Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Кишечник жизненно важен для пищеварения и всасывания. Каждый регион – двенадцатиперстная кишка, тощая кишка, подвздошная кишка, толстая кишка – выполняет различные функции благодаря уникальным клеточным структурам. Изучение физиологии кишечника требует тщательного анализа тканей. Этот протокол описывает фиксацию и обработку тканей с использованием швейцарского вала, обеспечивая точное иммуноокрашивание за счет правильного сохранения и ориентации тканей.
Кишечник – сложный орган, состоящий из тонкой и толстой кишки. Тонкую кишку можно разделить на двенадцатиперстную кишку, тощую кишку и подвздошную кишку. Каждая анатомическая область кишечника обладает уникальной функцией, которая отражается в различиях в клеточной структуре. Исследование изменений в кишечнике требует глубокого анализа различных областей тканей и клеточных изменений. Чтобы изучить кишечник и визуализировать большие куски ткани, исследователи обычно используют технику, известную как кишечные швейцарские булочки. При этой методике кишечник делится на каждую анатомическую область и фиксируется в плоской ориентации. Затем ткань аккуратно сворачивают в рулон и обрабатывают для заделки парафина. Правильная фиксация и ориентация тканей — это часто упускаемый из виду лабораторный метод, но он критически важен для последующего анализа. Кроме того, неправильное швейцарское скручивание кишечной ткани может повредить хрупкий эпителий кишечника, что приведет к ухудшению качества тканей для иммуноокрашивания. Обеспечение хорошо закрепленной и правильно ориентированной ткани с неповрежденными клеточными структурами является важным шагом, обеспечивающим оптимальную визуализацию клеток кишечника. Мы представляем экономичный и простой метод изготовления рулетов, включающий все отделы кишечника в один блок, залитый парафином. Мы также описываем оптимизированное иммунофлуоресцентное окрашивание кишечной ткани для изучения различных аспектов кишечного эпителия. Следующий протокол предоставляет исследователям исчерпывающее руководство по получению высококачественных иммунофлуоресцентных изображений с помощью фиксации кишечной ткани, метода Swiss-roll и иммуноокрашивания. Использование этих усовершенствованных подходов позволяет сохранить сложную морфологию кишечного эпителия и способствует более глубокому пониманию физиологии кишечника и патобиологии.
Клеточная архитектура кишечника представляет собой уникальную проблему в поддержании его структурной целостности, когда кишечная ткань сохраняется для иммуноокрашивания. Тонкая кишка состоит из удлиненных пальцевидных структур, известных как ворсинки1. Эти ворсинки часто деформируются в процессе внедрения. Обеспечение того, чтобы исследователи располагали методами правильного встраивания кишечника для получения поперечных сечений, позволяющих визуализировать все области кишечника, а также слои, составляющие кишечник (т.е. собственную мышечную мышцу, слизистую оболочку и серозу), имеет решающее значение для надежногоэксперимент....
Комитет по институциональному уходу за животными и их использованию Медицинского университета Южной Каролины одобрил весь уход, содержание и лечение животных. Кишечная ткань была собрана у взрослых мышей C57BL/6J (самцы и самки в возрасте 3-5 месяцев, массой около 30 г) для использования в настоящем исследовании.
1. Фиксация тканей кишечника
Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E) проводили, как описано ранее12. Используя оптимизированный метод, кишечные швейцарские булочки включали в себя все три сегмента тонкой кишки и толстой кишки на одном слайде. Размещение всего кишечника на предметном стекле позволяет.......
В этой статье мы представляем оптимизированный метод фиксации тканей с использованием швейцарского валка для сохранения архитектуры кишечника и обеспечения точного иммуноокрашивания. После освоения эта методика может быть использована для исследования широкого спектра исследоват?.......
Авторам нечего раскрывать.
Это исследование было поддержано грантами Национальных институтов здравоохранения (NIH) K01 DK121869 для ACE, а эта публикация была частично поддержана T32 GM132055 (RME), F31 DK139736 (SAD), T32 DK124191 (SAD), TL1 TR001451 (RS), UL1 TR001450 (RS) и грантами HCS Cornerstone для SAD & RS. Эта работа была поддержана стартовыми фондами от Медицинского университета Южной Каролины (MUSC) до ACE и была поддержана Центром исследований заболеваний пищеварительной системы MUSC (P30 DK123704) и COBRE в области заболеваний пищеварительной системы и печени (P20 GM120475). Визуализация была выполнена с использованием ядра клеточной и молекулярной визуализации в MUSC.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
β-CATENIN | GeneTex | GTX101435 | |
Cellulose filter paper | Cytiva | 10427804 | Thick Whatman paper |
Charged glass slides | Thermo Fisher Scientific | 23888114 | |
Coverslip | Epredia | 152440 | |
Dissecting pins size 00 | Phusis | B082DH4TZF | |
E-CADHERIN | R&D Systems | AF748 | |
Freezer gloves | Tempshield | UX-09113-02 | |
Heating block | Premiere | XH-2001 | Slide Warmer |
Histo-Clear II | Electron Microscopy Sciences | 64111-04 | Clearing reagent |
Hoescht | Thermo Fisher Scientific | 62249 | |
Hydrochloric Acid | Sigma Aldrich | 320331 | |
Hydrophobic pen | Millipore | 402176 | |
LAMININ | GeneTex | GTX27463 | |
LAMP1 | Santa Cruz | SC-19992 | |
Large cassettes | Tissue-Tek | 4173 | |
Minutien pins | Fine Science Tools | NC9679721 | |
Mouse-on-mouse blocking reagent | Vector Laboratories | MKB-2213 | Mouse-on-mouse block |
MUC2 | GeneTex | GTX100664 | |
PCNA | Cell Signaling Technology | 2586S | |
Pressure Cooker | Cuisinart | B000MPA044 | |
ProLong gold antifade | Thermo Fisher Scientific | P36934 | Mounting medium |
Reverse action forceps | Dumont | 5748 | |
Slide Rack | Tissue-Tek | 62543-06 | |
Slide Staining Set | Tissue-Tek | 62540-01 | Solvent Resistant Dishes and Metal Frame |
Small cassettes | Fisherbrand | 15-200-403B | |
Sodium citrate dihydrate | Fisher Bioreagents | BP327-1 | |
Teleostein Gelatin | Sigma | G7765 | Blocking buffer |
Triton X-100 | Thermo Fisher Scientific | A16046 | |
Tween 20 | Thermo Fisher Scientific | J20605-AP | |
Wipes | KimTech | 34155 | |
Xylenes | Fisher Chemical | 1330-20-7 | |
γ-ACTIN | Santa Cruz | SC-65638 |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены