Questões atuais no transplante de fígado exigem a implementação de grandes modelos animais. Este protocolo descreve a técnica de transplante hepático ortotópico suíno sem o uso de bypass venovenoso. Esta técnica reduz significativamente a complexidade logística e técnica do procedimento.
Além disso, ao enxertar fígados após 20 horas de armazenamento a frio estático, nosso modelo simula condições de doador com critérios estendidos. Comece colocando o porco doador anestesiado em decúbito dorsal e fixe os membros na base da mesa de operação com elásticos. Esfregue a pele com um agente antisséptico e cubra o animal com cortinas estéreis.
Após a confirmação da perda do reflexo pétal, realizar uma laparotomia na linha média iniciando-se no processo xifoide utilizando cauterização monopolar e cortar os ligamentos falciforme e triangular utilizando tesoura e cauterização bipolar. Após dissecção hepática suficiente, incite a porção esquerda do diafragma a uma distância de 5 a 10 centímetros usando uma tesoura para localizar o segmento torácico da aorta descendente. Envolva e coloque uma ligadura de polifilamento 3-0 sem apertar.
Incidir a porção direita do diafragma a uma distância de 5 a 10 centímetros usando tesoura e identificar a veia cava supra-hepática inferior. Realoque o intestino para o canto superior esquerdo do doador e entre no espaço retroperitoneal por incisão transversal do peritônio a uma distância de 5 a 10 centímetros usando tesoura. Coloque duas ligaduras de polifilamento 3-0 ao redor da aorta abdominal.
Um craniano da bifurcação ilíaca e outro de aproximadamente 3 centímetros cranialmente sem aperto. Coloque outra ligadura ao redor da veia cava infra-hepática inferior sem apertar. Aperte a primeira ligadura localizada caudalmente ao redor da aorta abdominal.
Após ocluir a aorta abdominal cranialmente da segunda ligadura, faça uma incisão transversal entre ambas as ligaduras usando tesoura. Insira a cânula na incisão e prenda-a com a ligadura restante. Usando uma tesoura, corte a veia cava inferior supra-hepática muito cranialmente perto do átrio direito.
Após perda de sangue de aproximadamente 1.500 a 2.000 mililitros, pinça cruzada do segmento torácico da aorta descendente amarrando a ligadura e comece a perfusão anterógrada. Aperte a ligadura colocada ao redor da veia cava infra-hepática inferior. Incise o vaso cranialmente da ligadura e insira o aspirador cirúrgico.
Após perfusão com 3.500 mililitros de solução de preservação ao longo de aproximadamente 10 a 15 minutos, cortar a veia cava supra-hepática interna inferior do porco doador e, em seguida, cortar a veia cava infra-hepática inferior ao nível da veia renal esquerda. Separe o ducto biliar craniano do tecido pancreático entre duas ligaduras de polifilamento 3-0 para evitar o derramamento biliar e, em seguida, corte o crânio da veia porta do pâncreas. Localize a artéria celíaca após uma preparação contundente e siga dorsalmente até a aorta abdominal.
Excise o respectivo segmento aórtico para criar um remendo para o enxerto. Extirpar o diafragma ao redor da veia cava super hepática inferior e cortar as aderências restantes usando tesoura. Extraia o fígado e coloque no gelo.
Realize uma colecistectomia ou aperte uma ligadura ao redor do ducto cístico e, em seguida, lave o ducto biliar comum com pelo menos 20 mililitros de solução de preservação. Coloque a cânula de perfusão na veia porta e lave o enxerto com 500 mililitros de solução de preservação. Coloque o enxerto em uma tigela estéril colocada no gelo.
Remova o tecido linfático do segmento aórtico e da artéria hepática, identificando e ocluindo os ramos do lado arterial e os vasos linfáticos com clipes, ligaduras ou suturas. Prossiga da mesma forma com a veia porta. Realizar o encurtamento dos vasos e a preparação do remendo aórtico somente após e enxerto para levar em conta as circunstâncias anatômicas individuais.
Identifique a veia cava super hepática inferior e coloque suturas ao redor de ambas as veias diafragmáticas após a remoção do tecido diafragmático circundante. Coloque o porco receptor anestesiado em decúbito dorsal. Entre na cavidade abdominal e rompa os ligamentos falciformes e triangulares do animal anestesiado usando tesoura e cauterização bipolar, como demonstrado anteriormente.
