Актуальные вопросы трансплантации печени требуют внедрения моделей крупных животных. Данный протокол описывает методику ортотопической трансплантации печени свиней без применения вено-венозного шунтирования. Данная методика значительно снижает логистическую и техническую сложность процедуры.
Кроме того, приживая печень после 20 часов статического холодного хранения, наша модель имитирует расширенные критерии донорских условий. Начните с того, что поместите обезболенную свинью-донора в положение лежа на спине и зафиксируйте конечности у основания операционного стола с помощью резинок. Очистите кожу антисептическим средством и накройте животное стерильными шторами.
После подтверждения потери лепесткового рефлекса выполняют лапаротомию средней линии, начиная с мечевидного отростка с помощью монополярного прижигания и разрывают фальциформные и треугольные связки с помощью ножниц и биполярного прижигания. После достаточного рассечения печени разрезают левую часть диафрагмы на расстоянии от 5 до 10 сантиметров с помощью ножниц, чтобы локализовать грудной сегмент нисходящей аорты. Обведите и поместите полифиламентную связку 3-0 без затягивания.
Разрезайте правую часть диафрагмы на расстоянии от 5 до 10 сантиметров с помощью ножниц и определите верховатую полую вену ниже. Переместить кишечник в левый верхний угол донора и войти в забрюшинное пространство путем поперечного разреза брюшины на расстоянии от 5 до 10 сантиметров с помощью ножниц. Поместите две 3-0 полифиламентных лигатур вокруг брюшной аорты.
Один краниал подвздошной бифуркации и один примерно на 3 сантиметра краниально без затягивания. Поместите еще одну лигатуру вокруг инфрахепатической полой вены ниже без затягивания. Подтяните каудально расположенную первую лигатуру вокруг брюшной аорты.
После закупорки брюшной аорты краниально второй лигатуры сделайте поперечный разрез между обеими лигатурами с помощью ножниц. Вставьте канюлю в разрез и закрепите ее оставшейся лигатурой. С помощью ножниц отрежьте надрахепатическую нижнюю полую вену далеко в крайнем месте близко к правому предсердию.
После кровопотери примерно от 1 500 до 2000 миллилитров перекрестно зажимают грудной сегмент нисходящей аорты путем связки лигатуры и начинают антеградную перфузию. Подтяните лигатуру, размещенную вокруг нижней части полой вены. Разрезайте сосуд краниально лигатуры и вставьте хирургический аспиратор.
После перфузии с 3 500 миллилитрами консервационного раствора в течение примерно 10-15 минут разрежьте внутреннюю надпеченочную полую вену ниже свиньи-донора, затем разрежьте инфрахепатическую полую вену ниже на уровне левой почечной вены. Разрежьте желчный проток краниальной ткани поджелудочной железы между двумя 3-0 полифиламентными лигатурами, чтобы избежать разлива желчи, затем перережьте воротную вену черепа поджелудочной железы. Найдите целиакию артерии после тупого препарата и следуйте дорсально к брюшной аорте.
Иссечение соответствующего сегмента аорты для создания пластыря для приживления. Иссейте диафрагму вокруг нижней части суперпеченочной полой вены и разрежьте оставшиеся спайки ножницами. Извлечь печень и поместить на лед.
Выполните холецистэктомию или подтяните лигатуру вокруг кистозного протока, затем промыть общий желчный проток не менее чем 20 миллилитрами консервационного раствора. Поместите перфузионную канюлю в воротную вену и промыть трансплантат 500 миллилитрами консервационного раствора. Поместите трансплантат в стерильную миску, помещенную на лед.
Удаляют лимфатическую ткань сегмента аорты и печеночной артерии, тем самым идентифицируя и закупоривая артериальные боковые ветви и лимфатические сосуды либо клипсами, лигатурами, либо швами. Действуйте аналогично с портальной веной. Выполняют укорочение сосудов и подготовку пластыря аорты только при приживлении с учетом индивидуальных анатомических обстоятельств.
Определите нижнюю полую вену и наложите швы вокруг обеих диафрагмальных вен после удаления окружающей диафрагмальной ткани. Поместите обезболенную свинью-реципиента в лежачее положение. Войдите в брюшную полость и разорвите фальциформные и треугольные связки анестезируемого животного с помощью ножниц и биполярного прижигания, как показано ранее.
После достаточного рассечения печени опоясывают как супру, так и инфрахепатическую вену, нижнюю близко к паренхиме печени. Разрезать поверхностный перитонеальный слой, покрывающий гепатодуоденальную связку, и идентифицировать печеночные артерии перед входом в паренхиму печени. Рассечение с помощью биполярного прижигания или размещения зажимов, лигатур или швов.
Рассекните и разрежьте общий желчный проток ниже соединения кистозных протоков между двумя лигатурами. Выявляют воротную вену и опоясывают близко к печени паренхиму. Выявляют брюшную аорту после разрезания аваскулярного слоя между правой и левой диафрагмальными мышцами.
Подготовьте аорту к анастомозу аорты путем удаления окружающих тканей. Выполните реципиентную гепатэктомию, поместив травматический сосудистый зажим на воротную вену и разорвать воротную вену близко к паренхиме печени с последующей инфрахепатической полой веной. Поместите атравматический сосудистый зажим на надрехепатическую полую вену, включая окружающую диафрагму, одновременно втягивая каудально печень и разрывая сосуд близко к паренхиме печени.
Удалить печень реципиента из брюшной полости. Поместите донорскую печень в брюшную полость и укоротите донорскую или реципиентную надэпатическую полую вену ниже адекватной длины, избегая при этом перегибов или слишком большого напряжения на анастомозе. Поместите один монофиламентный шов 5-0 в качестве поддерживающей нити, адаптирующей правый угол донора и реципиента надпеченочной вены нижней.
Начинают спинную сторону анастомоза с левого угла сосудов с 5-0 монофиламентного двурукого бегущего шва. Снимите опорную нить при достижении правого угла и закрепите бегущий шов зажимом, затем продолжайте с вентральной стороны анастомоза, опять же, начиная с левого угла сосудов. После завершения вентральной стороны анастомоза затяните шов несколькими узлами, не сужая диаметр сосуда, чтобы избежать стеноза.
Выполните сосудистый анастомоз донорской и реципиентной воротной вены, как показано ранее, с помощью монофиламентного двурукого шва 6-0. Начните портальную венозную реперфузию, удалив сосудистый зажим, закупорив воротную вену реципиента и закупорив донорскую инфрахепатическую полую вену нижнюю с помощью сосудистого зажима после дренажа примерно от 200 до 400 миллилитров крови. Медленно удаляют сосудистый зажим, закупоривающий реципиента надпеченочную полую вену нижней части и ищут активное кровотечение.
Укоротите донорскую и/или реципиентную инфрахепатическую полую вену ниже. затем выполняют сосудистый анастомоз донора и реципиента инфрахепатической нижней вены. После пережатия брюшной аорты и внесения разреза, чтобы соответствовать пластырю, начните анастомоз аорты с 6-0 монофиламентного двурукого бегового шва в черепном углу разреза или пластыря.
Достигнув каудального угла, закрепите бегущий шов зажимом и снова завершите анастомоз, начиная с черепного угла. Затяните шов несколькими узлами и медленно снимите сосудистый зажим после проверки всех сосудистых анастомозов. Поместите катетер в общий желчный проток и закрепите его одной лигатурой.
Временно закройте брюшко, адаптировав мышечную фасцию и кожу бегущим швом и покройте живот цепляющей пленкой или шторами, чтобы избежать потери тепла. Среднее время работы составило 103,50 минуты, включая среднюю и печеночную фазу 27,13 минуты. Только два реципиента прошли анапеченочную фазу более 30 минут, в то время как все реципиенты показали снижение концентрации лактата в сыворотке через 4 часа после портальной венозной реперфузии.
Реципиентам требовалось увеличение концентрации норадреналина непосредственно перед и в течение печеночной фазы для стабилизации среднего артериального давления на уровне 60 миллиметров ртутного столба или выше. Низкие концентрации адреналина одновременно использовались для увеличения сердечного выброса в этот уязвимый период времени. После приживления среднее артериальное давление и необходимые дозы вазопрессоров оставались стабильными.
Значения LiMAx, полученные через 6 часов после портальной венозной реперфузии, были сопоставимы со значениями, измеренными у доноров печени до приобретения органов у всех, кроме одного реципиента с печеночной фазой 34 минуты. Эта модель может представлять особый интерес в качестве отсчета для проработок, посвященных механизмам ишемии и реперфузионного повреждения и восстановлению расширенных критериев донорских органов.
