A recorrência tumoral é uma das principais causas de falha do esquema de ressecção cirúrgica do GBM. Nosso protocolo fornece um modelo único de recorrência de GBM para estudos eficazes de tratamento local de recidiva, pós-pesquisa. Esta técnica fornece um método conveniente e viável para construir o modelo pós-ressecção de recidiva de GBM, e pode ser usada em vários estudos sobre recidiva de GBM.
Comece preparando o animal. Corte o couro cabeludo do rato cerca de um centímetro ao longo da linha média na testa direita com tesoura oftálmica. Ajuste o aparelho estereotáxico para garantir que a costura da espinha de arenque e o ponto da fontanela frontal estejam localizados no mesmo nível.
Usando um cotonete mergulhado em violeta geniana, marque um ponto em um milímetro para a frente, 1,8 milímetros para a direita e três milímetros para baixo da fontanela frontal. Perfure o ponto usando uma minibroca craniana de um milímetro de diâmetro. Crie um poro de cerca de um milímetro de diâmetro e um milímetro de profundidade.
Remova o líquido cefalorraquidiano exsudado com um cotonete estéril. Em seguida, aspirar cinco microlitros de suspensão de células tumorais com uma microseringa. Alinhe a ponta da agulha da microseringa verticalmente com o orifício de perfuração do crânio e insira até que a ponta da agulha entre no plano do crânio por três milímetros.
Em seguida, retraia a agulha em 0,5 milímetros. Abra a microseringa e injete a solução a uma velocidade de um microlitro por minuto. Retenha a agulha durante 10 minutos após a injeção.
Em seguida, retire a microseringa lentamente e pressione o ponto de injeção com uma bola de algodão estéril e seca. Sutura do couro cabeludo com sutura cirúrgica inabsorvível 10-0 e desinfecção da incisão. Monitorar a saúde do animal e mantê-lo em condições quentes.
Depois que o rato acordar, mova-o de volta para a gaiola da caixa. 10 dias após a realização do tumor, detectar o tumor transplantado. Para isso, injete o camundongo intraperitonealmente com fluoresceína de potássio e, 11 segundos depois, faça uma imagem do camundongo com um sistema de imagem bioluminescente in vivo.
Separe o tecido do couro cabeludo e o crânio e verifique o orifício de perfuração usado para construir o modelo ortotópico intracraniano de GBM. Se o orifício tiver cicatrizado, identifique o orifício usando aparato estereotáxico e faça o furo como mostrado anteriormente. Expanda todo o diâmetro para cinco milímetros com uma broca de crânio e remova o líquido cefalorraquidiano exsudado com um cotonete estéril.
Concentre o microscópio na cabeça do mouse e ajuste as configurações para garantir que o furo de perfuração esteja localizado no centro do campo de visão. Corte as meninges com microtesoura. Em seguida, remova parte do tecido tumoral com uma microcureta e microbisturi sob o microscópio.
Pare o sangramento com gaze estéril e lave a injeção com soro fisiológico estéril. Usando uma seringa de um mililitro, injete 10 microlitros do hidrogel comercialmente disponível na cavidade de ressecção. Usando este protocolo, as células GBM foram implantadas no cérebro dos camundongos e o crescimento do tumor foi testado por imagem bioluminescente in vivo no dia 10.
A ressecção e injeção de hidrogel foram realizadas no 11º dia. O tamanho dos tumores no modelo de recidiva pós-ressecção do GBM foi significativamente menor do que no modelo do GBM intracraniano ortotópico. O monitoramento do crescimento tumoral residual no 25º dia mostrou recidiva dos tumores.
A coloração H&E confirmou que o modelo de recidiva pós-ressecção do GBM foi construído com sucesso e que os tumores residuais recorreram significativamente após a ressecção. A coisa mais importante a lembrar neste procedimento é cortar as meninges e remover parte do tecido tumoral sob o microscópio.
