A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
O objetivo deste artigo é examinar o uso do teste de imunofluorescência indireta da raiva para a detecção de anticorpos IgG e IgM específicos para raiva.
O teste de imunofluorescência indireta (RIFI) antirrábica foi desenvolvido para detectar vários isotipos de anticorpos específicos contra a raiva no soro ou no líquido cefalorraquidiano. Este teste fornece resultados rápidos e pode ser usado para detectar anticorpos antirrábicos em vários cenários diferentes. O teste de IFA antirrábica é especialmente útil para a detecção rápida e precoce de anticorpos para avaliar a resposta imune em um paciente que desenvolveu raiva. Embora outros métodos para o diagnóstico antemortem da raiva tenham precedência, este teste pode ser utilizado para demonstrar a exposição recente ao vírus rábico através da detecção de anticorpos. O teste de IFA não fornece um título de anticorpos neutralizantes do vírus (VNA), mas a resposta de profilaxia pré-exposição (PrEP) pode ser avaliada através da presença de anticorpos positivos ou negativos. Este teste pode ser utilizado em várias situações e pode fornecer resultados para vários alvos diferentes. Neste estudo, usamos várias amostras de soro pareadas de indivíduos que receberam PrEP e demonstramos sua presença de anticorpos antirrábicos ao longo do tempo usando o teste de RIFI.
O teste de anticorpos fluorescentes indiretos (RIFI) antirrábicos é usado para detectar vários isotipos de anticorpos específicos da raiva no soro ou no líquido cefalorraquidiano. É um dos muitos testes disponíveis para o acompanhamento de um paciente antirrábico antemortem. É especialmente útil para a detecção precoce de anticorpos para avaliar a resposta imune de um paciente à infecção por raiva. Quando usado em conjunto com outros testes, história do caso e status de vacinação do paciente, o teste de IFA pode ajudar a determinar a exposição ao vírus da raiva ou a uma vacina1. Como o teste de RIFI mede IgM e/ou IgG, os valores do anticorpo es....
O seguinte protocolo foi aprovado para o uso ético de amostras humanas pelo New York State Department of Health Wadsworth Center para desenvolvimento de ensaios, número de aprovação do protocolo #03-019.
1. Segurança
Todas as amostras de soro foram coletadas dos pacientes aproximadamente nos mesmos períodos de tempo após a PrEP. As amostras foram testadas de cinco pacientes diferentes nos seguintes momentos: 2 semanas após a inoculação final da vacina antirrábica, 6 meses após a série de vacinas antirrábicas e 18 meses após a série de vacinas antirrábicas. Cada amostra de soro foi diluída em série e graduada para presença de IgM e IgG, conforme descrito nas etapas 5.2 e 5.3 do protocolo. O valor de anticorpos atribuíd.......
O teste de IFA aproveita um complexo antígeno-anticorpo, permitindo um local de marcação para visualizar anticorpos específicos da raiva. Células de neuroblastoma ou BHK são semeadas em lâminas de microscópio revestidas com PTFE multipoço e inoculadas com a cepa CVS-11 de laboratório do vírus da raiva. Uma vez confluente a monocamada e atingida a infectividade desejada de aproximadamente 50%, as lâminas são armazenadas até ficarem prontas para uso6.
O soro.......
Somos gratos ao Wadsworth Center do Departamento de Saúde do Estado de Nova York por apoiar este projeto.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
25x55mm glass cover slips | Any | ||
Acetone | Any | ||
Anti-Human IgG Labeled Conjugate | Sigma-Aldrich | F9512 | |
Anti-Human IgM Labeled Conjugate | SeraCare | 5230-0286 | |
Aspirating pipette tip | Any | ||
BHK-21 Cells | ATCC | CCL-10 | |
BION IFA Diluent | MBL BION | DIL-9993 | |
Cell Culture water | Sigma-Aldrich | W3500 | EGM |
Coplin Jars | Any | ||
Fetal Bovine Serum | Sigma-Aldrich | F2442 | EGM |
Fluorescent microscope with FITC filter | Any | ||
Glycerol | Sigma-Aldrich | G7893 | Mountant |
Gullsorb IgM inactivation reagent | Fisher Scientific | 23-043-158 | IgG Inactivation Reagent |
L-Glutamine | Sigma-Aldrich | G-7513 | EGM |
Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | M0643 | EGM |
Mouse Neuroblastoma Cells | ATCC | CCL-131 | |
Multi-well Teflon coating glass slides | Any | ||
PBS | Any | pH 7.6 | |
Penicillin | Sigma | P-3032 | EGM |
Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate | Millipore Sigma | 5100, 5500 or 6500 | |
Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S-5761 | EGM |
Sodium Chloride crystals | Sigma-Aldrich | S5886 | Mountant |
Sterile dropper | Any | ||
Streptomycin sulfate salt | Sigma | S9137 | EGM |
Trizma pre-set crystals pH 9.0 | Sigma-Aldrich | S9693 | Mountant |
Tryptose Phosphate Broth | BD | 260300 | EGM |
Vitamin mix | Sigma-Aldrich | M6895 | EGM |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved