새로운 탱크 분석은 Zebrafish의 강력한 유전 도구와 결합하여 뇌가 스트레스를 조절하는 방법과 신경 회로가 어떻게 변해되는지해부하는 방법을 제공합니다. 유전 및 신경 신호 경로는 Zebrafish와 포유류 사이에서 높게 보존되고 이 기술은 긴장 반응의 근본적인 기계장치의 우리의 이해를 더 도울 수 있습니다. 이 방법은 Zebrafish에 만정되지 않으며 멕시코 맹목적인 동굴 물고기와 함께 사용되어 다른 물고기 종으로 확장 될 수 있습니다.
시험 실행은 성공적인 추적을 달성하기 위해 배경에 대한 동물의 적절한 조명과 대비를 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 분석은 거의 사용되지 않지만 관련 프로세스가 될 수 있습니다. 단계를 시각화하면 다른 연구자들이 절차를 성공적으로 실행하는 데 도움이 됩니다.
재클린 친, 실험실에서 포스트 의사, 리디아 알버트, 학부 학생, 이 절차를 시연 할 예정이다. 250 밀리리터 비커와 물고기 시스템 물로 적어도 두 개의 홀딩 탱크를 채우는 것으로 시작합니다. 테스트의 아침에, 적어도 10 성인 제브라피쉬는 적어도 한 시간 동안 적응을 위해 행동 방에 모든 물고기를 전송하기 전에 개별 보유 탱크에 각 실험 조건에 대한 적어도 10 성인 제브라피시를 전송합니다.
동물의 상태 또는 유전자형이 실험자에게 눈이 멀게 되는 탱크에 라벨을 부착하고 그물을 사용하여 한 명의 성인을 미리 채워진 비커에 부드럽게 배치합니다. 비커에서 물과 물고기를 실험적인 새 탱크에 부드럽게 붓기 전에 성인 물고기가 비커에 10 분 동안 적응하도록 하십시오. 물고기가 탱크에 있는 즉시 카메라 녹화를 시작하고 설치에서 멀리 이동하여 물고기에 대한 추가 적인 고통을 방지합니다.
녹음이 끝나면 새 탱크에서 개인을 제거하고 물고기를 새로운 홀딩 탱크에 넣습니다. 관심의 특정 약물의 효과 평가 하려면, 시스템 물250 밀리 리터 비커에서 작업 농도에 약물을 희석. 시스템 용수와 비커를 사용하여 제어로만 사용하십시오.
약물 및 제어 비커의 정체성을 마스크하여 테스터가 사후 분석될 때까지 치료 조건에 눈이 멀게 되도록 하고, 기준선 행동 스트레스 반응을 얻기 위해 입증된 바와 같이 새로운 탱크 테스트를 수행한다. 기준선 녹화가 끝나면 그물을 사용하여 물고기를 10분 동안 테스트 비커 중 하나로 즉시 옮기고 물고기를 신선한 시스템 물만 들어 있는 세척 비커로 옮겨 넣습니다. 특히 여러 약물 치료가 관련된 경우 각 치료 비커에 지정된 별도의 그물을 사용하여 제어 물고기의 우발적 인 주입을 방지하는 것이 중요합니다.
10 분 후, 두 번째 소설 탱크 테스트를위한 새로운 소설 탱크에 물고기를 배치합니다. 시험이 끝나면 성인 제브라피쉬를 새로운 홀딩 탱크로 옮기고 두 번째 참신탱크의 시스템 수를 다음 단계로 신선한 시스템 물로 대체하여 실험약물의 교차 오염을 방지한다. 모든 시험이 끝나면 개인을 어류 시설로 되돌려 보입니다.
여기서 10분 짜리 참작 탱크 테스트의 첫 번째 및 마지막 순간에 단일 Zebrafish의 운동 활동이 표시됩니다. 처음 탱크에 도입 될 때, 물고기는 일반적으로 소설 탱크의 바닥에 대부분의 시간을 보낸다. 그러나 시간이 지남에 따라 성인 물고기는 탱크 의 상단에 소요되는 시간의 양이 점진적으로 증가하는 것을 보여줍니다.
실제로, 첫 번째 분 동안 탱크의 상단에 소요된 총 시간은 새로운 탱크 테스트의 마지막 순간에 비해 상당히 짧습니다. 대조적으로, 첫 번째와 마지막 분 사이의 총 거리는 큰 차이를 보여줍니다. 이 대표적인 실험에서, 성인 Zebrafish 운동 경로의 분석은 혼자 차량에 노출된 성인의 단을 위한 처리 전후에 Zebrafish 수영 활동 사이 거의 다름을 드러냈습니다.
대조적으로, 완화 약물에 노출된 성인은 약물 노출 전에 동일한 물고기의 운동 경로에 비해 탱크의 상단에 많은 시간을 보냈다. 이러한 차이는 이동 거리의 유의한 차이가 어떤 그룹에 대해 측정되지 않았기 때문에 일반적으로 운동을 적기 때문이 아니었습니다. 행동 리듬은 circadian 프로세스에 의해 영향을 받을 때, 각 실험에 대 한 하루의 동일한 시간 동안 다른 일에 수행 하는 실험 복제를 수행 해야 합니다.
개방현장 시험 이나 스트레스의 다른 생리학적 측정과 같은 추가 행동 적 소사, 새로운 탱크 다이빙 테스트에서 얻은 결과를 더욱 검증하기 위해 수행 될 수있다. 이 방법은 스트레스, 두려움 및 불안과 관련된 질문을 해결하기위한 높은 처리량 분석법을 사용할 수 있습니다.
