Новый анализ бака будет сочетаться с мощными генетическими инструментами в Зебрафиш предлагает метод для вскрытия, как мозг модулирует стресс и как нейронные цепи могут быть дерегулированы. Генетические и нейронные сигнальные пути очень сохранены между зебрафиш и млекопитающих, и этот метод может помочь дальнейшему нашему пониманию механизмов, лежащих в основе реакции на стресс. Метод не специфичен для зебры и был использован с мексиканскими слепыми пещерными рыбами и поэтому потенциально может быть распространен на другие виды рыб.
Пробный запуск может быть полезным для определения надлежащего освещения и контраста животного на фоне для достижения успешного отслеживания. Анализ используется редко, но может быть вовлеченным процессом. Визуализация шагов поможет другим исследователям успешно выполнить процедуру.
Пост-док в лаборатории, и Лидия Альберт, студентка бакалавриата, будут демонстрировать эту процедуру. Начните с заполнения стакана 250 миллилитров и по крайней мере двух резервуаров с рыбной системой воды. Утром теста, перенесите по крайней мере 10 взрослых зебрафиш для каждого экспериментального состояния в отдельные резервуары для хранения, прежде чем передать всю рыбу в комнату поведения для акклиматизации, по крайней мере один час.
Наклейте этикетку на резервуары таким образом, чтобы состояние или генотип животных были слепы к экспериментатору и использовали сетку, чтобы аккуратно поместить одного взрослого в предварительно заполненный стакан. Позвольте взрослой рыбе акклиматизироваться в стакане в течение 10 минут, прежде чем аккуратно налить воду и рыбу из стакана в экспериментальный новый резервуар. Как только рыба находится в баке, начните запись камеры и отойдете от установки, чтобы предотвратить дополнительное бедствие для рыбы.
Когда запись закончена, удалите человека из нового бака и поместите рыбу в новый резервуар для хранения. Для оценки воздействия конкретных препаратов, представляющих интерес, разбавить препарат до рабочей концентрации в 250 миллилитров стаканов системной воды. Использование стакана с системной водой только в качестве контроля.
Маска личности наркотиков и контроля стаканов для обеспечения того, чтобы тестер слеп к условиям лечения до после анализа и выполнить новый тест танка, как попродемонстрировано, чтобы получить базовый поведенческий стресс ответ. В конце базовой записи используйте сетку для немедленной передачи рыбы в один из испытательных стаканов в течение 10 минут перед передачей рыбы в стакан для мытья, содержащий только пресную системную воду. Важно использовать отдельные сетки, предназначенные для каждого стакана лечения для предотвращения случайного досирования контрольной рыбы, особенно когда речь идет о нескольких медикаментозных препаратах.
Через 10 минут поместите рыбу в новый новый резервуар для второго нового испытания танка. В конце теста перенесите взрослую зебру рыбу в новый резервуар для хранения и замените системную воду во втором новом резервуаре пресной системной водой для следующего шага по предотвращению перекрестного загрязнения экспериментального препарата. В конце всех испытаний, вернуть лиц на рыбный объект.
Здесь показана локомотивная активность одной зебры в первую и последнюю минуту 10-минутного нового танкового теста. При первом введения в бак, рыба, как правило, проводят большую часть времени в нижней части нового танка. Со временем, однако, взрослые рыбы демонстрируют постепенное увеличение количества времени, затыкаемого в верхней части бака.
Действительно, общее время, проведенное в верхней части танка в течение первой минуты значительно короче по сравнению с последней минутой нового испытания танка. В отличие от этого, общее расстояние, пройденное между первой и последней минутами, не выявило существенных различий. В этом репрезентативном эксперименте анализ взрослых локомотивных путей зебры показал небольшую разницу между активностью плавания зебры до и после лечения для групп взрослых, подвергшихся воздействию транспортного средства в одиночку.
В отличие от этого, взрослые, подвергшиеся воздействию анксиолитического препарата, провели большое количество времени в верхней части бака по сравнению с локомотивными путями одной и той же рыбы до воздействия наркотиков. Эти различия не были обусловлены меньшим количеством передвижения в целом, поскольку ни для одной из групп не было измерено существенных различий в пройденном расстоянии. Поскольку поведенческие ритмы влияют на циркадные процессы, не забудьте провести экспериментальные репликации, выполняемые в разные дни в одно и то же время суток для каждого эксперимента.
Дополнительные поведенческие анализы, такие как открытый полевой тест или другие физиологические измерения стресса, могут быть выполнены для дальнейшей проверки результатов, полученных от нового теста танкового дайвинга. Этот метод может быть использован с высокой пропускной способностью для решения вопросов, связанных со стрессом, страхом и тревогой.
