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  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

O objetivo deste artigo é examinar o uso do teste de imunofluorescência indireta da raiva para a detecção de anticorpos IgG e IgM específicos para raiva.

Abstract

O teste de imunofluorescência indireta (RIFI) antirrábica foi desenvolvido para detectar vários isotipos de anticorpos específicos contra a raiva no soro ou no líquido cefalorraquidiano. Este teste fornece resultados rápidos e pode ser usado para detectar anticorpos antirrábicos em vários cenários diferentes. O teste de IFA antirrábica é especialmente útil para a detecção rápida e precoce de anticorpos para avaliar a resposta imune em um paciente que desenvolveu raiva. Embora outros métodos para o diagnóstico antemortem da raiva tenham precedência, este teste pode ser utilizado para demonstrar a exposição recente ao vírus rábico através da detecção de anticorpos. O teste de IFA não fornece um título de anticorpos neutralizantes do vírus (VNA), mas a resposta de profilaxia pré-exposição (PrEP) pode ser avaliada através da presença de anticorpos positivos ou negativos. Este teste pode ser utilizado em várias situações e pode fornecer resultados para vários alvos diferentes. Neste estudo, usamos várias amostras de soro pareadas de indivíduos que receberam PrEP e demonstramos sua presença de anticorpos antirrábicos ao longo do tempo usando o teste de RIFI.

Introduction

O teste de anticorpos fluorescentes indiretos (RIFI) antirrábicos é usado para detectar vários isotipos de anticorpos específicos da raiva no soro ou no líquido cefalorraquidiano. É um dos muitos testes disponíveis para o acompanhamento de um paciente antirrábico antemortem. É especialmente útil para a detecção precoce de anticorpos para avaliar a resposta imune de um paciente à infecção por raiva. Quando usado em conjunto com outros testes, história do caso e status de vacinação do paciente, o teste de IFA pode ajudar a determinar a exposição ao vírus da raiva ou a uma vacina1. Como o teste de RIFI mede IgM e/ou IgG, os valores do anticorpo es....

Protocol

O seguinte protocolo foi aprovado para o uso ético de amostras humanas pelo New York State Department of Health Wadsworth Center para desenvolvimento de ensaios, número de aprovação do protocolo #03-019.

1. Segurança

  1. Use equipamentos de proteção individual (EPIs), no mínimo proteção ocular (óculos ou face shield), máscara cirúrgica e luvas sem látex.
  2. Certifique-se de que o pessoal está vacinado contra a raiva e que um título de ≥0,5 UI/mL .......

Representative Results

Todas as amostras de soro foram coletadas dos pacientes aproximadamente nos mesmos períodos de tempo após a PrEP. As amostras foram testadas de cinco pacientes diferentes nos seguintes momentos: 2 semanas após a inoculação final da vacina antirrábica, 6 meses após a série de vacinas antirrábicas e 18 meses após a série de vacinas antirrábicas. Cada amostra de soro foi diluída em série e graduada para presença de IgM e IgG, conforme descrito nas etapas 5.2 e 5.3 do protocolo. O valor de anticorpos atribuíd.......

Discussion

O teste de IFA aproveita um complexo antígeno-anticorpo, permitindo um local de marcação para visualizar anticorpos específicos da raiva. Células de neuroblastoma ou BHK são semeadas em lâminas de microscópio revestidas com PTFE multipoço e inoculadas com a cepa CVS-11 de laboratório do vírus da raiva. Uma vez confluente a monocamada e atingida a infectividade desejada de aproximadamente 50%, as lâminas são armazenadas até ficarem prontas para uso6.

O soro.......

Acknowledgements

Somos gratos ao Wadsworth Center do Departamento de Saúde do Estado de Nova York por apoiar este projeto.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
25x55mm glass cover slipsAny
AcetoneAny
Anti-Human IgG Labeled ConjugateSigma-AldrichF9512
Anti-Human IgM Labeled ConjugateSeraCare5230-0286
Aspirating pipette tipAny
BHK-21 CellsATCCCCL-10
BION IFA DiluentMBL BIONDIL-9993
Cell Culture waterSigma-AldrichW3500EGM
Coplin JarsAny
Fetal Bovine Serum Sigma-AldrichF2442EGM
Fluorescent microscope with FITC filterAny
GlycerolSigma-AldrichG7893Mountant
Gullsorb IgM inactivation reagentFisher Scientific23-043-158IgG Inactivation Reagent
L-GlutamineSigma-AldrichG-7513EGM
Minimum Essential Media Eagle – w/Earle’s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonateSigma-AldrichM0643EGM
Mouse Neuroblastoma CellsATCCCCL-131
Multi-well Teflon coating glass slidesAny
PBSAnypH 7.6 
PenicillinSigmaP-3032EGM
Rabies Direct Fluorescent Antibody ConjugateMillipore Sigma5100, 5500 or 6500
Sodium bicarbonateSigma-AldrichS-5761EGM
Sodium Chloride crystalsSigma-AldrichS5886Mountant
Sterile dropperAny
Streptomycin sulfate saltSigmaS9137EGM
Trizma pre-set crystals pH 9.0Sigma-AldrichS9693Mountant
Tryptose Phosphate BrothBD260300EGM
Vitamin mixSigma-AldrichM6895EGM

References

  1. Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1. World Health Organization. , 232-245 (2018).
  2. Moore, S. M. Challenges of rabies serology: defining context of interpretation. ....

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