Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
* Эти авторы внесли равный вклад
Капилляроскопия является доступным инструментом для прямой, недорогой и неинвазивной визуализации микроциркуляторного русла. Цель этого протокола состоит в том, чтобы дать возможность исследователям использовать капилляроскопию для визуализации периферической микрососудистой морфологии в ногтевых ложах мышей.
Визуализация микрокапиллярных сетей кожи человека с помощью капилляроскопии ногтевых складок (НФК) подчеркнула важность микроциркуляции как системы органов-мишеней при критических системных заболеваниях. Ногтевая капилляроскопия применяется в клинической практике для выявления периферической микрососудистой дисфункции и аномалий при ряде системных состояний, включая ревматические, сердечные, глазные (например, глаукома) и эндокринные расстройства (например, гипертонию и сахарный диабет). ЯТК полезен не только для выявления нарушения периферического системного микроциркуляторного русла, но и для оценки эффективности препарата. Тем не менее, перенос клинических результатов ЯТК на модели болезней животных может быть сложной задачей. Выявление микрососудистой дисфункции или аномалий у животных часто является инвазивным (например, эндоскопическим), проводится ex vivo (например, посмертная визуализация тканей) или дорогостоящим, требующим специализированного оборудования, такого как то, которое используется в методах микрокомпьютерной томографии и фотоакустической визуализации. Разработка быстрых, неинвазивных и недорогих методов визуализации периферического микроциркуляторного русла на животных моделях заболеваний оправдана для снижения затрат на исследования и повышения переносимости в клинику.
Капилляроскопия ранее использовалась для визуализации микроциркуляторного русла ногтевой складки на животных моделях, в том числе на морских свинках и мышах, тем самым демонстрируя возможности капилляроскопии в качестве неинвазивного инструмента визуализации на животных моделях. В этом исследовании представлен протокол, который применяет капилляроскопию к ногтевому ложу мыши, что позволяет исследователям легко и недорого оценить морфологию ее микроциркуляторного русла. Представлены репрезентативные изображения типичной микрососудистой архитектуры ногтевого ложа у мышей дикого типа с использованием двух широко используемых лабораторных штаммов, SV129/S6 и C57/B6J. Дальнейшие исследования с использованием этого метода имеют важное значение для применения капилляроскопии ногтевого ложа к широкому спектру моделей заболеваний мышей с периферическими микрососудистыми аномалиями.
Визуализация периферических микрокапиллярных сетей у человека с помощью капилляроскопии ногтевых складок (НКЦ) подчеркнула важность микроциркуляции как системы органов-мишеней при широком спектре системных заболеваний1. Капилляроскопия включает в себя использование микроскопа для увеличения и визуализации сосудов в ногтевой складке in vivo. Таким образом, этот метод широко используется в клинике для выявления периферических микрососудистых дисфункций и аномалий при ряде системных состояний, включая ревматические 2,3, сердечные4, глазные (например, глаукому)5,6, и эндокринные заболевания (например, гипертонию и сахарный диабет 7,8). Морфологические изменения в капиллярах ногтевой складки, включая кровоизлияния, повышенную извитость сосудов и аваскулярные области, легко обнаруживаются с помощью НГЦ. Эти морфологические аномалии представляют собой патологические процессы, такие как чрезмерное или недостаточное микрососудистое ремоделирование 9,10. NFC является полезным диагностическим инструментом для выявления этих патологий. Кроме того, эта методика полезна при оценке эффективности препарата11.
Тем не менее, перенос клинических результатов ЯТК на животные модели заболеваний является сложной задачей по многим причинам. Визуализация микроциркуляторного русла у животных обычно является инвазивной (например, эндоскопической), выполняется ex vivo (например, посмертная визуализация тканей) или дорогостоящей, требующей специализированного оборудования, такого как микрокомпьютерная томография12,13, когерентная томографияангиография 14 и методы фотоакустической визуализации15. Поскольку периферическая микрососудистая патология проявляется в широком спектре системных заболеваний и заболеваний центральной нервной системы, включая инфаркт миокарда16, гипертензию17, возрастные нейродегенерации центральной нервной системы, такие как болезнь Альцгеймера18, и оптические невропатии, такие как глаукома19, неинвазивный, экономически эффективный метод визуализации in vivo очень полезен.