Após dissecção hepática suficiente, circunde as veias cavas supra e infra-hepática inferior, próximas ao parênquima hepático. Incidir a camada peritoneal superficial que cobre o ligamento hepatoduodenal e identificar as artérias hepáticas antes de entrar no parênquima hepático. Dissecar usando cauterização bipolar ou colocando os clipes, ligaduras ou suturas.
Dissecar e cortar o ducto biliar comum abaixo da junção do ducto cístico entre duas ligaduras. Identifique a veia porta e envolva perto do parênquima hepático. Identifique a aorta abdominal após incidir a camada avascular entre os músculos diafragmáticos direito e esquerdo.
Prepare a aorta para anastomose aórtica pela remoção do tecido circundante. Realizar hepatectomia receptora colocando um grampo vascular traumático na veia porta e cortar a veia porta perto do parênquima hepático seguido pela veia cava infra-hepática. Coloque um grampo vascular atraumática na veia cava supra-hepática, incluindo o diafragma circundante, enquanto retrai caudalmente o fígado e corta o vaso perto do parênquima hepático.
Remova o fígado receptor da cavidade abdominal. Coloque o fígado do doador na cavidade abdominal e encurte a veia cava supra-hepática doadora ou receptora inferior a um comprimento adequado, evitando torções ou muita tensão na anastomose. Coloque uma única sutura de monofilamento 5-0 como fio de suporte adaptando o canto direito da veia cava supra-hepática inferior do doador e do receptor.
Comece o lado dorsal da anastomose a partir do canto esquerdo dos vasos com uma sutura de 5-0 monofilamento de dupla arma. Retire o fio de suporte ao chegar ao canto direito e prenda a sutura de corrida com uma braçadeira, depois continue com o lado ventral da anastomose, novamente, começando pelo canto esquerdo dos vasos. Depois de completar o lado ventral da anastomose, aperte a sutura com múltiplos nós sem contrair o diâmetro do vaso para evitar a estenose.
Realizar uma anastomose vascular da veia porta doadora e receptora, conforme demonstrado anteriormente, usando uma sutura de braço duplo monofilamentar 6-0. Iniciar a reperfusão venosa portal removendo a braçadeira vascular, ocluindo a veia porta receptora e ocluindo a veia cava infra-hepática inferior do doador com pinça vascular após drenar aproximadamente 200 a 400 mililitros de sangue. Remova lentamente a pinça vascular que oclui a veia cava supra-hepática inferior receptora e procure sangramento ativo.
Encurtar a veia cava infra-hepática inferior do doador e/ou receptor. em seguida, realizar uma anastomose vascular das veias cavas infra-hepáticas inferiores do doador e do receptor. Depois de apertar a aorta abdominal e fazer uma incisão para encaixar o adesivo, comece a anastomose aórtica com uma sutura de corrida de monofilamento de dupla armada 6-0 no canto craniano da incisão ou patch.
Ao chegar ao canto caudal, prenda a sutura de corrida com uma braçadeira e complete a anastomose novamente começando no canto craniano. Aperte a sutura com múltiplos nós e remova lentamente a pinça vascular depois de verificar todas as anastomoses vasculares. Coloque um cateter no ducto biliar comum e prenda-o com uma única ligadura.
Feche o abdômen temporariamente, adaptando a fáscia muscular e a pele com uma sutura em execução e cubra o abdômen com película agarrada ou cortinas para evitar a perda térmica. O tempo médio de operação foi de 103,50 minutos, incluindo uma fase média e hepática de 27,13 minutos. Apenas dois receptores foram submetidos a uma fase anhepática de mais de 30 minutos, enquanto todos os receptores apresentaram concentrações séricas de lactato em declínio 4 horas após a reperfusão venosa portal.
Os receptores necessitaram de concentrações aumentadas de norepinefrina imediatamente antes e durante toda a fase anhepática para estabilizar a pressão arterial média a 60 milímetros de mercúrio ou mais. Baixas concentrações de epinefrina foram usadas simultaneamente para aumentar o débito cardíaco neste período de tempo vulnerável. Após o enxerto, a pressão arterial média e as doses necessárias de vasopressores permaneceram estáveis.
Os valores de LiMAx obtidos 6 horas após a reperfusão venosa portal foram comparáveis aos valores medidos nos doadores hepáticos antes da captação de órgãos em todos, exceto um, com uma fase anhepática de 34 minutos. Este modelo pode ser de especial interesse como uma leitura para investigações com foco em mecanismos de isquemia e lesão de reperfusão e o recondicionamento de órgãos doadores de critérios estendidos.
