Minha pesquisa explora os potenciais mecanismos patogênicos comuns que ligam a síndrome de Sjögren primária e o adenocarcinoma por meio de insights de bioinformática e verificação experimental. Meu objetivo é entender como essas condições se interpõem e os fatores subjacentes que contribuem para o relacionamento. Minha pesquisa aborda a lacuna na compreensão da ligação entre a síndrome de Sjögren primária e o adenocarcinoma, destacando seus mecanismos patogênicos compartilhados.
Essa percepção veio de futuras estratégias diagnósticas e terapêuticas para pacientes afetados. Em pesquisas futuras, esperamos colaborar com a cirurgia torácica para obter amostras cirúrgicas pulmonares de pacientes com SSP para ilustrar a progressão da infiltração de linfócitos para locais proximais neoplásicos Para começar, abra o banco de dados Gene Expression Omnibus ou GEO e use a síndrome de Sjögren primária e o adenocarcinoma de pulmão como palavras-chave para pesquisar perfis de expressão gênica. Clique nos resultados no banco de dados GEO DataSets e selecione Homo sapiens em Top Organisms.
Selecione e baixe o conjunto de dados de interesse, juntamente com as informações da plataforma correspondentes. Em seguida, abra o banco de dados GeneCard e use a síndrome de Sjögren primária e o adenocarcinoma de pulmão como palavras-chave para obter os genes relacionados a pSS e LUAD. Baixe as planilhas dos genes da doença.
Usando o software R, identifique e visualize genes ou DEGs diferencialmente expressos com um valor de P ajustado inferior a 0,05 e uma alteração de dobra maior que 1,2 ou menor que 0,83. Compare e analise a expressão gênica entre esses conjuntos de dados. Selecione genes com um nível de expressão maior ou igual a 20 relacionados a pSS e LUAD do banco de dados GeneCard.
Mescle os DEGs associados a pSS e LUAD do banco de dados GEO e do banco de dados GeneCard. Depois de instalar o pacote Venn Diagram no software R, obtenha e visualize os DEGs associados ao pSS e LUAD. No site do Metascape, clique em Selecionar arquivo e carregue o arquivo de formato xlsx do pSS-LUAD-DEGs.
Escolha Homo sapiens para Input como species e Analysis como species. Clique em Análise Personalizada, clique em Enriquecimento e selecione o caminho KEGG. Desmarque as outras opções.
Clique em Análise de Enriquecimento e, depois de concluído, clique em Página do Relatório de Análise. Clique em Tudo em um arquivo Zip para baixar os resultados. Acesse o _FINAL_GO.
csv na pasta Enrichment_GO para visualizar os resultados. Usando o pacote ggplot2 no software R, execute o programa de visualização KEGG. Para ontologia genética ou análise de enriquecimento GO, importe a lista de formato de texto de pSS-LUAD-DEGs para R.Execute os pacotes Cluster Profiler e Enrich Plot para análise de enriquecimento GO e visualização de resultados.
Definir significância estatística na análise em um valor de P ajustado inferior a 0,05. Acesse o banco de dados STRING e clique em Procurar e faça upload do arquivo de pSS-LUAD-DEGs. Selecione Homo sapiens em Organismos e clique em Pesquisar.
Após clicar em Continuar, quando os resultados estiverem disponíveis, clique em Configurações. Em Configurações básicas e pontuação mínima de interação necessária, selecione alta confiança 0,7. Marque ocultar nós desconectados na rede em Configurações avançadas e clique em Atualizar.
Clique em Exportações na barra de título para baixar a interação proteína-proteína ou o texto da relação PPI no formato TSV. No software Cytoscape 3.7.1, clique em Arquivo, seguido de Importar e Rede do Arquivo para importar o arquivo de formato TSV para construir a rede PPI. Use a ferramenta NetworkAnalyzer para analisar os parâmetros topológicos na rede e otimizar o tamanho e a cor do nó por meio da barra de estilo no painel de controle.
Na barra de menus, selecione Ferramentas e Analisar Rede. No painel da tabela, clique em Grau para classificar os componentes por grau em ordem decrescente. Para a identificação e validação de genes de hub, importe a lista de formatos de texto de genes de hub para o R carregado com o pacote PROC.
Plote a característica de operação do receptor ou as curvas ROC dos genes do hub e calcule a área sob os valores da curva ROC. Um total de 233 DEGs compartilhados entre DEGs pSS e DEGs LUAD foram visualizados usando um diagrama de Venn após a análise. As 10 principais vias KEGG significativas para pSS LUAD DEGs foram identificadas e associadas principalmente a vias metabólicas, incluindo PI3K-Akt, MAPK e interações citocina-receptor de citocina.
A análise de enriquecimento GO de pSS LUAD DEGs revelou processos biológicos significativos, incluindo resposta ao vírus e resposta imune inata, categorias de componentes celulares e funções moleculares como ligação e atividade do receptor de citocinas. A rede PPI compreendia 99 nós e 466 arestas, identificando STAT3, STAT1 e TP53 como os principais genes do hub. Os 20 principais genes com graus mais altos na rede PPI foram visualizados, incluindo TNF, IL6 e EGFR.
Para começar, realize análises de bioinformática para determinar as vias inflamatórias na co-ocorrência da síndrome de Sjögren primária e adenocarcinoma de pulmão. Para desenvolver o modelo animal, posicione um camundongo anestesiado em um pequeno animal de contenção com o abdômen voltado para cima, a cabeça elevada e a cauda abaixada em um ângulo de 45 graus. Use linha fina para enrolar os incisivos superiores do mouse, puxando-os para cima, e prenda a rosca em um parafuso no suporte do animal para expor totalmente a cavidade oral do mouse.
Depois de acender a lâmpada de luz fria, use uma pinça para puxar suavemente a língua do mouse e expor totalmente a glote. Insira uma agulha venosa de calibre 18 na traqueia do camundongo e retire o núcleo da agulha. Coloque um fio de algodão na extremidade externa da agulha e confirme a inserção bem-sucedida quando o fio se mover com os movimentos do peito do mouse.
Usando uma seringa de um mililitro, aspire 0,2 mililitros de ar, depois 0,1 mililitros de suspensão PM 2,5 e, finalmente, mais 0,2 mililitros de ar. Injete a mistura na traqueia através da agulha venosa de calibre 18. Depois de retirar a agulha de demora, prenda o porta-animais na posição vertical e gire-o no sentido horário e anti-horário 30 vezes para distribuir uniformemente a suspensão PM 2.5 nos pulmões.
Estenda o pescoço do rato reto e coloque-o de lado para evitar asfixia e deixe-o se recuperar. Após 29 dias, coloque o camundongo sacrificado em decúbito dorsal em uma placa de dissecação limpa. Usando tesouras e pinças, remova a pele e os músculos que cobrem as regiões ventral, torácica e do pescoço.
Faça incisões ao longo das bordas das costelas em ambos os lados da cavidade torácica para expor a cavidade torácica. Corte a clavícula para criar uma abertura larga o suficiente para o exame dos lobos pulmonares. Extirpar os músculos do pescoço que se estendem do esterno e costelas até a mandíbula.
Insira uma tesoura abaixo da borda anterior das costelas e faça incisões em ambos os lados para remover a porção óssea que cobre a traqueia. Segure a traqueia perto da mandíbula com uma pinça e faça uma incisão transversal completa usando uma tesoura colocada acima da pinça. Em seguida, puxe suavemente a traqueia com uma pinça, cortando as conexões do tecido ventral com uma tesoura até que todo o tecido torácico seja removido do corpo.
Coloque os pulmões planos e enxágue a superfície com solução salina. Depois de secá-lo, alíquota do tecido em criotubos para armazenar a 80 graus Celsius negativos para uso bioquímico futuro.