Капилляроскопия была использована для оценки микроциркуляторного русла ногтевой складки на животных моделях, включая морских свинок20 и мышей21, тем самым продемонстрировав ее возможности в качестве неинвазивного инструмента визуализации. Здесь мы применяем капилляроскопию к другой части ногтя, к ногтевому ложу. Используя прозрачность ногтя мыши, гвоздевая капилляроскопия представляет собой новое место для визуализации периферического микроциркуляторного русла. По сравнению с NFC, который особенно полезен для мониторинга движения клеток крови 21,22, описанный здесь протокол капилляроскопии с гвоздевым стержнем обеспечивает большую площадь для лучшего наблюдения за морфологией и структурой микрососудов. Мы предоставляем протокол, который позволяет исследователям легко и недорого оценить морфологию микроциркуляторного русла мышиного ногтя, что является новым местом для неинвазивной визуализации периферических сосудов. Этот протокол обеспечивает репрезентативные изображения типичной микрососудистой архитектуры ногтевого ложа у мышей дикого типа с использованием двух широко используемых лабораторных штаммов (SV129/S6 и C57/B6J). Мы показываем, что гвоздевая капилляроскопия является недорогим, неинвазивным методом микрососудистой визуализации. Дальнейшие исследования с использованием этого исследовательского метода будут иметь важное значение для применения гвоздевой капилляроскопии к широкому спектру мышиных моделей заболеваний, где периферические микрососудистые аномалии очевидны при патологии.
Все описанные здесь методы были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию (IACUC) Медицинского центра Университета Вандербильта и Массачусетской больницы общего профиля.
1. Подготовка ногтей мыши к визуализации
ПРИМЕЧАНИЕ: Для оптимальной прозрачности сосудов и восстановления кожи подождите не менее 24 часов перед визуализацией.
2. Капилляроскопия ногтевого когтя in vivo
3. Сохранение изображений ногтевого ложа
С помощью описанного здесь метода капилляроскопии можно легко визуализировать морфологию сосудов ногтевого ложа, как показано на рисунке 4A. Типичная сосудистая сеть ногтевого отверстия у мыши обладает тремя постоянными особенностями, как показано н...
Таким образом, мы предоставляем протокол, позволяющий исследователям легко и недорого оценить морфологию микроциркуляторного русла мышиного ногтя, нового места для неинвазивной визуализации периферических сосудов. Как и методы NFC, используемые на морских свинках
Не имея отношения к этой работе, доктор Паскуале был оплачиваемым консультантом Twenty Twenty. Не связанная с этой работой, Клара Казинс является оплачиваемым консультантом Cartography Biosciences. Остальным авторам нечего раскрывать.
Эта работа финансировалась из неограниченных ведомственных фондов, предоставленных Лорен К. Уэрхэм. Доктор Паскуале получает поддержку от Фонда глаукомы (Нью-Йорк) и неограниченного гранта от Исследования по предотвращению слепоты (Нью-Йорк).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Anesthetic Charcoal Filter Cannister | ReFresh | EZ-258 | |
Capillaroscope | Jiahua Electronic Instrument Co., Jiangsu, China | JH-1004 | |
Compressed gas (5% carbon dioxide, 95% oxygen) | Airgas | UN3156 | |
Corn oil | Sigma | C8-267 | |
Debut video capture software | Debut | Available free online. | |
Eye spears | BVI Weck- Cel | 0008680 | For application and removal of hair removal cream. |
Hair removal cream | Nair | 610370323649 | |
Isoflurane 250 mL bottle | Piramal critical care | NDC 6679401725 | |
Lab jack | Fisherbrand | 14-673-52 | Used as a platform to hold the mouse. |
Nose cone (low profile anesthesia mask) | Kent Scientific | SOMNO-0801 | |
Transfer pipettes | Fisherbrand | 13-711-9AM | Apply corn oil generously to mouse paw as an immersion oil. |
USB Video capture card | VIXLW | BR116 | |
Vetequip | VWR | 89012-492 | Isoflurane equipment |
White labeling tape | Fisherbrand | 15-958 | Used to create a white/contrasting background under mouse paw when taking images. |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены