המעבדה שלנו בג'ונס הופקינס ביצעה השתלת כליות וכבד של בעלי חיים קטנים עם ניסיון של למעלה משני עשורים. פרוטוקול ספציפי זה מתאר צעדים קריטיים הנחוצים לביצוע מוצלח של השתלת כליה אורתוטופית בחולדות. כדי להגדיל את ההסתברות ואת הרבייה של הצלחה, הפרוטוקול שלנו כולל שלושה שלבים ייחודיים, זיוף של הכליה התורם דרך וריד הפורטל ושימוש במערכת חפתים כדי anastomose ורידים כליות ושופכים.
הדגמת הליך זה תהיה ד"ר לה צ'י, סטודנטית לתואר שני במעבדה שלנו. כדי להתחיל בהליך זה, הרדמה החולדה התורם כמתואר בפרוטוקול הטקסט. מניחים את החולדה בתמונת על-חושית ומשתקים את הגפיים עם סרט מיסוך סטרילי.
יש למרוח חומר סיכה לעיניים ולעקר את השדה הכירורגי כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לפני החתך הראשון, ודא כי החולדה הוא הרדמה נאותה על ידי בדיקת היעדר רפלקס נסיגה צביטת בוהן. באמצעות מספריים, להתחיל על ידי ביצוע עור קו אמצע אורך גדול חתך שרירים מן הערווה symphysis כדי xiphoid ולהיכנס לחלל צפי.
מכסים את המעי עם גזה סטרילית לחה ומזיזים אותו לצד הצדדי הימני של הבטן וחושפים את בית ההיתוך, vena cava והכליה השמאלית. החל מיליליטר אחד של מלוחים שחומם מראש עם מזרק אחד סמ"ק כדי לשמור על המעיים ואיברי הבטן לחים בטמפרטורה נורמלית. החל גזה לחה שנייה כדי לכסות ולגייס את הקיבה טחול גולגולתי על הכליה.
לאחר מכן מוסיפים גזה לחה קטנה כדי לכסות את הכליה החשופה. השתמש מטס ניתוח מיקרוכירורגי לבודד ולגייס את עורק הכליה השמאלית ואת וריד מן רקמת החיבור אחד את השני. עכשיו לבודד את וריד הכליה השמאלי על ידי צרוב וריד האונדאל השמאלי ולבודד את עורק הכליה השמאלי על ידי צרוב עורק יותרת הכליה.
לאחר מכן, לגייס את האב העורקים ו vena קאווה מעולה ונון לפדיקל הכליה השמאלי על ידי ניתוח רקמת החיבור עם מטס ניתוח. מחלקים ומגייסים את השופך מרמת החיבור באמצעות מטסות ניתוח, ואז משתמשים במספריים זעירים כדי לבצע חתך אלכסוני באורך של כשני סנטימטרים הנמדדים באגן הכליות. הכנס שרוול פוליאמיד באמצע הדרך לתוך השופך ולאבטח את השרוול על ידי הצבת קשר עם 8-0 תפר משי.
לגייס את הכליה השמאלית על ידי הפרדתו מן השומן perinephric באמצעות מטסות ניתוח או מספריים מיקרו. השאירו את כמוסת הפתגם של הכליה מחוברת ולהשתמש באתר זה לטיפול בכליה. עכשיו לנהל 200 יחידות של הפרין באמצעות מזרק עם מחט מד 27 דרך וריד הפין.
לחץ על אתר ההזרקה עם ספוגית כותנה לפחות דקה אחת כדי למנוע דימום. זהה את וריד הפורטל ואת וריד הווריד הנחות. חשוף את הוונה קאווה הנחותה.
היכונו לשטוף את הכליה על ידי הזרקת 50 מיליליטר של מלוחים קרים מעורבב עם 500 יחידות של הפרין לתוך וריד הפורטל באמצעות מחט 16 מד. לפני שטיפה, לחתוך את וינה קאווה נחות ברמה infrahepatic לחתוך את caudal וריד הפורטל באתר החדרת מחט כדי לאפשר לדם לצאת מהמחזור. התחל לשטוף את הכליה על ידי חליטה הדרגתית של תמיסת מלח.
שימו לב לשינוי צבע של הכליה מ אדום כהה לצבע אפור או חיוור אחיד. לאחר שטיפה, ליגטה עורק הכליה וורידים proximal כדי aorta ו vena קאווה. מניחים את הכליה הסמיקה בצלחת פטרי המכילה מלוחים קרים על קרח לפני הוצאת גופת התורם מהשדה הכירורגי.
לאחר הכליה היא מלוחים קר, לתקן ולשתק את הידית של שרוול וריד בעדינות למשוך את וריד הכליה דרך השרוול. ואז לתקן את וריד הכליה על השרוול על ידי הצבת שלושה קשרים באמצעות 8-0 תפר משי. כדי להתחיל את הליך הנמען, חזור על השלבים מהליך התורם עד לניהול הפרין.
