Наша лаборатория в Джонс Хопкинсе проводит пересадку почки и печени маленьких животных с более чем двухлетним опытом. Этот конкретный протокол излагает критические шаги, которые необходимы для успешного выполнения ортотопической трансплантации почек у крыс. Для увеличения вероятности и воспроизводимости успеха, наш протокол включает в себя три отличительных шага, перфузия донорской почки через портальной вены и использование манжеты системы для анатомозы почечных вен и мочетодер.
Демонстрацией этой процедуры будет д-р Ле Ци, аспирант нашей лаборатории. Чтобы начать эту процедуру, обезболить донорской крысы, как описано в текстовом протоколе. Поместите крысу в положение на спине и обездвижить конечности стерильной маскировочной лентой.
Нанесите смазку для глаз и стерилизовать хирургическое поле, как описано в текстовом протоколе. Перед первым разрезом убедитесь, что крыса адекватно анестезируется, проверяя отсутствие рефлекса отмены щипать ногой. Используя ножницы, начните с создания большой продольной средней линии кожи и мышечного разреза от симфиза лобка к xiphoid и введите брюшной полости.
Обложка кишечника с влажной стерильной марлей и переложить его на правую боковую сторону живота подвергая аорты, вены кавы и левой почки. Нанесите один миллилитр разогретого солевого раствора шприцем по 1 см, чтобы сохранить кишечник и органы брюшной полости влажными и при нормальной температуре. Нанесите вторую влажную марлю, чтобы покрыть и мобилизовать желудок и селезенку черепной к почкам.
Затем добавьте небольшую влажную марлю, чтобы покрыть открытые почки. Используйте микрохирургические рассечения типсов, чтобы изолировать и мобилизовать левую почечную артерию и вену из соединительной ткани и друг друга. Теперь изолировать левую почечную вену путем прижигания левой гонадной вены и изолировать левую почечную артерию путем прижигания надпочечниковой артерии.
После этого, мобилизовать аорты и вены кавы выше и уступает левой почечной pedicle путем вскрытия соединительной ткани с рассечением типсов. Разделите и мобилизуйте мочеточник из соединительной ткани с помощью рассечения типсов, а затем используйте микро ножницы, чтобы сделать диагональный разрез длиной около двух сантиметров, измеренный из почечного таза. Вставьте полиамид манжеты на полпути в мочеточник и обеспечить манжету, поставив узел с 8-0 шелковый шов.
Мобилизовать левую почку, отделив ее от промежных жиров с помощью вскрытия миппов или микро ножниц. Оставьте жировую капсулу почки прилагается и использовать этот сайт для обработки почек. Теперь управлять 200 единиц гепарина с помощью шприца с 27 калибровочных иглы через полового члена вены.
Давление на место инъекции с ватным тампоном, по крайней мере одну минуту, чтобы предотвратить кровотечение. Определите портал вены и нижней вены кавы. Разоблачить нижняя кава вены.
Приготовьтесь промыть почку путем введения 50 миллилитров холодного солевого раствора, смешанного с 500 единицами гепарина, в порталную вену с помощью 16 калибровочной иглы. Перед промывкой, вырезать нижняя кава вены на уровне инфрахепатической и сократить портальный вены caudal на месте вставки иглы, чтобы кровь, чтобы выйти из кровообращения. Начните промывка почки, постепенно вливая солевой раствор.
Наблюдайте изменение цвета почки от темно-красного до однородного серого или бледного цвета. После промывки, ligate почечной артерии и вены проксимальной аорты и вены кавы. Поместите промытую почку в чашку Петри, содержащую холодный солевой раствор, на лед, прежде чем удалить тело донора из хирургического поля.
После того, как почка находится в холодном солевой раствор, исправить и обездвижить ручку вены манжеты и осторожно вытащить почечную вену через манжету. Затем исправить почечную вену над манжетой, поставив три узла с помощью 8-0 шелковый шов. Чтобы начать процедуру реципиента, повторите шаги от донорской процедуры до введения гепарина.
