Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Этот протокол повторяет физиологическим или патологическим поток крови в пробирке, чтобы помочь в определении клеточного ответа в патологии заболевания. Вводя давление демпфирования камеру вниз по течению от насоса крови, кровоток через сосудистую может быть наложен воспроизводятся и на монослой эндотелия сосудов или миметического совместного культивирования.
Сосудистые заболевания является частой причиной смерти в Соединенных Штатах. Здесь мы представляем метод для изучения вклада динамики потока к патологии сосудистого заболевания. Нездоровые артерии часто присутствует с настенным жесткости, рубцов, стеноза или частичное, которые могут повлиять на все скорости потока жидкости, и величина пульсирующего потока, или индексом пульсации. Репликация различных условий потока является результатом настройки давления потока демпфирующей камере ниже по потоку от насоса крови. Введение воздуха в системе замкнутого потока позволяет сжимаемой среды поглощать ударные давление от насоса, и, следовательно, изменяются индекс пульсации. Описываемый способ просто воспроизводить, с высоко контролируемого ввода и легко измеримых результатов. Некоторые ограничения воссоздание комплекса физиологической формы импульса, который только приближенно системой. Эндотелиальные клетки, клетки гладких мышц и фибробласты страдают от Thr кровотокаух артерию. Динамический компонент кровотока определяется выходной и артериальной стенки соответствии сердечной. Сосудистая клеток механо-трансдукции динамики потоков может вызвать высвобождение цитокинов и перекрестные помехи между типами клеток внутри артерии. Совместное культивирование клеток сосудов является более точная картина отражает взаимодействие клетка-клетка на стенки кровеносных сосудов и сосудов ответ на механическое сигнализации. Вклад динамики потоков, в том числе клеточного ответа на динамических и средних (или стационарных) компонентов потока, поэтому важным показателем в определении патологии заболевания и эффективность лечения. Путем внедрения в пробирке модель совместного культивирования и давление демпфирования ниже насоса крови, которая производит имитацию сердечного выброса, различные патологии артериальной болезни могут быть исследованы.
Заболеваемость сердечно-сосудистых заболеваний являются крупнейшим в Америке, многие в результате нездорового сосудов. Здоровые артерии состоят из эластичной ткани, с мягкой поверхности просвета покрытого эндотелиальных клеток (EC) монослоя. Артериальная потока может быть смоделирована как колебательной волновой функции с положительной средней скорости потока. Индекс пульсации (PI) является фактором колебаний величины и среднего потока (PI = (Макс. - Мин.) / Среднее), 1 и был смоделирован в пробирке с переменной эластичностью сосудов 2 эластичности артерий является важным хранения потока. энергия сердечных сокращений, расширяя ....
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
1. силанизация и биомолекулы Функционализация Slide или поликарбонат Мембрана
Примечание: Многие из химических веществ и решений в этом протоколе имеют высокие скорости испарения (этанол (EtOH), ацетон и т.п.). Другие шаги влекут за собой длинные времени инкубации для малых скоростей испарения. Парафин фильм рекомендуется для герметизации контейнеров. Внимание: Многие из химических веществ (в том числе: серная кислота, ацетон, (3-аминопропил) триэтоксисилана, глутаровый альдегид, этанол), считаются опасными или летучими. Обратитесь паспорт безопасности материала (MSDS) каждого материала для надлежащего хранения, обработки и утилиза....
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Обеспечение условий потока зависит от правильной сборки схемы потока (рис 1). Диаметр трубки является важным выбора в сборе, с большими диаметрами, снижающих сопротивление течению и последующее падение давления до и после культивирования камеры. Для обеспечения скорости, пред.......
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Этот протокол описан способ воспроизведения потока пульсирующего в пробирке, и может играть важную роль первый шаг в определении вклада условий потока в патологии болезни. Предыдущие исследования, использующие этот протокол нашли условия потока способствуют сосудистой воспали?.......
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Авторы хотели бы выразить признательность источников финансирования, в том числе AHA (13GRNT16990019 для WT) и NHLBI (HL097246 и HL119371 к WT).
....Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Acetone | Sigma-Aldrich | 34850 | |
Sulfuric Acid | Sigma-Aldrich | 320501 | |
(3-Aminopropyl)triethoxysilane | Sigma-Aldrich | 440140 | |
Glutaraldehyde Solution | Sigma-Aldrich | G5882 | |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 459844 | |
Glass Slide (70 mm x 50 mm) | Sigma-Aldrich | CLS294775X50 | |
Polycarbonate Membrane | Millipore Corp. | HTTP09030 | |
Silicone Gasket | Grace Bio-Labs | RD 475464 | |
Fibronectin (25 μg/ml) | Sigma-Aldrich | F1141 | |
Collagen Type-I | Sigma-Aldrich | C3867 | |
NaHCO3 | Fluka | 36486 | |
NaOH | Sigma-Aldrich | S5881 | |
Damping Chamber | This chamber is custom made, and may be requested using the engineering drawing of Figure 3. | ||
Blood Pump | Harvard Apparatus | 529552 | |
Poly-Vinyl Carbonate Tubing | US Plastic | 65066, 65063, 65062 | Various sizes may be required |
Luer Connections | Nordson Medical | Various | Various sizes will be required, and a number of parts should be purchased for replacement use. |
Culture Chamber | Machined in-house | Custom | Acrylic may be purchased in sheets and machined for intended use. The engineering drawing shown in Figure 2 may be used to recreate this chamber. |
Square Petri Dish | Cole-Parmer | EW-14007-10 | |
Glass Slide Holder | Capitol Scientific | WHE-900303 | |
Fetal Bovine Serum | Mediatech, Inc. | 35-010-CV | |
Dulbecco's Modified Eagle Medium | Mediatech, Inc. | 10-013-CV | |
Flow Meter | Sonotec, GmbH | Sonoflow co.55/060 | |
Sylgard Elastomer Kit | Sigma-Aldrich | 761036-5EA | |
14 G Steel Cannula | General Laboratory Supply | S8365-1 |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены