مختبرنا في جونز هوبكنز كان يقوم بزراعة الكلى والكبد الحيوانية الصغيرة مع أكثر من عقدين من الخبرة. يحدد هذا البروتوكول المحدد الخطوات الهامة الضرورية لإجراء زراعة الكلى التقويمية بنجاح في الفئران. لزيادة احتمال النجاح وإمكانية إعادة إنتاجه، يتضمن بروتوكولنا ثلاث خطوات مميزة، وهي ضخ الكلى المتبرعة من خلال الوريد البوّاب واستخدام نظام الكفة في استئصال الأوردة الكلوية والحالب.
وسوف يكون إثبات هذا الإجراء الدكتور لي تشي، وهو طالب دراسات عليا في مختبرنا. لبدء هذا الإجراء، تخدير الجرذ المانح كما هو موضح في بروتوكول النص. وضع الفئران في وضعية supine وشل الأطراف مع شريط اخفاء معقمة.
تطبيق مواد التشحيم العين وتعقيم المجال الجراحي كما هو موضح في بروتوكول النص. قبل الشق الأول ، تأكد من تخدير الجرذ بشكل كاف عن طريق التحقق من عدم وجود رد فعل سحب قرصة إصبع القدم. باستخدام مقص، تبدأ من خلال جعل الجلد خط الوسط الطولي الكبير والعضلات شق من العانة symphysis إلى xiphoid وأدخل تجويف البريتوني.
غطّي الأمعاء بشاش معقم رطب ثم احوله إلى الجانب الجانبي الأيمن من البطن الذي يعرض الشريان الأورطي، الوريدي، والكلى اليسرى. تطبيق ملليلتر واحد من المالحة مسخن مع حقنة واحدة cc للحفاظ على الأمعاء والأعضاء البطن رطبة وعند درجة حرارة طبيعية. تطبيق الشاش رطبة ثانية لتغطية وتعبئة المعدة والطحال إلى الكلى.
ثم أضف شاشًا رطبًا صغيرًا لتغطية الكلى المكشوفة. استخدام ملقط تشريح microsurgical لعزل وتعبئة الشريان الكلوي الأيسر والوريد من النسيج الضام وبعضها البعض. عزل الآن الوريد الكلوي الأيسر عن طريق الكي الوريد gonadal اليسار وعزل الشريان الكلوي الأيسر عن طريق الكي الشريان الكظري.
بعد ذلك، تعبئة الأبهر وفينا كافا متفوقة وأدنى من البطيخ الكلوي الأيسر عن طريق تشريح النسيج الضام مع ملقط تشريح. تقسيم وتعبئة الحالب من النسيج الضام باستخدام ملقط تشريح، ثم استخدام مقص صغير لجعل شق قطري على طول ما يقرب من سنتيمترين تقاس من الحوض الكلوي. إدراج الكفة البوليميد في منتصف الطريق في الحالب وتأمين الكفة عن طريق وضع عقدة مع 8-0 خياطة الحرير.
تعبئة الكلية اليسرى عن طريق فصلها عن الدهون في المناطق الدقيقة باستخدام ملقط تشريح أو مقص صغير. اترك الكبسولة الدهنية للكلى ملتصقة واستخدم هذا الموقع للتعامل مع الكلى. الآن إدارة 200 وحدة من الهيبارين باستخدام حقنة مع إبرة قياس 27 من خلال الوريد القضيب.
الضغط على موقع الحقن بمسحة قطنية لمدة دقيقة واحدة على الأقل لمنع النزيف. تحديد الوريد المدخل و الوريد السفلي فينا كافا. فضح فينا الكافا السفلية.
الاستعداد لطرد الكلى عن طريق حقن 50 ملليلتر من المالحة الباردة مختلطة مع 500 وحدة من الهيبارين في الوريد المدخل باستخدام إبرة قياس 16. قبل التنظيف، وقطع الكافا الوريدي السفلي في المستوى الافرهيدية وقطع الكودال الوريدي المدخل في موقع إدخال إبرة للسماح للدم بالخروج من الدورة الدموية. ابدأ في شطف الكلى عن طريق غرس المحلول الملحي تدريجيًا.
مراقبة تغير لون الكلى من الأحمر الداكن إلى اللون الرمادي أو الشاحب. بعد التنظيف، ligate الشريان الكلوي والوريد القريب إلى الشريان الأورطي وفينا كافا. ضع الكلى المنظفة في طبق بيتري يحتوي على ملح بارد على الجليد قبل إزالة جسم المتبرع من المجال الجراحي.
مرة واحدة في الكلى في المالحة الباردة، وإصلاح وشل مقبض الكفة الوريد وسحب بلطف الوريد الكلوي من خلال الكفة. ثم إصلاح الوريد الكلوي على الكفة عن طريق وضع ثلاث عقدة باستخدام 8-0 خياطة الحرير. لبدء الإجراء المتلقي، كرر الخطوات من إجراء المانحة حتى إدارة الهيبارين.
ثم ضع اثنين من المشابك الدقيقة النابية على الشريان الكلوي الأيسر والوريد القريب إلى الشريان الأورطي وفينا كافا. Ligate المتلقي الوريد الكلوي القريب إلى مدخل الكلى. تدفق الوريد الكلوي مع محلول ملحي heparinized لإزالة جميع الدم المتبقية من السفينة.
حرك الوريد الكلوي المربط فوق الوريد الكلوي المكبل الذي تم وضعه سابقًا في الكلى المانحة. ثم تأمين الوريد مع 8-0 خياطة الحرير. الحفاظ على نفس التوجه الموضعي عند تأمين الوريد الكلوي على الكفة.
Ligate الشريان الكلوي القريب إلى مدخل الكلى المتلقي. دافق مع الملح الملحي heparinized لإزالة أي الدم الزائد في الوعاء. الآن ligate الحالب على مستوى القطب السفلي من الكلية اليسرى.
تعبئة الكلى من الدهون في المناطق المُحتَمَرَة وإزالة الكلى الأصلية. إجراء منظار من نهاية إلى نهاية من الشريان الكلوي مع 8-10 انقطاع الغرز باستخدام خياطة النايلون 10-0. مناورة الشريان باستخدام طبقة المغامرة.
إزالة المشابك السفينة لإعادة بدء إعادة ضخ الكلى. ابدأ بإزالة المشبك على الوريد متبوعًا بالمشبك على الشريان. استخدم مسحة قطنية معقمة لإضافة ضغط خفيف إلى أي مناطق ناز حول منطقة الأنستوم.
وينبغي أن تكون بضع دقائق كافية لتحقيق براءة براءة امكنة. لاحظ لفترة وجيزة الكلى لتقييم ل perfusion كافية. مباشرة بعد إعادة الضخ، يجب أن تغير الكلى لونها وتستعيد تدريجيا لونها الأحمر الداكن الطبيعي بعد بضع دقائق.
لوحظ في بعض الأحيان الصدف المرئي لإنتاج البول الحالب وفي الموقع. الانتهاء عن طريق إدراج الطرف المكشوف من الكفة الحالب في الحالب المتلقي وتأمين الحالب المتلقي مع 8-0 ربطة عنق حريرية من أجل الحفاظ على حالة الحالب المانحة والمتلقية في الموقف ، وربط أطراف كل جانب الحالب لبعضها البعض.
اختياريا، nephrectomize الكلى الحق عن طريق ابطاء قبالة pedicle الكلى مع خياطة الحرير 3-0. إزالة جميع الشاش من تجويف البطن وإعادة جميع الأجهزة إلى وضعها الطبيعي. ثم بخ واحدة ملليلتر من المالحة فوق الأمعاء للحفاظ على رطبة.
أغلق البطن باستخدام خياطة قابلة للامتصاص 4-0 على عضلة المستقيم وخياطة حريرية 4-0 لإغلاق طبقة الجلد بطريقة متقطعة. وضع الحيوان في قفص نظيف مع الوصول إلى الماء والغذاء libitum الإعلانية والسماح للانتعاش على وسادة التدفئة 37 درجة مئوية. مراقبة الانتعاش لمدة ساعة إلى ساعتين قبل إعادة الحيوان إلى منشأة الحيوان.
حققت الحيوانات التي لديها زرع الكلى السينيجيني البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل دون أي علاج مثبط للمناعة. وعلى العكس من ذلك، رفضت الحيوانات التي تلقت زراعة الكلى الالجينية دون ضغط المناعة الكسب غير المشروع والاستسلام للفشل الكلوي مع متوسط البقاء على قيد الحياة لمدة ثمانية أيام. متوسط الكرياتينين المصل زيادة متواضعة في المجموعة syngeneic في حين أنها زادت بنسبة 14 أضعاف في المجموعة الجينية.
عند الزرع ، لم تظهر الرؤية العيانية لكلية الوصمة السينيجينية أي تشوهات. ظل لون الكلى والهياكل الداخلية سليمة. في المقابل ، قدمت allographs الكلى من الحيوانات المرفوضة بقع نزفية حمراء مع تدمير الهياكل الداخلية.
هيماتيوكسيلين وOsin البقع من الطعوم syngeneic أظهرت حلقات شعرية الكبيئية رقيقة مع الأعداد العادية من الخلايا البطانية و mesangial. رفضت allographs عرض الهياكل الكبيّة المدمرة مع علامات الالتهاب والتهاب الأنبوب. تم تنفيذ تلطيخ CD8 إيجابية لتأكيد رفض خلية T بوساطة.
في حين أظهرت الغرافيك السينيجينية عدد قليل جدا من خلايا T-إيجابية CD8، أظهرت allographs المرفوضة عددا أكبر بكثير من الخلايا الإيجابية CD8 في وحول كبيباتولي والتبولي تأكيد تي خلية توسطت الرفض. يقدم هذا النموذج نظرة ثاقبة كبيرة في الظواهر المناعية للرفض والتسامح والتفاعلات التي يقوم بها المانحون مما يمهد الطريق لتطوير التدخلات السريرية العلاجية في زراعة الأعضاء الصلبة.
