Greffe orthotopique de rein de rat: une approche chirurgicale nouvelle et simplifiée

Notre laboratoire de Johns Hopkins a effectué une transplantation de rein et de foie de petits animaux avec plus de deux décennies d’expérience. Ce protocole spécifique décrit les étapes critiques qui sont nécessaires pour effectuer avec succès la transplantation orthotopique de rein chez les rats. Pour augmenter la probabilité et la reproductibilité du succès, notre protocole comprend trois étapes distinctes, la perfusion du rein donneur par la veine portail et l’utilisation d’un système de manchette pour anastomoser les veines rénales et les uretères.

Le Dr Le Qi, étudiant diplômé de notre laboratoire, démontrera cette procédure. Pour commencer cette procédure, anesthésier le rat donneur tel que décrit dans le protocole texte. Placez le rat dans une position supine et immobilisez les membres avec du ruban adhésif stérile.

Appliquez un lubrifiant pour les yeux et stérilisez le champ chirurgical tel que décrit dans le protocole textuel. Avant la première incision, assurez-vous que le rat est adéquatement anesthésié en vérifiant l’absence du réflexe de retrait du pincement des pieds. À l’aide de ciseaux, commencez par faire une grande incision longitudinale de la peau médiane et du muscle du pubis symphyse au xiphoïde et entrez dans la cavité péritonéale.

Couvrez l’intestin d’une gaze stérile humide et déplacez-le vers le côté latéral droit de l’abdomen exposant l’aorte, le cava de vena et le rein gauche. Appliquer un millilitre de solution saline préchauffée avec une seringue d’un cc pour garder les intestins et les organes abdominaux humides et à une température normale. Appliquer une deuxième gaze humide pour couvrir et mobiliser l’estomac et la rate crânienne sur le rein.

Ajouter ensuite une petite gaze humide pour couvrir le rein exposé. Utilisez des forceps de dissecting microchirurgical pour isoler et mobiliser l’artère rénale gauche et la veine du tissu conjonctif et l’un l’autre. Maintenant isoler la veine rénale gauche en cautérisant la veine gonadale gauche et isoler l’artère rénale gauche en cautérisant l’artère surrénale.

Après cela, mobiliser l’aorte et vena cava supérieur et inférieur au pedicle rénal gauche en disséquant le tissu conjonctif avec des forceps disséquants. Divisez et mobilisez l’uretéreur du tissu conjonctif à l’aide de forceps disséquants, puis utilisez des micro ciseaux pour faire une incision diagonale à une longueur d’environ deux centimètres mesurée à partir du bassin rénal. Insérer un brassard en polyamide à mi-chemin dans l’uretère et fixer le brassard en plaçant un nœud avec 8-0 suture de soie.

Mobilisez le rein gauche en le séparant de la graisse périnéphrique à l’aide de forceps disséquants ou de micro ciseaux. Laissez la capsule adipeux du rein attachée et utilisez ce site pour manipuler le rein. Maintenant administrer 200 unités d’héparine à l’aide d’une seringue avec une aiguille de calibre 27 à travers la veine pénienne.

Faire pression sur le site d’injection à l’aide d’un coton-tige pendant au moins une minute pour éviter les saignements. Identifiez la veine du portail et le cava vena inférieur. Exposez le cava vena inférieur.

Préparez-vous à rincer le rein en injectant 50 millilitres de solution saline froide mélangées à 500 unités d’héparine dans la veine portail à l’aide d’une aiguille de calibre 16. Avant de rincer, couper le cava vena inférieur au niveau infrahépatique et couper la veine du portail caudale au site d’insertion de l’aiguille pour permettre au sang de sortir de la circulation. Commencez à rincer le rein en infusant progressivement la solution saline.

Observez un changement de couleur du rein du rouge foncé à une couleur grise ou pâle uniforme. Après rinçage, ligate l’artère rénale et veine proximale à l’aorte et vena cava. Placer le rein rincé dans une boîte de Pétri contenant de la solution saline froide sur la glace avant d’enlever le corps du donneur du champ chirurgical.

Une fois que le rein est en solution saline froide, fixer et immobiliser la poignée de la manchette veineuse et tirer doucement la veine rénale à travers le brassard. Puis fixer la veine rénale sur le brassard en plaçant trois noeuds à l’aide de 8-0 suture de soie. Pour commencer la procédure de receveur, répétez les étapes de la procédure de donneur jusqu’à l’administration d’héparine.

Placez ensuite deux pinces à microvéraux atraumatiques sur l’artère rénale gauche et la veine proximale à l’aorte et au véna cava. Ligate la veine rénale du receveur proximale à l’entrée du rein. Rincer la veine rénale avec de la solution saline héparinée pour enlever tout le sang restant hors du vaisseau.

Faites glisser la veine rénale ligated au-dessus de la veine rénale menottée précédemment placée dans le rein de donneur. Ensuite, fixez la veine avec un 8-0 suture de soie. Maintenez la même orientation positionnelle lors de la fixation de la veine rénale sur le brassard.

Ligate l’artère rénale proximale à l’entrée du rein destinataire. Rincer avec de la solution saline héparinée pour enlever tout excès de sang dans le vaisseau. Maintenant ligate l’uretrée au niveau du pôle inférieur du rein gauche.

Mobiliser le rein de la graisse périnéphrique et enlever le rein indigène. Effectuez une anastomose de bout en bout de l’artère rénale avec 8-10 sutures interrompues à l’aide d’une suture en nylon 10-0. Manœuvrer l’artère en utilisant la couche adventitiale.

Retirer les pinces du navire pour réamorcer la ré-perfusion du rein. Commencez par enlever la pince sur la veine suivie de la pince sur l’artère. Utilisez un coton-tige stérile pour ajouter une légère pression à toutes les zones suintante autour de la région de l’anastomose.

Quelques minutes devraient suffire pour obtenir une anastomose patente. Observez brièvement le rein pour évaluer la perfusion adéquate. Immédiatement après la re-perfusion, le rein doit changer de couleur et retrouver progressivement sa couleur rouge foncé naturelle après quelques minutes.

Peristalsis visible de l’uretretière et la production d’urine sur place sont parfois observées. Terminer en insérant la pointe exposée du brassard uretéral dans l’uretère receveur et fixer l’uretère receveur avec un 8-0 cravate en soie. Afin de maintenir le donneur et les uretères receveurs en position, attachez les extrémités de chaque côté uretères les uns aux autres.

En option, nephrectomize le rein droit en lissant outre du pédule rénal avec une suture de soie 3-0. Retirer toutes les gazes de la cavité abdominale et remettre tous les organes à leur position naturelle. Puis gicler un millilitre de solution saline sur les intestins pour les garder humides.

Fermez l’abdomen en utilisant une suture absorbable 4-0 sur le muscle rectus et une suture de soie 4-0 pour fermer la couche de peau d’une manière interrompue. Placez l’animal dans une cage propre avec accès à l’eau et à la nourriture ad libitum et laissez-le récupérer sur un coussin chauffant de 37 degrés Celsius. Observez la récupération pendant une à deux heures avant de retourner l’animal à l’installation animale.

Les animaux avec une greffe syngénéique de rein ont réalisé la survie à long terme sans n’importe quel traitement immunosuppresseur. Inversement, les animaux qui ont reçu la greffe allogeneic de rein sans immunosuppression ont rejeté leur greffe et ont succombé à l’échec rénal avec une survie médiane de huit jours. La créatinine moyenne de sérum a augmenté modestement dans le groupe syngeneic tandis qu’elle a augmenté de 14 fois dans le groupe allogeneic.

À l’explantation, la vue macroscopique de l’allographe syngénéique de rein n’a montré aucune anomalie. La couleur rénale et les structures internes sont restées intactes. En revanche, les allographes rénaux des animaux rejetés ont présenté les corrections hémorragiques rouges avec la destruction des structures internes.

Les taches d’hématoxyline et d’eosin des greffes syngénéiques ont montré de minces boucles capillaires glomerular avec des nombres normaux des cellules endothéliales et mésangiales. Les allographes rejetés ont montré les structures glomerular détruites avec des signes d’inflammation et de tubulite. La coloration positive de CD8 a été exécutée pour confirmer le rejet 201é de T-cellule.

Tandis que les allographes syngénéiques ont montré très peu de lymphocytes T positifs de CD8, les allographes rejetés ont montré un nombre sensiblement plus élevé de cellules positives de CD8 dans et autour du glomeruli et du tubuli confirmant le rejet médié de T-cellule. Ce modèle fournit un aperçu significatif des phénomènes immunologiques du rejet, de la tolérance, et des interactions de donneur-hôte ouvrant la voie au développement des interventions cliniques thérapeutiques dans la transplantation solide d’organe.