לאחר מכן מניחים שני מלחצי מיקרובוסל אטראומטיים על עורק הכליה השמאלי וורידים קרובים לאורטה ולוונה קאווה. Ligate וריד הכליה המטופל proximal להיכנס של הכליה. לשטוף את וריד הכליה עם מלוחים heparinized כדי להסיר את כל הדם הנותר מחוץ לכלי.
החלק את וריד הכליה המקוטף מעל וריד הכליה האזיקים שהיה ממוקם בעבר בכליה התורמת. ואז לאבטח את וריד עם 8-0 תפר משי. שמור על אותו כיוון מיקום בעת אבטחת וריד הכליה מעל השרוול.
Ligate עורק הכליה proximal להיכנס של הכליה המטופל. לשטוף אותו עם מלוחים heparinized כדי להסיר כל דם עודף בכלי. עכשיו ליגטה השופך ברמה של הקוטב התחתון של הכליה השמאלית.
לגייס את הכליה מן השומן perinephric ולהסיר את הכליה המקומית. בצע anastomosis מקצה לקצה של עורק הכליה עם 8-10 תפרים מופרעים באמצעות תפר ניילון 10-0. לתמרן את העורק באמצעות שכבת הרפתקנות.
הסר את מהדקי כלי כדי ליזום מחדש את התדלוק מחדש של הכליה. התחל על ידי הסרת המהדק על וריד ואחריו מהדק על העורק. השתמש ספוגית כותנה סטרילית כדי להוסיף לחץ אור לכל האזורים נוטף סביב אזור anastomosis.
כמה דקות צריך להיות מספיק כדי להשיג אנסטומוזיס פטנט. בקצרה לבחון את הכליה כדי להעריך עבור תקציר נאותה. מיד לאחר חליטה מחדש, הכליה צריכה לשנות צבע בהדרגה להחזיר את הצבע האדום הכהה הטבעי שלה לאחר כמה דקות.
פריסטואלזה גלויה של השופך וייצור שתן באתר נצפו לפעמים. סיים על-ידי הכנסת הקצה החשוף של שרוול השופכה לשופך הנמען ואבטח את השופך הנמען עם 8-0 עניבת משי. על מנת לשמור על השופכים התורם והמקבל בעמדה, לקשור את הקצוות של כל צד השופכה זה לזה.
באופן אופציונלי, nephrectomize הכליה הימנית על ידי קשירת פדיקל הכליה עם תפר משי 3-0. מוציאים את כל הגזות חלל הבטן ומחזירים את כל האיברים למיקום הטבעי שלהם. ואז להשפריץ מיליליטר אחד של מלוחים מעל המעיים כדי לשמור אותם לחים.
סגור את הבטן באמצעות תפר נספג 4-0 על שריר rectus ותפר משי 4-0 כדי לסגור את שכבת העור בצורה מופרעת. מניחים את החיה בכלוב נקי עם גישה למים ומזון אד ליביום ולאפשר התאוששות על כרית חימום 37 מעלות צלזיוס. שימו לב להחלמה במשך 1-2 שעות לפני החזרת החיה חזרה למתקן החיות.
בעלי חיים עם השתלת כליה סינגנית השיגו הישרדות ארוכת טווח ללא כל טיפול בדיכוי המערכת החיסון. לעומת זאת, בעלי חיים שקיבלו השתלת כליה אלוגנית ללא דיכוי חיסוני דחו את השתל שלהם ונכנעו לאי ספיקת כליות עם הישרדות חציונית של שמונה ימים. קריאטינין סרום ממוצע גדל בצניעות בקבוצה הסינגנית בעוד הוא גדל פי 14 בקבוצה allogeneic.
עם ההקצבה, התצוגה המקרוסקופית של אלוגרף הכליות הסינגני לא הראה שום חריגות. צבע הכליות והמבנים הפנימיים נותרו שלמים. לעומת זאת, אלוגרפיות כליות של בעלי חיים שנדחו הציגו כתמי דימום אדומים עם הרס המבנים הפנימיים.
כתמי המטוקסילין ואאוסין של שתלים סינגניים הראו לולאות נימי גלומרולריות דקות עם מספרים נורמליים של תאים אנדותל ו mesangial. אלוגרפים שנדחו הציגו מבנים גלומרולריים הרוסים עם סימנים של דלקת ו tubulitis. כתם חיובי CD8 בוצע כדי לאשר דחייה מתווכת T-cell.
בעוד אלוגרפים סינגניים הראו מעט מאוד CD8 חיובי T-תאים, allographs נדחה הראה מספר גבוה משמעותית של CD8 תאים חיוביים סביב glomeruli ו tubuli המאשר דחייה מתווכים T-cell. מודל זה מספק תובנה משמעותית על התופעות האימונולוגיות של דחייה, סובלנות ואינטראקציות בין תורמים למארחת, וסולל את הדרך לפיתוח התערבויות קליניות טיפוליות בהשתלת איברים מוצקים.
