Le nouvel essai de réservoir se combinera avec des outils génétiques puissants dans Zebrafish offre une méthode pour disséquer la façon dont le cerveau module le stress et comment les circuits neuronaux peuvent être déréglementés. Les voies de signalisation génétiques et neuronales sont fortement conservées entre le poisson zèbre et les mammifères et cette technique peut nous aider à mieux comprendre les mécanismes sous-jacents à la réponse au stress. La méthode n’est pas spécifique au poisson zèbre et a été utilisée avec les poissons aveugles mexicains des cavernes et peut donc potentiellement être étendue à d’autres espèces de poissons.
Une course d’essai peut être utile pour déterminer l’éclairage et le contraste appropriés de l’animal sur un fond pour réaliser le suivi réussi. L’essai est rarement utilisé, mais peut être un processus impliqué. La visualisation des étapes aidera d’autres chercheurs à exécuter la procédure avec succès.
Jacqueline Chin, post-doc au laboratoire, et Lydia Albert, étudiante de premier cycle, feront la démonstration de cette procédure. Commencez par remplir un bécher de 250 millilitres et au moins deux réservoirs de retenue avec de l’eau du système de poissons. Le matin de l’essai, transférer au moins 10 poissons zèbres adultes pour chaque condition expérimentale dans des réservoirs de retenue individuels avant de transférer tous les poissons à la salle de comportement pour l’aclimation pendant au moins une heure.
Étiquetez les réservoirs de telle sorte que l’état ou le génotype des animaux est aveugle à l’expérimentateur et utilisez un filet pour placer doucement un seul adulte dans le bécher prére rempli. Laissez les poissons adultes s’acclimater dans le bécher pendant 10 minutes avant de verser doucement l’eau et le poisson du bécher dans le nouveau réservoir expérimental. Dès que le poisson est dans le réservoir, commencer l’enregistrement de la caméra et s’éloigner de la configuration pour éviter une détresse supplémentaire pour le poisson.
Lorsque l’enregistrement est terminé, retirez l’individu du nouveau réservoir et placez le poisson dans un nouveau réservoir de détention. Pour évaluer les effets de médicaments spécifiques d’intérêt, diluer le médicament à une concentration de travail dans 250 millilitres de l’eau du système. Utilisation d’un bécher avec de l’eau système seulement comme un contrôle.
Masquer l’identité du médicament et contrôler les beakers pour s’assurer que le testeur est aveugle aux conditions de traitement jusqu’à ce qu’il post-analyse et effectuer un nouveau test de réservoir comme démontré pour obtenir une réponse de stress comportemental de base. À la fin de l’enregistrement de base, utilisez un filet pour transférer immédiatement le poisson dans l’un des béchers d’essai pendant 10 minutes avant de transférer le poisson dans un bécher de lavage contenant de l’eau du système frais seulement. Il est important d’utiliser des filets distincts désignés pour chaque bécher de traitement pour prévenir le dosage accidentel des poissons témoins, en particulier lorsque plusieurs traitements médicamenteux sont impliqués.
Après 10 minutes, placez le poisson dans un nouveau réservoir pour un deuxième essai de réservoir nouveau. À la fin de l’essai, transférer le poisson zèbre adulte dans un nouveau réservoir de détention et remplacer l’eau du système dans le deuxième nouveau réservoir par de l’eau du système frais pour la prochaine étape afin d’éviter la contamination croisée du médicament expérimental. À la fin de tous les essais, retournez les individus à l’installation de pêche.
Ici, l’activité locomotrice d’un seul poisson zèbre pendant la première et la dernière minute d’un essai de réservoir de 10 minutes est montrée. Lorsqu’ils sont introduits dans le réservoir pour la première fois, les poissons passent généralement la majorité du temps au fond du nouveau réservoir. Au fil du temps, cependant, les poissons adultes démontrent une augmentation graduelle de la quantité de temps passé dans le haut du réservoir.
En effet, le temps total passé dans le haut du réservoir pendant la première minute est significativement plus court par rapport à la dernière minute du nouvel essai de réservoir. En revanche, la distance totale parcourue entre la première et la dernière minute ne révèle aucune différence significative. Dans cette expérience représentative, l’analyse des chemins locomoteurs adultes du poisson zèbre a révélé peu de différence entre l’activité de natation du poisson zèbre avant et après le traitement pour les groupes d’adultes exposés au seul véhicule.
En revanche, les adultes exposés à un médicament anxiolytique ont passé beaucoup de temps dans le haut du réservoir par rapport aux chemins locomoteurs du même poisson avant l’exposition aux médicaments. Ces différences n’étaient pas dues à une moins grande locomotion en général, car aucune différence significative dans la distance parcourue n’a été mesurée pour l’un ou l’autre des groupes. Comme les rythmes comportementaux sont affectés par les processus circadiens, assurez-vous d’effectuer des répliques expérimentales effectuées à différents jours à la même heure de la journée pour chaque expérience.
D’autres analyses comportementales, telles que l’essai en plein champ ou d’autres mesures physiologiques du stress, peuvent être effectuées pour valider davantage les résultats obtenus lors du nouveau test de plongée en réservoir. Cette méthode peut être utilisée un essai de débit élevé pour répondre aux questions liées au stress, la peur et l’anxiété.
