Proliferatif Olmayan ve Proliferatif Retinopatilerle Farelerin Tüm Mount Retinalarında Vasküler Parametrelerin Nicelemesi

Özet

Bu makalede, tüm mount retinal preparatları için iyi kurulmuş ve tekrarlanabilir bir lektin lekesi testi ve proliferatif ve proliferatif olmayan retinopatilerde sıklıkla değiştirilen vasküler parametrelerin nicel ölçümü için gerekli protokoller açıklanmaktadır.

Özet

Retinopatiler, gözün nörosensör dokusunu etkileyen heterojen bir hastalık grubudur. Nörodejenerasyon, glioz ve vasküler fonksiyon ve yapıda ilerleyici bir değişiklik ile karakterizedirler. Retinopatilerin başlangıcı görsel algıda ince bozukluklarla karakterize edilse de, vasküler pleksustaki değişiklikler klinisyenler tarafından tespit edilen ilk belirtilerdir. Neovaskülarizasyonun yokluğu veya varlığı, retinopatinin proliferatif olmayan (NPDR) veya proliferatif (PDR) olarak sınıflandırılıp sınıflandırılmadığını belirler. Bu anlamda, birkaç hayvan modeli endotel değişiklikleri, nöronal ölüm ve retinada meydana gelen diğer olaylarda yer alan alttaki mekanizmaları belirlemek için her aşamanın spesifik vasküler özelliklerini taklit etmeye çalıştı. Bu yazıda, doğum sonrası (P)17'de yetişkinlerde ve erken doğum farelerinde retinal vasküler parametrelerin ölçümü için gerekli prosedürlerin tam bir açıklamasını sunacağız. Daha sonra mikroskobik görselleştirme için tüm montajlarda Isolectin GSA-IB4 ile retinal vasküler boyama yapmak için protokolleri detaylandıracağız. Image J Fiji yazılımı ile görüntü işleme için önemli adımlar da sağlanmaktadır, bu nedenle okuyucular damar yoğunluğunu, çapını ve tortusitesini, damar dallanmasını ve ayrıca avasküler ve neovasküler alanları ölçebilecektir. Bu araçlar hem proliferatif olmayan hem de proliferatif retinopatilerdeki vasküler değişiklikleri değerlendirmek ve ölçmek için son derece faydalıdır.

Giriş

Gözler iki arterio-venöz sistem tarafından beslenir: koroidal vaskülat, retina pigmentli epitel ve fotoreceptörleri sulayan harici bir damar ağı; ve ganglion hücreleri tabakasını ve retinanın iç nükleer tabakasını sulayan nöro-retinal ^vaskülat1. Retina vaskülatürü, uygun görsel sinyal transdüksiyonunun sağlanması için retina hücrelerine besin ve oksijen sağlayan ve atık ürünleri toplayan organize bir damar ağıdır. Bu vaskülatın bazı belirgin özellikleri vardır: otonom innervasyon eksikliği, damar tonunun içsel retina mekanizmaları tarafından düzenlenmesi ve karmaşık bir retinal-kan bariyerine sahip ^olması2. Bu nedenle, r....

Protokol

C57BL/6J fareler, OFTALMIK ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımı için ARVO Bildirimi'nin yönergelerine göre ele alındı. Deneysel prosedürler, Córdoba Ulusal Üniversitesi Kimya Bilimleri Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (CICUAL) tarafından tasarlanmış ve onaylanmıştır (HCD 1216/18).

1. Tampon çözeltilerinin ve reaktiflerin hazırlanması

1. 1x fosfat tampon salin (PBS) hazırlanması: 8 g sodyum klorür (NaCl), 0,2 g potasyum klorür (KCl), 14,4 g disodium-hidrojen ekleyin fosfat dihidrat (_{Na2HPO4 2H2O}) ve 0,24 g potasyum-dihidrojen fosfat (_KH2PO4) il....

Sonuçlar

Protokol bölümünde açıklandığı gibi, tek bir floresan boyama testinden vasküler morfolojiyi elde edebilir ve çeşitli ilgi parametrelerini nicel olarak değerlendirebilirsiniz. Belirli bir değişikliğin araştırılması, çalışılan retinopatinin türüne bağlı olacaktır. Bu makalede, avasküler ve neovasküler alanlar, tortuozite ve dilatasyon proliferatif retinopatinin bir fare modelinde değerlendirilmiş, vasküler dallanma ve yoğunluk ise proliferatif olmayan bir retinopatiye neden olan mets fare .......

Tartışmalar

Retinopatilerin hayvan modelleri vasküler gelişim, tadilat veya patolojik anjiogenez çalışmak için güçlü araçlardır. Bu çalışmaların sahadaki başarısı, in vivo ve ölüm sonrası farelerden veri sağlayan çok çeşitli tekniklerin gerçekleştirildiğini sağlayan dokuya kolay ^{erişime dayanır26,27}. Ayrıca, in vivo çalışmalar ve klinik analiz arasında, bu modellere katı izlenebilirlik ve güvenilirlik sağlayan.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminuim foil
Bovine Serum Albumin	Merck	A4503	quality
Calcium chloride dihydrate	Merck	C3306
Hydrochloric acid	Biopack	9632.08
Confocal Microscope FV1200	Olympus	FV1200	with motorized plate
Covers	Paul Marienfeld GmnH & Co.	111520
Dissecting Microscope	NIKON	SMZ645
Disodium-hydrogen-phosphate dihydrate	Merck	119753
200 µL  tube	Merck	Z316121
Filter paper	Merck	WHA5201090
Incubator shaker GyroMini	LabNet International	S0500
Isolectin GS-IB4 From Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 488 Conjugate	Invitrogen	I21411
Poly(vinyl alcohol) (Mowiol 4-88)	Merck	475904
Paraformaldehyde	Merck	158127
pHmeter	SANXIN	PHS-3D-03
Potassium chloride	Merck	P9541
Potassium-dihydrogen phosphate	Merck	1,04,873
Slides	Fisher Scientific	12-550-15
Sodium chloride	Merck	S3014
Sodium hydroxide	Merck	S5881
Tris	Merck	GE17-1321-01
Triton X-100	Merck	X100-1GA
Vessel Analysis Fiji software	Mai Elfarnawany		https://imagej.net/Vessel_Analysis