategie per migliorare il pool di donatori. Normothermic Ex Vivo Perfusion ha già avuto successo per altri organi che potrebbero potenzialmente consentire la valutazione e la riparazione degli allotrapianti pancreatici.
Il pancreas è l'organo più spesso scartato per il trapianto. Questa tecnica ha il potenziale per aumentare il pool di organi per le persone che vivono con diabete complicato. Questo metodo ci permetterà anche di comprendere meglio il danno da ischemia-riperfusione e identificare i biomarcatori del danno al pancreas.
La configurazione può essere un po 'complicata e, considerando che il pancreas è un organo molto sensibile, è necessaria la pratica per il suo recupero. Per iniziare, disinfettare e coprire il campo chirurgico. Eseguire un'incisione della linea mediana dalla sinfisi xifoidea alla sinfisi pubica ed estendere il campo chirurgico con un'incisione laterale sinistra per una migliore esposizione.
Sezionare la vena cava inferiore dall'aorta addominale. Liberare ulteriormente l'aorta dal tessuto circostante e ligare i piccoli rami aortici lombari. Identificare e posizionare le legature intorno a entrambe le arterie renali.
Una volta che la parte posteriore dell'aorta è libera, passare due legature intorno ad essa dove la legatura inferiore sarà eventualmente legata appena sopra la biforcazione dell'arteria iliaca, e la legatura superiore sarà legata cinque centimetri sopra la cravatta precedente. Dopo aver sezionato l'ilo epatico, legare tutte le arterie il più vicino possibile al fegato. Quindi identificare il dotto biliare comune.
Posizionare due legature vicino al fegato e dividere la struttura. Successivamente, identificare e sezionare intorno alla porzione sovraepatica dell'aorta e posizionare un legame intorno ad esso. Quindi, aprire il sacco minore per consentire al ghiaccio di raffreddare il pancreas e mobilizzare il pancreas il meno possibile prima di sciacquare.
Quindi somministrare 500 unità internazionali di eparina per chilogrammo di peso del donatore attraverso la linea centrale e iniziare la raccolta del sangue in sacche di citrato, fosfato, destrosio, soluzione salina, adenina, glucosio e mannitolo utilizzando il catetere giugulare. Dopo aver legato la legatura aortica inferiore, cannulare l'aorta con una linea di lavaggio sopra il legame di biforcazione iliaca. Fissare la cannula con la cravatta superiore e ligare entrambe le arterie renali.
Una volta che è stato raccolto abbastanza sangue, legare l'aorta sopraceliaca e posizionare un morsetto sopra la cravatta. Quindi, avviare un flusso con la soluzione di conservazione dell'Università del Wisconsin. Quindi tagliare un'apertura nella vena porta e cava per lo sfogo.
Dopo aver lavato un litro di soluzione dell'Università del Wisconsin, valutare la coda del pancreas e il C-loop del duodeno. E una volta adeguatamente lavato, inizia la dissezione identificando e bloccando i vasi mesenterici. Recuperare l'innesto pancreatico e un segmento della vena cava o iliaca, per l'estensione della vena porta.
E metti l'organo all'interno di una borsa d'organo che viene posta all'interno di una bacinella piena di ghiaccio. Dopo aver rimosso la linea di lavaggio dalla parte distale dell'aorta, chiuderla con una cravatta e riempire la sacca dell'organo con la soluzione UW rimanente. Quindi, eseguire l'estensione della vena porta utilizzando cava o vena iliaca precedentemente recuperata con 6-0 Prolene e cannulare la vena porta e l'aorta prossimale con un quarto volte 3/8 Reducer.
Quindi cannulare la parte distale del duodeno con un catetere Malecot e una cravatta. Quindi bloccare l'estremità del catetere per evitare la fuoriuscita di contenuto duodenale e supervisionare i vasi mesenterici con 4-0 Prolene. Dopo aver registrato il peso dell'innesto, conservare l'innesto in celle frigorifere statiche fino all'inizio della perfusione pancreatica Ex Vivo.
Posizionare la camera del pancreas su un tavolo Mayo e introdurre il tubo arterioso e venoso attraverso i fori destinati a questo scopo. Collegare e accendere l'unità riscaldante esterna. Dopo aver posizionato il tubo di aspirazione all'interno della pompa a rulli, collegare un'estremità al tubo che esce dalla camera per raccogliere i fluidi e l'altra estremità al serbatoio venoso per raccogliere tutta la perdita d'organo di perfuffato.
Quindi collegare il tubo dell'ossigeno al serbatoio del gas contenente la miscela di carbonio e l'ossigenatore. Quindi collegare il tubo dell'unità pompa del riscaldatore all'ossigenatore. Morsetto arterio e linee di deflusso venoso, nonché il deflusso del serbatoio venoso.
Dopo aver riempito il serbatoio venoso con il perfuffato, utilizzando una pompa a siringa somministrare continuamente il vasodilatatore a otto millilitri all'ora nella linea arteriosa. Quindi, utilizzando una seconda pompa a siringa, somministrare continuamente l'inibitore enzimatico direttamente nel serbatoio venoso. Dopo aver acceso la macchina cuore-polmone, avviare i pannelli di pressione, temperatura e timer.
Quindi accendere la pompa del riscaldatore per riscaldare la soluzione di perfusione a 38 gradi Celsius e aprire l'alimentazione di anidride carbonica di ossigeno. Quindi rimuovere il morsetto del tubo posto sul deflusso del serbatoio venoso e avviare la pompa centrifuga, portandola fino a 1.500 giri / min. Quindi, bloccare il tubo bypassando il filtro arterioso.
E rilasciare aria dal filtro arterioso. Successivamente, azzerare le linee di pressione arteriosa e venosa. Dopo aver aperto la sacca dell'organo in cui è conservato il pancreas, sciacquare con 200 millilitri di albumina attraverso la cannula arteriosa.
Quindi rimuovere il pancreas dal ghiaccio e posizionarlo all'interno della camera dell'organo, assicurandosi che i tubi arteriosi e venosi siano privi di aria. Successivamente, dopo aver rilasciato il morsetto dal lato arterioso, bloccare la scorciatoia tra il tubo arterioso e venoso. Una volta che il sangue inizia a uscire dal tubo arterioso, collegare la linea alla cannula arteriosa.
Quindi impostare la pressione arteriosa a 20-25 millimetri di mercurio regolando la velocità della pompa centrifuga e collegare i tubi venosi una volta che il sangue inizia a fuoriuscire dalla cannula venosa. Quindi, somministrare un flaconcino di verapamil direttamente sul lato arterioso quando il pancreas è completamente collegato e non si osservano sanguinamenti di misura. Dopo aver registrato i vari parametri come descritto nel manoscritto.
Prendi i campioni per l'analisi. Scollegare il tubo arterioso e venoso quando la perfusione è finita. dopo aver rimosso l'innesto dalla camera dell'organo, sciacquare con la soluzione fredda dell'Università del Wisconsin e pesare.
Quindi conservare l'innesto su ghiaccio in una sacca sterile fino al momento del trapianto. La pressione e il flusso sono stati misurati attraverso l'intera perfusione e i risultati hanno dimostrato che rimane stabile. L'attività metabolica è stata stimata calcolando il consumo medio di ossigeno dell'innesto.
I risultati mostrano che le misurazioni di pH, sodio, calcio e bicarbonato erano all'interno dei valori fisiologici durante l'intera perfusione. È stato osservato che i livelli di lattato e potassio sono diminuiti durante la perfusione e hanno raggiunto valori vicini alla norma a tre ore. Poiché il circuito è un sistema chiuso, ci si aspettava che i livelli di amilasi e lipasi aumentassero durante la perfusione.
Tuttavia, l'aumento dei livelli non sembra correlato con il danno all'innesto. È molto importante ricordare che il pancreas deve essere manipolato il meno possibile prima del lavaggio e durante l'estrazione. Speriamo che in futuro questo modello consenta interventi terapeutici per riparare organi non adatti al trapianto.
Questa tecnica consentirà ai ricercatori di studiare ulteriormente il danno da ischemia-riperfusione del pancreas, la conservazione, la valutazione e, infine, la riparazione.
