ジョンズ・ホプキンスの研究室では、20年以上の経験を持つ小さな動物の腎臓と肝臓移植を行ってきました。この特定のプロトコルは、ラットにおける直交性腎臓移植を正常に行う上で必要な重要なステップを概説する。成功の確率と再現性を高めるために、私たちのプロトコルには、門脈を介したドナー腎臓の灌流と、腎静脈および尿管を吻合するためのカフシステムの使用の3つの特徴的なステップが含まれています。
この手順を実証するのが、当研究室の大学院生であるLe Qi博士です。この手順を開始するには、テキストプロトコルに記載されているようにドナーラットを麻酔します。ラットをスピービンの位置に置き、無菌マスキングテープで手足を固定化します。
目の潤滑剤を塗布し、テキストプロトコルに記載されているように外科分野を殺菌する。最初の切開の前に、ラットがつま先ピンチ離脱反射の欠如をチェックすることによって適切に麻酔されていることを確認してください。はさみを使用して、シンフィシス恥骨からxiphoidに大きな縦方向の正中線皮膚と筋肉切開を行い、腹腔に入ることから始めます。
湿った滅菌ガーゼで腸を覆い、大腸、静脈、および左腎臓を露出する腹部の右側にシフトします。腸と腹部の器官を湿らせ、常温に保つために、1 ccシリンジで予熱した生理食塩水を1ミリリットル塗布する。2番目の湿ったガーゼを適用して、胃と脾臓の頭蓋を腎臓に覆い、動員します。
その後、露出した腎臓をカバーするために小さな湿ったガーゼを追加します。微小外科的解剖鉗子を使用して、結合組織および互いから左腎動脈と静脈を分離し、動員する。今、左腺静脈を焼灼することによって左腎静脈を分離し、副腎動脈を焼灼することによって左腎動脈を分離する。
その後、大動脈と大静脈を優れた左腎部に動員し、鉗子を解剖して結合組織を解剖する。解剖鉗子を使用して結合組織から尿管を分割し、動員し、マイクロハサミを使用して、腎盂から測定された約2センチメートルの長さで対角線切開を行います。ポリアミドカフを尿管の途中に挿入し、8-0で結び目を配置してカフを固定します。シルク縫合糸。
左腎臓を、解剖鉗子またはマイクロハサミを用いて、ペリネフリック脂肪から分離して動員する。腎臓の脂肪カプセルを取り付けたままにし、腎臓を扱うためのその部位を使用する。今陰茎静脈を通して27ゲージ針と注射器を使用してヘパリンの200単位を管理します。
綿棒で注射部位に少なくとも1分間圧力をかけ、出血を防ぎます。門脈と下の静脈を識別します。下の大静脈を露出する。
16ゲージ針を使用して、500単位のヘパリンを混合した冷たい生理食塩水を50ミリリットルをポータル静脈に注入して腎臓を洗い流す準備をします。フラッシングする前に、下の静脈を赤外線レベルで切断し、血液が循環を終了できるように針の挿入部位でポータルの静脈を切断する。生理液を徐々に注入して腎臓を洗い流し始める。
腎臓の色変化を濃い赤から均一な灰色または淡い色に観察する。紅潮後、腎動脈と静脈近位を大動脈と静脈にリゲートします。洗い流された腎臓を氷の上に冷たい生理食肉を含むペトリ皿に入れ、外科分野からドナーの体を取り除きます。
腎臓が冷たい生理食音になったら、静脈の袖口のハンドルを固定して固定し、袖口を通して腎臓静脈をそっと引っ張ります。その後、8-0を使用して3つの結び目を配置することによって、カフの上に腎静脈を固定しますシルク縫合糸。レシピエント処置を開始するには、ドナー処置からヘパリン投与までの手順を繰り返す。
その後、左腎動脈に2つの外傷性マイクロ容器クランプを置き、静脈は大動脈と大静脈に近い。腎臓の入口に近位のレシピエント腎静脈をリゲートします。腎臓静脈をヘパリン化生理食前で洗い流し、残りのすべての血液を血管から取り除く。
既にドナー腎臓に配置されたカフ腎静脈の上に結紮腎静脈をスライドさせます.その後、8-0で静脈を確保シルク縫合糸。袖口の上に腎静脈を固定するとき同じ位置のオリエンテーションを維持する。
腎動脈近位をレシピエント腎臓の入口にリゲートする。ヘパリン化した生理満水で洗い流し、血管内の余分な血液を除去します。今度は、左腎臓の下極のレベルで尿管をリゲートします。
腹分脂肪から腎臓を動員し、ネイティブ腎臓を除去する。10-0ナイロン縫合糸を使用して、8-10中断縫合糸で腎動脈のエンドツーエンド吻合を行います。この臨時層を用いて動脈を操縦する。
容器クランプを取り外して腎臓の再灌流を再開する。まず、静脈のクランプを取り外し、その後に動脈のクランプを取り外します。無菌綿棒を使用して、吻合領域の周りににじみ出る領域に光圧を加えます。
特許吻合を達成するには数分で十分である必要があります。腎臓を簡単に観察して、十分な灌流を評価する。再灌流の直後に、腎臓は色を変え、数分後に徐々に自然な濃い赤色を取り戻す必要があります。
尿管の目に見える蠕動およびオンサイト尿の産生が観察されることがある。受け手の尿管に尿管の袖口の露出した先端を挿入することによって終わり、8-0で受け取り側の尿管を固定するシルクネクタイ。ドナーとレシピエントの尿管を位置に保つために、各尿管側の端を互いに結び付ける。
必要に応じて、腎ペディクルを3-0シルク縫合糸で結ぶことで右腎臓を腎症化させる。腹腔からすべてのガーゼを取り除き、すべての臓器を自然な位置に戻します。その後、それらを湿らせた保つために腸の上に生理食塩水の1ミリリットルを噴出します。
直筋に4-0の吸収性縫合糸と4-0シルク縫合糸を使用して腹部を閉じ、中断された方法で皮膚層を閉じます。動物を、アドリビタムの水と食品にアクセスできるクリーンケージに入れ、摂氏37度の加熱パッドで回復を可能にします。動物を動物施設に戻す前に、1〜2時間の回復を観察してください。
同種腎移植を有する動物は、免疫抑制治療を受けることなく、長期生存を達成した。逆に、免疫抑制なしに同種の腎臓移植を受けた動物は移植片を拒絶し、8日間の生存期間の中央値で腎不全に屈した。平均血清クレアチニンは同種群で緩やかに増加し、同種群では14倍に増加した。
排泄の際、同種腎臓同種の同種の巨視的な見解は異常を示さなかった。腎臓の色と内部構造はそのまま残った。対照的に、拒絶された動物の腎臓同種図は、内部構造の破壊を伴う赤い出血性パッチを提示した。
同種移植片のヘマトキシリンおよびエオシン染色は、内皮細胞およびメサンジカル細胞の正常数を有する薄い糸球体毛細血管ループを示した。拒絶された同種図は、炎症および尿細管炎の徴候を伴う破壊された糸球体構造を表示した。CD8陽性染色を行い、T細胞媒介性拒絶反応を確認した。
同種同種同種の同種はCD8陽性T細胞を非常に少なく示したが、拒絶された同種は糸球体と管状の前後に有意に多くのCD8陽性細胞を示し、T細胞媒介性拒絶反応を確認した。このモデルは、拒絶反応、寛容、ドナーと宿主の相互作用の免疫学的現象に関する重要な洞察を提供し、固体臓器移植における治療的臨床介入の開発に道を開く。
