Накопление и распространение флуоресцентного микропластика на ранних стадиях жизни зебры. Знакомство. Биоаккумуляция микропластика играет ключевую роль в их токсических эффектах. Однако, как твердые частицы, их биоаккумуляции отличаются от многих других загрязнителей.
Описанный здесь является возможным методом визуального определения накопления и распределения микропластика в эмбрионах зебры или личинках с использованием флуоресцентного микропластика. Эксперименты проводились в соответствии с Национальным руководством Лаборатории животных Руководство по этической обзор благополучия животных. Во-первых, сбор эмбрионов.
Взрослые зебры происходят из Китая Зебрафиш Ресурсный центр. Рыба поддерживается в 20-литровых стеклянных резервуарах с рециркуляцией угольной фильтрованной водопроводной системы при постоянной температуре, а именно, 28 градусов по Цельсию, на фотопериоде 14 и 10 часов, светло-темный. Рыбу кормят два раза в день с Артемием Науплием.
Рекомендуется, чтобы пища дается на максимум 3%рыбы вес в день, и должны быть съедены в течение пяти минут каждый раз. Хорошо развитые взрослые зебры переносятся в нерестилие в соотношении одного самца и двух самок в ночь перед размножением. На следующее утро рыба начинает появляться после начала светового цикла.
Яйца собирают с помощью пипетки Pasteur, промыть раствором 10% Хэнка несколько раз, а затем проверить на оплодотворение с помощью микроскопа. Оплодотворенные яйцеклетки проходят период расщепления примерно через два часа после оплодотворения и могут быть четко идентифицированы. Оплодотворенные эмбрионы инкубируются в 500-миллилитровом стакане, содержащем 200-миллилитр раствора 10%Хэнка с 1%метиленовым синим для дезинфекции при 28 градусах Цельсия.
Скорость загрузки не превышает одного эмбриона в каждом 2-миллилитровом растворе. Во-ве, подготовка микропластиковых суспензий. Стоковый раствор зеленых флуоресцентно помеченных полистироловых бусин с номинальным диаметром 500 нанометров sonicated в течение 10 минут.
Разбавить фондовый раствор 10%-ым раствором Hank для получения желаемых растворов воздействия, а именно 0,1, 1 и 10 миллиграммов на литр. Решения для экспозиции микропластика всегда только что подготовлены перед экспозицией. Три, микропластиковые воздействия.
Шесть недавно оплодотворенных эмбрионов случайным образом отобраны, а затем переданы в каждую колодец из шести хорошо пластин, содержащих пять миллилитров микропластиковых растворов с различными концентрациями. В него включены контрольные группы, содержащие 10%-ное решение Хэнка. Для каждого лечения используются трипликаторные скважины общей численностью 18 эмбрионов.
Эмбрионы инкубированы под темный цикл и температуру, что и взрослые, и наблюдаются каждые 12 часов. Мертвых немедленно удаляют. Микропластиковые растворы продлеваются на 90% каждые 24 часа.
В период воздействия рыбу не кормят. Как правило, вылупление эмбриона начинается в 48-часовой постодобрение и завершается примерно в 72 часа после оплодотворения. В-четырех, оценка микропластикового распределения.
При 24-48-72-96-и 120-часовом после оплодотворении эмбрионы и личинки, по одному от каждой из трех репликаций, случайным образом отбираются и промывают раствором 10% Хэнка. Эмбрионы и личинки расположены и подготовлены к наблюдению. Предварительно личинки переносятся в чашку Петри и подвергаются воздействию 0,016%tricaine для анестезии.
Рыба наблюдается с флуоресцентным микроскопом, и изображены с помощью программного обеспечения для визуализации. Интенсивность флуоресценции у рыб дополнительно количественно с ImageJ NIH. Результаты представительов.
В результатах поется, что микропластик может биоаккумулятироваться в эмбрионах и личинках зебры в зависимости от концентрации. Перед вылуплением вокруг эмбрионального хориона обнаружена сильная флуоресценция; в то время как личинки рыб-зебр, желточный мешок, перикард и желудочно-кишечный тракт являются основными накопленными участками микропластика. обсуждение. Этот результат будет способствовать нашему пониманию токсичности микропластика для рыб, и метод, описанный здесь потенциально может быть обобщен для определения накопления и распределения других видов флуоресцентных материалов на ранних стадиях жизни зебры.
Так как хорион будет выступать в качестве эффективного барьера против частиц с большими размерами, процесс дехорионации до воздействия может потребоваться. Тем не менее, эмбрион с хорионом нетронутыми более рекомендуется для оценки экотоксичности загрязняющих веществ при рассмотрении состояния воздействия в реальном мире. Поведение микропластика в растворе имеет решающее значение для биодоступности, а также.
Физикохимические характеристики микропластика следует отслеживать по продолжительности экспозиции.
