Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Bu protokol üç kritik adım gelişmekte olan i) doğru kompozisyon ve 3D II) İskele çeşitli yazdırma selüloz hidrojel mürekkep tutarlılığını gözenek yapıları durumu iyi sadakat ve boyutları ve III) gösterimi ile kıkırdak rejenerasyon için benzetimli vücut koşullarda mekanik özellikleri.
Bu eser gözenekli kübik iskele selüloz nanocomposite hidrojel mürekkep, kontrollü gözenek yapısı ve mekanik özellikleri kullanarak üretmek için üç boyutlu (3D) baskı kullanımı gösterilmiştir. Selüloz nanocrystals (CNCs, 69.62 wt %) matris (sodyum aljinat ve jelatin) tabanlı hidrojel mürekkeple geliştirilmiştir ve İskele düzgün ve degrade gözenek yapısı (110-1100 µm) ile içine 3D yazdırılır. İskele gösterdi sıkıştırma modülü 0,20-0.45 aralığında test zaman MPa (37 ° C'de distile suda) içinde vivo koşulları simüle. Gözenek boyutları ve kıkırdak rejenerasyon uygulamalar için gereken gereksinimleri ile uyumlu 3D iskele sıkıştırma modülü. Bu eser mürekkep tutarlılığını öncüleri konsantrasyon tarafından kontrol edilebilir ve porozite 3D yazdırma işlemi tarafından kontrol edilebilir ve bu faktörlerin her ikisi de karşılığında mekanik tanımlar gösterir 3D özellikleri yazdırılan gözenekli hidrojel iskele. Bu işlem yöntemi bu nedenle hastalar belirli ihtiyaçlarına göre yapısal olarak ve bileşimsel özelleştirilmiş iskele imal için kullanılabilir.
Selüloz (1-4) bağlantılı D-glikoz birimleri β doğrusal zincirine oluşan bir polisakkarit olan. Bu dünyadaki en bol doğal polimer ve kaynakları, deniz hayvanları (örneğin, tunicates), bitkiler (örneğin, ahşap, pamuk, buğday samanı) ve yosun (örneğin, Valonia), mantar ve hatta amip (protozoa gibi bakteriyel kaynakları da dahil olmak üzere çeşitli elde edilir )1,2. Selüloz nanofibers (CNF) ve selüloz nanocrystals (CNC) Nano üzerinde en az bir boyut mekanik bakımları ve selüloz gelen asit hidroliz yoluyla elde edilir. Onlar sadece selüloz, kimyasal değişiklik, düşük toksisite, Biyouyumluluk, biyolojik olarak parçalanabilen ve yenilenebilir, için potansiyel gibi özelliklere sahip ama aynı zamanda yüksek belirli yüzey alanı gibi Nano özelliklere sahip yüksek mekanik özellikleri , rheological ve optik özellikleri. Bu çekici özellikleri CNFs ve CNCs Biyomedikal uygulamalar için yaptık, esas olarak 3 boyutlu (3D) şeklinde hidrojel3iskele. Bu iskele kontrollü gözenek yapısı ve birbirine bağlı porozite özelleştirilmiş boyutları gerektirir. Bizim grup ve diğer 3D gözenekli selüloz nanokompozitlerin döküm, electrospinning ve4,5,6,7,8dağılması ile hazırlanan rapor. Ancak, gözenek yapısı üzerinde kontrol ve karmaşık geometriyi imalatı bu geleneksel teknikleri sayesinde elde değil.
3D baskı 3D nesneler mürekkep9bilgisayar kontrollü birikimi ile katman katman oluşturulur bir katkı imalat tekniğidir. 3D baskı geleneksel teknikleri üzerinde avantajları içerir tasarım özgürlüğü, kontrollü makro ve mikro boyutları, karmaşık mimarileri, özelleştirme ve tekrarlanabilirlik imalatı. Buna ek olarak, 3D baskı CNFs ve CNCs Ayrıca kesme kaynaklı hizalamaları, nano tanecikleri, yön, degrade porozite tercih ve 3D bioprinting10,11,12' ye, kolayca genişletilebilir sunar 13 , 14 , 15. son zamanlarda,16,17CNCs hizalama 3D yazdırma sırasında olmuştur dinamikleri bildirdi. Bioprinting alanında gelişmeler var etkinleştirmek 3D yazdırılan doku ve organların seçimi ve konsantrasyon canlı hücreler ve büyüme faktörleri, baskılar ve meme çapları18 baskı taşıyıcı mürekkep bileşimi gibi ilgili meydan rağmen ,19,20.
Porozite ve kıkırdak rejeneratif iskele Basınç Dayanımı, verimlilik ve performans belirleyen önemli özelliklerdir. Gözenek boyutu yapışma, farklılaşma ve besin ve metabolik atık21değişimi gelince de hücrelerin çoğalması için önemli bir rol oynar. Ancak, ideal bir değer olarak kabul edilebilir hiçbir kesin gözenek boyutu, bazı çalışmalar gösterdi daha yüksek bioactivity daha küçük gözenekli iken diğerleri daha iyi kıkırdak yeniden oluşturma büyük gözenekler ile gösterdi. Macropores (< 500 µm) hücre eki ve daha iyi mekanik özellikleri22,23micropores (150-250 µm) kolaylaştırmak iken doku Qafqaz, besin kaynağı ve atık kaldırma kolaylaştırmak. İmplante iskele işleme, zaman yeterli mekanik bütünlük olmalıdır implantasyon ve istenen amacı tamamlanması kadar. Toplam basınç modülü doğal eklem kıkırdak için 0,1-2 aralığında olduğu bildirilmiştir MPa bağlı olarak yaş, cinsiyet ve test edilmiş konum4,24,25,26,27 ,28,29.
