Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области вакцинологии слизистой оболочки, такие как, как кишечные слизистой оболочки поглощения биологических соединений и как такие биологические модулировать иммунную систему на местном сайте после инотубации. Основным преимуществом этого метода является то, что он прост в настройке, быстро, и показывает низкие показатели смертности. Этот метод может дать представление о слизистой вакцинологии.
Он также может быть применен к другим соединениям, таким как химические вещества, токсичные вещества или патогенные микроорганизмы. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, как и в устной инаблизации и кишечных шагов вскрытия, вы должны быть осторожны, потому что в intubation вы можете повредить зебры и привести к смерти. При вскрытии конец кишечника очень тонкий и хрупкий.
Поместите примерно один сантиметр тонкой силиконовой трубки на 31-калиберной игле Luer-lock. Вырезать стерильные 10-микролитровый фильтр пипетки кончик, принять тонкий конец, и поместить его на силиконовую трубку в качестве оболочки. Для начала прикрепите аппарат иглы к 100-микролитровому шприцу Luer-lock.
Во-первых, переместить рыбу в экспериментальные резервуары за одну ночь до начала эксперимента. Vortex хорошо подготовил раствор наночастиц и нарисует нужный объем подвески. После безопасной анестезии рыбы, используйте сетку, чтобы быстро передать рыбу на мокрый пластиковый лоток.
Сориентировать животное горизонтально, чтобы лицом к игле. Аккуратно поддержите рыбу одной рукой и откройте рот защищенной иглой. Затем аккуратно вставьте иглу вниз пищевода примерно на один сантиметр от отверстия рта.
Трудно понять, как далеко должна зайти игла, и это вопрос практики. Вы почувствуете иглу, как она находит остановку, а затем, манипулируя иглой, вы найдете правильный угол, чтобы вставить устройство немного больше. Медленно введать наночастицы подвески в рыбу, гарантируя, что подвеска не течет наружу через жабры или рот.
После этого аккуратно снимите иглу и поместите рыбу в восстановительный бак. Пока рыба восстанавливается, следите за рыбой на любые аномалии. Как только рыба выздоровеет, верните ее в один из экспериментальных резервуаров.
После усыпания рыбы в соответствии с текстовым протоколом, поместите рыбу на лист фильтровальной бумаги. Используя острые ножницы для вскрытия, сделайте полукруглый разрез от ануса до оперкулума и откройте разрез мелким пинцетом. Затем вырежьте оба конца кишечника, вывихйте все внутренние органы и поместите их на фильтровальную бумагу.
Далее отделяем кишечник от внутренних органов и растягиваем его, заботясь о том, чтобы получить весь кишечник. Наконец, используйте пинцет, чтобы свернуть кишечник на фильтровальную бумагу, чтобы отделить клейую ткань. Используя этот протокол, зебрафиш смешанного пола были успешно интубированы с различными рекомбинантными белковыми наночастицами.
С помощью самодельного прибора пероральной илюбимости был достигнут низкий средний процент смертности. Для оценки доставки флуоресцентных наночастиц инклюзивных тел, сделанных с рекомбинантной альфа-ТНФ, был проведен цитометрийный анализ. Общее количество флуоресцентных клеток было значительно выше в группе наночастиц, чем в контрольной группе, как через пять, так и через 24 часа после интубации.
Оборудование для инкубации недорогое, точное и многоразовое. Вся процедура инотубации может быть выполнена очень быстро одним оператором, и, что важно, метод согласуется между различными операторами. Сочетание нашего метода итубации с анализом ниже по течению может быть идеальным для разработки пероральной вакцины.
