Изготовление квадратных пирамидальных микролунок для изготовления сфероидов опухолей

Для начала налейте два грамма или около одного миллилитра отрицательного раствора прекурсора PDMS на одну лунку из шестилуночной квадратной параметаллической мастер-формы. Накрыв мастер-форму PDMS, поместите пластину в вакуумную дегазацию для дегазации раствора. Затем поставьте тарелку в духовку при температуре 60 градусов Цельсия на 24 часа, чтобы отверждение PDMS.

Когда PDMS затвердеет, но все еще останется теплым, с помощью шпателя осторожно извлеките форму PDMS из основной формы. Затем с помощью пробойника для биопсии разрежьте его на плиту диаметром 35 миллиметров. Поместите правильно вырезанную форму PDMS в чашку Петри и накройте ее крышкой, чтобы продолжить отверждение при комнатной температуре еще на 24 часа.

Для приготовления положительной формы PDMS поместите 35-миллиметровую плиту негативной формы PDMS в 35-миллиметровую чашку Петри текстурированными микролунками вверх. Вылейте 2,5 грамма или около 1,2 миллилитра положительного раствора прекурсора PDMS на отрицательную форму в чашке Петри. Дегазируйте раствор прекурсора в течение 30 минут, прежде чем поместить его в духовку при температуре 60 градусов Цельсия на три-четыре часа.

После затвердевания выньте формочки из чашки Петри. Немедленно отделите положительную форму от отрицательной. Используйте 10-миллиметровый пуансон для биопсии, чтобы разрезать позитивные формы на плиты.

Затем с помощью пинцета аккуратно окуните плоскую сторону каждой 10-миллиметровой положительной формы в заранее приготовленный раствор прекурсора клея PDMS. Осторожно поместите по одной форме на лунку в лунку 48-луночной пластины. Аккуратно прижмите каждую формочку, чтобы приклеить ее к дну колодца.

Инкубируйте собранную пластину при температуре 60 градусов Цельсия в течение четырех-24 часов, чтобы клей застыл.