Bizim önceki çalışma11' de 3D baskı güçlendirilmiş CNCs sodyum aljinat ve jelatin bir matris içeren bir hidrojel mürekkep gelen polimer ağ (IPN) interpenetrating bir çift çapraz gözenekli bioscaffolds imal etmek kullanıldı. 3D yazdırma yolu nerede nanocrystals tercihen (61-%76 arasında yönlendirme derecesi) yazdırma yönde yönlendirmek düzgün ve degrade gözenek yapıları (80-2.125 µm) ile 3D iskele ulaşmak için optimize edildi. Burada, biz mevcut devamı Bu işe ve hidrojel iskele simüle vücut koşullarında porozite etkisi 3D mekanik özellikleri yazdırılan gösterir. Burada kullanılan CNCs daha önce rapor tarafımızdan cytocompatible ve non-toksik (kuluçka 15 gün sonra teyit edilen30Yani, hücre büyümesi) olmak. Ayrıca, iskele dağılması aynı CNCs sodyum aljinat ve jelatin gösterdi yüksek gözeneklilik, fosfat tampon serum ve cytocompatibility Mezenkimal Kök hücre5doğru yüksek alımını kullanarak yolu ile hazırlanmıştır. Bu eser hidrojel mürekkep işleme, gözenekli iskele, 3D baskı ve sıkıştırma test göstermek için hedeftir. Şemaları işleme rotanın şekil 1' de gösterilir.
1. kara filmin tarih öncesi hazırlanması
2. hidrojel mürekkep hazırlanması
3. ölçü hidrojel rheological özelliklerinin
NTE: rheological özellikleri düzgün bir plaka üzerinde koni geometri kullanarak gerçekleştirmek CP25-2-SN7617, çapı 25 mm, 2 ° nominal açı ve boşluğu yüksekliği 25 ° C'de 0.05 mm
4. dosya hazırlama için 3D baskı
Not: Cura 2.4.0 yazılımı 3D İskele (20 mm3) üç tür gözenekleri olan tasarlamak için kullanılır. 1-üniforma gözenekleri 0.6 mm, 2-üniforma gözenekleri 1.0 mm ve 3-gradient gözenekleri aralığı 0.5-1 mm.
5. 3D gözenekli iskele yazdırma
6. 3D polietilenin iskele baskılı
7. sıkıştırma testi
Not: Su 37 ° C'de 100 N yük hücresi ile sıkıştırma testleri gerçekleştirmek
Dayalı CNCs nanocomposite hidrojel mürekkep davranış (Şekil 2bir) inceltme güçlü Newton bükme gösterir. Beş büyüklük 50 s-1 (≈50 s-1 tipik makaslama oranı 3D yazdırma sırasında deneyimli olmak) kesme hızında 22.60 Pa.s değerine göre belirgin viskozite 1,55 × 105 Pa.s düşük kesme hızında (0,001 s-1) damla31 . Hidrojel mürekkep depolama modülü G viskoelastik katı davranış se...
3D baskı hidrojel mürekkebin uygun rheological özellikleri gerektirir. Düşük viskozite mürekkep şekli ekstrüzyon sonra korumak değil iken yüksek viskozite mürekkep, ekstrüzyon için aşırı basınç gerektirir. Tüm hidrojel mürekkebin viskozite malzemeyi konsantrasyon denetlenebilir. Bizim önceki çalışma11ile karşılaştırıldığında, yazdırılan iskele çözümlemesini geliştirmek için yardımcı olan konsantre hidrojel mürekkeple kaynaklanan 9.9 wt % 5.4 hidrojel mür...
Yazarlar ifşa gerek yok.
Bu çalışmada mali Knut ve Alice Wallenberg Vakfı (Wallenberg ahşap Bilim Merkezi), İsveçli Araştırma Konseyi, VR (Bioheal, DNR 2016-05709 ve DNR 2017-04254) tarafından desteklenmektedir.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
60 mL syringe | Structur3D Printing | ||
Alginic acid sodium salt | Sigma-Aldrich | 9005-38-3 | |
Anhydrous calcium chloride | Sigma-Aldrich | 10043-52-4 | |
Clamps, three pronged, Talon | VWR | 241-0404 | 102 mm, Dual adjustment clamp, large, clamp extension 127 mm |
Cura 2.4.0 | Ultimaker | Free slicing software | |
Discov3ry Complete | Structur3D Printing | Ultimaker 2+ 3D printer integrated with Discov3ry paste extruder | |
Gelatin from bovine skin | Sigma-Aldrich | 9000-70-8 | |
Glutaraldehyde solution 50 wt. % in H2O | Sigma-Aldrich | 111-30-8 | |
homogenizer | SPX | APV-2000 | |
Instron 5960 | Instron | Instron 5960, Biopuls Bath, 100 N load cell, 37 °C, | |
Physica MCR 301 rheometer | Anton Paar | CP25-2-SN7617, gap height 0.05 mm, 25 °C | |
Sorvall Lynx 6000 centrifuge | AB Ninolab | s/n 41881692 | F12-rotor (6x500 ml) |
stainless steel nozzle | Structur3D Printing | 800, 600 and 400 µm | |
thingsinverse | MakerBot's | sharing and downloading 3D printable things in form of stl files | |
ultra sonication | Qsonica, LLC | Q500 | |
Unbarked wood chips | Norway spruce(Picea abies) | dry matter content of 50–55% |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır