Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

Özet

Bu protokol, miyelin oligodendrosit glikoprotein kullanılarak bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin indüklenmesini ve klinik bir skorlama sistemi kullanılarak hastalık sürecinin izlenmesini açıklamaktadır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit ile ilişkili semptomlar, hastalık sürecini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için fare femur mikro-bilgisayarlı tomografi analizi ve açık alan testi kullanılarak analiz edilir.

Özet

Multipl skleroz (MS), inflamatuar infiltrasyon, demiyelinizasyon ve aksonal hasar ile karakterize tipik bir santral sinir sistemi (SSS) otoimmün hastalığıdır. Şu anda, MS'i tamamen tedavi etmek için herhangi bir önlem yoktur, ancak hastalığın ilerlemesini kontrol etmek ve hafifletmek için çoklu hastalık modifiye edici tedaviler (DMT) mevcuttur. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) ile MS hastalarının SSS patolojik özellikleri arasında anlamlı benzerlikler vardır. EAE, MS ilaçlarının etkinliğini belirlemek ve MS hastalığı için yeni tedavilerin geliştirilmesini araştırmak için temsili bir model olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Farelerde EAE'nin aktif indüksiyonu stabil ve tekrarlanabilir bir etkiye sahiptir ve özellikle ilaçların veya genlerin otoimmün nöroinflamasyon üzerindeki etkilerini incelemek için uygundur. C57BL/6J farelerin miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG_35-55) ile bağışıklanması yöntemi ve klinik skorlama sistemi kullanılarak hastalık semptomlarının günlük değerlendirilmesi esas olarak paylaşılmaktadır. MS'in çeşitli klinik bulgularla karmaşık etiyolojisi göz önüne alındığında, mevcut klinik skorlama sistemi hastalık tedavisinin değerlendirilmesini karşılayamamaktadır. Tek bir müdahalenin eksikliklerini önlemek için, MS hastalarında anksiyete benzeri ruh hallerinin ve osteoporozun klinik belirtilerine dayanarak EAE'yi değerlendirmek için yeni göstergeler, MS tedavisinin daha kapsamlı bir değerlendirmesini sağlamak için oluşturulmuştur.

Giriş

Otoimmün hastalıklar, bağışıklık sisteminin kendi antijenlerine karşı bağışıklık tepkisinin neden olduğu, doku hasarı veya işlev bozukluğu ile sonuçlanan bir bozukluk spektrumudur¹. Multipl skleroz (MS), santral sinir sisteminde (SSS) polinöropatinin kronik otoimmün bir hastalığı olup, inflamatuar infiltrasyon, demiyelinizasyon ve nöronal aksonal dejenerasyon ile^{karakterizedir 2,3}. Şu anda, MS dünya çapında 2,5 milyon kadar insanı, çoğunlukla ailelerinin ve toplumun bel kemiği olan 20-40 yaş arası genç ve orta yaşlı insanları etkilemiştir. Bu durum aileler ve toplum üzerinde önemli etki....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Tongji Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi mevcut çalışmayı onayladı ve tüm hayvan bakım kurallarına uyuldu. Deneyler için 8-12 haftalık erkek veya dişi C57BL/6J fareler kullanıldı. Deney gruplarında yaş ve cinsiyetin aynı olması sağlanmış; aksi takdirde, hastalığa duyarlılık etkilendi. Fareler, sabit koşullar altında (oda sıcaklığı 23 ± 1 ° C, nem% 50 ±% 10) alternatif 12 saat açık ve karanlık döngülere sahip patojensiz belirli bir ortamda barındırıldı.

1. MOG_35-55 emülsiyonunun hazırlanması

1. Freund'un adjuvanını (kendisi 1 mg / mL ısı ile inaktive edilmiş MTB, H37Ra içeren) tamamlamak için ısıda inaktiv....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Farelerin bağışıklanmasından sonra, farelerin vücut ağırlığı günlük olarak kaydedilir ve klinik semptomları yukarıda açıklanan protokole göre değerlendirilir (adım 4). MOG peptidi ile aşılanmış C57BL / 6J farelerde, lezyonun yeri esas olarak omurilikle sınırlı olduğundan, EAE farelerinin patogenezi kuyruk ucundan başa doğru yayılır. Hastalığın başlangıcında, EAE fareleri kuyruğun zayıflığı ve sarkması, ardından arka bacakların zayıflığı, koordinasyonsuz hareket ve felç s.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

MS, MSS'nin demiyelinizan inflamatuar bir hastalığıdır ve gençlerde kronik sakatlığa neden olan en yaygın nörolojik bozukluklardan biridir ve ailelere ve topluma büyük bir yük getirmektedir ^3,4. MS her zaman organa özgü bir T hücresi aracılı otoimmün hastalık olarak sınıflandırılmıştır ve otoimmün sistemi CNS'yi yavaşça aşındırmaya teşvik eder, bu da vücutta birden fazla sistemi içerecektir²⁷. Tipik klini.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL syringe(with 26 G needle)	Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd	60017031
2 mL microcentrifuge tube	HAIKELASI	KY-LXG2A
22 G needle	Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd	60017208
Complete Freund’s Adjuvant	Sigma	F5881	Stored at 4 °C, 1 mg of heat-inactivated MTB (H37Ra) per mL
Conditioned place preference system	Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd		Animal behavior
Ethanol	Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd	10009218	Stored at RT
Locomotion activity (open field) video analysis system	Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd	DigBehv-002	Animal behavior
MOG35-55 peptide	Gill Biochemical Co., Ltd	GLS-Y-M-03590	Stored at -20 °C
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	BD	231141	Stored at 4 °C
Open field reaction chamber	Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd		Animal behavior
Pertussis toxin	Calbiochem	516560	Stored at 4 °C
Phosphate Buffered Saline			Made in our laboratory
Scissor	Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd	J21010
Sealing film	Heathrow Scientific	HS 234526B
Sorvall Legend Micro 21R Microcentrifuge	Thermo Scientific	75002447
Steel ball	QIAGEN	69975
TissueLyser II	QIAGEN	85300
Tweezer	Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd	JD1060
μCT 35 desktop microCT scanner	Scanco Medical AG, Bassersdorf, Switzerland