Затем поместите два атрауматических микровесселя зажимы на левой почечной артерии и вены проксимальной аорты и вены кавы. Ligate реципиента почечной вены проксимальной для входной части почки. Промыть почечную вену с гепаринизированным солевым раствором, чтобы удалить всю оставшуюся кровь из сосуда.
Сдвиньте перевязавую почечную вену над манжетами почечной вены, ранее расположенные в донорской почке. Затем закретув вену 8-0 шелковый шов. Поддерживайте такую же позиционную ориентацию при защите почечной вены над манжетой.
Ligate почечной артерии проксимальной входе реципиента почки. Промыть его гепаринизированным солевым раствором, чтобы удалить излишки крови в сосуде. Теперь лигат мочеточника на уровне нижнего полюса левой почки.
Мобилизуют почку из промежных жиров и удаляют родную почку. Выполните энд-энд-анатомоз почечной артерии с 8-10 прерванных швов с помощью 10-0 нейлонового шва. Маневр артерии с помощью адвентитивного слоя.
Удалите зажимы сосуда, чтобы вновь инициировать повторное перфузию почки. Начните с удаления зажима на вену с последующим зажимом на артерии. Используйте стерильный ватный тампон, чтобы добавить световое давление в любой сочится областях вокруг области анатомоза.
Несколько минут должно быть достаточно для достижения патентного анатомоза. Кратко наблюдать за почками, чтобы оценить для адекватной перфузии. Сразу же после повторной перфузии, почка должна изменить цвет и постепенно восстановить свой естественный темно-красный цвет через несколько минут.
Иногда наблюдается видимый перистрализ мочеточника и выработка мочи на месте. Закончите, вставив открытый кончик мочеточника в мочеточник получателя и обеспечить получателя мочеточник с 8-0 шелковый галстук. Для того, чтобы держать донора и реципиента мочеточников в положении, связать концы каждой стороны мочеточника друг к другу.
Опционально, nephrectomize правой почки, связывая от почечной pedicle с 3-0 шелковый шов. Удалите все марли из брюшной полости и верните все органы в их естественное положение. Затем впрыскивает один миллилитр солевого раствора над кишечником, чтобы держать их влажными.
Закройте брюшную полость с помощью 4-0 абсорбируемых швов на мышце прямой кишки и 4-0 шелковый шов, чтобы закрыть слой кожи в прерванной моды. Поместите животное в чистую клетку с доступом к ad libitum воды и пищи и обеспечить восстановление на 37 градусов по Цельсию грелку. Наблюдайте за восстановлением в течение одного-двух часов, прежде чем вернуть животное обратно в животное учреждение.
Звери с сингенной пересадкой почки достигли длительного выживания без какого-либо иммуносупрессивного лечения. И наоборот, животные, получившие аллогенную пересадку почки без иммуносупрессии, отвергли свой трансплантат и поддались почечной недостаточности со средним выживанием в восемь дней. Средний креатинин сыворотки увеличился незначительно в сингенной группе, в то время как он увеличился в 14 раз в аллогенной группе.
После эксплантации макроскопический вид сингенеического алографа почек не выявил никаких отклонений. Цвет почек и внутренние структуры остались нетронутыми. Напротив, почечные алографы отвергнутых животных представляли красные геморрагические пятна с разрушением внутренних структур.
Гематоксилин и эозин пятна сингенеических трансплантатов показали тонкие гломерулярные капиллярные петли с нормальным количеством эндотелиальных и мезангиальных клеток. Отвергнутые аляграфы отображали разрушенные гломерулярные структуры с признаками воспаления и тубулита. CD8 положительное окрашивание было выполнено, чтобы подтвердить T-cell опосредованное отторжение.
В то время как сингенеические алографы показали очень мало положительных Т-клеток CD8, отвергнутые аляграфы показали значительно большее количество положительных клеток CD8 в и вокруг гломерули и тубули, подтверждающие отторжения Т-клеток. Эта модель дает значительное представление об иммунологических явлениях отторжения, толерантности и взаимодействия между донорами и принимающей стороной, прокладывая путь для развития терапевтических клинических вмешательств в трансплантации твердых органов.
