JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Настоящий протокол описывает индукцию экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита в мышиной модели с использованием миелинового олигодендроцитарного гликопротеина и мониторинг процесса заболевания с использованием клинической системы оценки. Экспериментальные симптомы, связанные с аутоиммунным энцефаломиелитом, анализируются с использованием микрокомпьютерного томографического анализа бедренной кости мыши и теста в открытом поле для всесторонней оценки процесса заболевания.

Аннотация

Рассеянный склероз (РС) является типичным аутоиммунным заболеванием центральной нервной системы (ЦНС), характеризующимся воспалительной инфильтрацией, демиелинизацией и повреждением аксонов. В настоящее время нет мер по полному излечению РС, но доступны множественные методы лечения, модифицирующие заболевание (ДМТ), для контроля и смягчения прогрессирования заболевания. Имеются существенные сходства между патологическими особенностями ЦНС экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ) и больных РС. EAE широко используется в качестве репрезентативной модели для определения эффективности лекарств от РС и изучения разработки новых методов лечения заболевания РС. Активная индукция EAE у мышей обладает стабильным и воспроизводимым эффектом и особенно подходит для изучения влияния лекарств или генов на аутоиммунное нейровоспаление. Метод иммунизации мышей C57BL/6J миелиновым олигодендроцитарным гликопротеином (MOG35-55) и ежедневная оценка симптомов заболевания с использованием клинической системы оценки в основном распространены. Учитывая сложную этиологию РС с разнообразными клиническими проявлениями, существующая клиническая балльная система не может удовлетворить оценку лечения заболевания. Чтобы избежать недостатков одного вмешательства, создаются новые показатели для оценки EAE на основе клинических проявлений тревожно-подобных настроений и остеопороза у пациентов с РС, чтобы обеспечить более всестороннюю оценку лечения РС.

Введение

Аутоиммунные заболевания представляют собой спектр расстройств, вызванных иммунным ответом иммунной системы на собственные антигены, что приводит к повреждению тканей или дисфункции1. Рассеянный склероз (РС) — хроническое аутоиммунное заболевание полинейропатии центральной нервной системы (ЦНС), характеризующееся воспалительной инфильтрацией, демиелинизацией и нейрональной аксональной дегенерацией 2,3. В настоящее время РС затронул до 2,5 миллионов человек во всем мире, в основном молодых людей и людей среднего возраста в возрасте 20-40 лет, которые часто являются основой своих семей и общества. Это нанесло значительный ущерб семьям и обществу 2,4.

РС – это многофакторное заболевание с разнообразными и сложными клиническими проявлениями. Помимо классических неврологических расстройств, характеризующихся воспалительной инфильтрацией и демиелинизацией, РС часто проявляет нарушения зрения, дискинезию конечностей, когнитивные и эмоциональные расстройства 5,6,7. Если пациенты с РС не получают надлежащего и правильного лечения, половина из них будет жить в инвалидных колясках через 20 лет, и почти половина из них будет испытывать депрессивные и тревожные симптомы, что приведет к гораздо более высоким уровням суицидальных мыслей, чем население в целом 8,9.

Несмотря на длительный период исследований, этиология РС остается неуловимой, а патогенез РС до сих пор не выяснен. Животные модели РС позволили служить инструментами тестирования для изучения развития заболеваний и новых терапевтических подходов, несмотря на значительные различия между иммунной системой грызунов и человека, в то же время разделяя некоторые основные принципы. Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (EAE) в настоящее время является идеальной животной моделью для изучения РС, которая использует аутоантигенный иммунитет к белкам миелина для индуцирования аутоиммунитета к компонентам ЦНС у восприимчивых мышей с добавлением полного адъюванта Фройнда (CFA) и коклюшного токсина (PTX) для усиления гуморального иммунного ответа. В зависимости от генетического фона и иммунных антигенов получают различные болезненные процессы, в том числе острые, рецидивирующе-ремиттирующие или хронические, имитирующие различные клинические формы РС 10,11,12. Соответствующие иммуногены, обычно используемые при построении моделей EAE, поступают из собственных белков ЦНС, таких как основной белок миелина (MBP), протеолипидный белок (PLP) или миелиновый олигодендроцитарный гликопротеин (MOG). У мышей, иммунизированных MBP или PLP, развивается рецидивирующе-ремиттирующий курс, а MOG вызывает хронический прогрессирующий EAE у мышей C57BL/6 11,12,13.

Основной целью модифицирующей болезнь терапии (ДМТ) является минимизация симптомов заболевания и улучшение функции6. Несколько препаратов используются клинически для облегчения рассеянного склероза, но ни один препарат еще не был использован для его полного излечения, что свидетельствует о необходимости синергетического лечения. Мыши C57BL/6 в настоящее время наиболее часто используются для построения трансгенных мышей, и в этой работе модель EAE, индуцированная MOG35-55 у мышей C57BL/6J с 5-балльной шкалой, была использована для мониторинга прогрессирования заболевания. Модели EAE также страдают от тревожного настроения и потери костной массы, а также от широко известных демиелинизирующих поражений. Здесь также описан метод оценки симптомов ЭАЭ с нескольких точек зрения с использованием теста в открытом поле и микрокомпьютерного томографического анализа (Микро-КТ).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

протокол

Комитет по уходу за животными Университета Тунцзи одобрил настоящую работу, и все руководящие принципы по уходу за животными были соблюдены. Для экспериментов использовались самцы или самки мышей C57BL/6J в возрасте от 8 до 12 недель. Было обеспечено, чтобы возраст и пол были одинаковыми в экспериментальных группах; в противном случае была затронута восприимчивость к заболеванию. Мышей размещали в специфической свободной от патогенов среде с чередованием 12-часового светового и темного циклов в постоянных условиях (комнатная температура 23 ± 1 °C, влажность 50% ± 10%), со свободным доступом к мышиной пище и воде.

1. Приготовление эмульсии MOG35-55

  1. Добавьте термоинактивированный лиофилизированный Микобактерий туберкулеза (MTB, H37Ra) к дополнению адъюванта Фройнда (который сам по себе содержит 1 мг/мл термоинактивированного MTB, H37Ra), в результате чего конечная концентрация МТБ составляет 5 мг/мл (см. Таблицу материалов).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Вся операция должна быть завершена в шкафу биобезопасности; не открывайте продуваемый воздух.
  2. Растворить лиофилизированный пептид MOG35-55 (см. Таблицу материалов) стерильным предварительно охлажденным фосфатно-буферным физиологическим раствором (PBS) (без ионов кальция и магния, рН 7,4) для получения раствора антигена в концентрации 2 мг/мл.
  3. Возьмите чистую микроцентрифужную трубку объемом 2 мл и добавьте в каждую трубку по одному стерилизованному стальному шарику размером 5 мм (см. Таблицу материалов).
  4. Добавьте 500 мкл полного адъюванта Фройнда, содержащего 5 мг/мл MTB и 500 мкл раствора антигена MOG35-55 , в вышеуказанную микроцентрифужную трубку, содержащую один стальной шарик.
  5. Осциллируйте вышеуказанную трубку на TissueLyser (см. Таблицу материалов) в течение 10 мин, охладите на льду в течение 10 мин и повторите четыре раза, чтобы хорошо перемешать и, наконец, сформировать белый вязкий раствор.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Хорошая эмульгация является ключевым этапом в приготовлении эмульсии MOG35-55 , поэтому требуется тщательное перемешивание. TissueLyser настроен на скорость 28 Гц.

2. Препарат коклюшного токсина (PTX)

  1. Готовят PTX с ddH2Oв концентрации 100 мкг/мл и хранят при 4 °C.
  2. Разбавьте раствор PTX 50 раз стерильным 1x PBS (без ионов кальция и магния, рН 7,4), чтобы получить раствор 200 нг/100 мкл для использования.

3. Создание модели животных EAE

  1. Постройте модель EAE, используя 8-12-недельных самцов или самок мышей C57BL/6J. Убедитесь, что мыши адекватно акклиматизированы к кормовой среде до иммунизации.
  2. Центрифугируют приготовленную эмульсию MOG35-55 (стадия 1) при 4 °C в течение 2-3 с нажатием кнопки Pulse оборудования (см. Таблицу материалов) для осаждения всех эмульсий в нижней части трубки.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Эмульсия MOG35-55 может храниться при -20 °C в течение нескольких дней. Чтобы избежать лекарственной недостаточности, рекомендуется использовать его как можно скорее.
  3. Прикрепите иглу весом 22 г к стволу шприца объемом 1 мл, аспирируйте эмульсию MOG35-55 и перенесите эмульсию MOG35-55 в новый ствол шприца объемом 1 мл. Закрепите соединение между стволом шприца объемом 1 мл и иглой 26 г с помощью уплотнительной пленки (см. Таблицу материалов).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Избегайте пузырьков воздуха при загрузке эмульсии MOG35-55 в шприцевые бочки объемом 1 мл.
  4. Протрите и продезинфицируйте место инъекции 70% этанолом.
  5. Вводят эмульсию MOG35-55 подкожно с каждой стороны спинного отдела мышей, по 100 мкл с каждой стороны. Наблюдайте за автоматическим образованием луковичных масс под кожей спины мышей после завершения операции инъекции.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что опытные экспериментаторы выполняют процесс иммунизации и что инъекция делается мягко и медленно, чтобы свести к минимуму давление на мышей.
  6. Вводят вышеуказанным мышам внутрибрюшинно со 100 мкл PTX (шаг 2).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Днем иммунизации является день 0. Кроме того, убедитесь, что мыши могут быть точно идентифицированы для последующей ежедневной оценки, например, с использованием цветового маркера на хвосте мышей.
  7. Вводят ту же дозу PTX на 2-й день после иммунизации.
  8. Подготовьте группу неиммунизированных мышей как мышей дикого типа (WT).

4. Клинический мониторинг мышей

  1. Записывайте массу тела мышей EAE и WT ежедневно.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Тяжесть EAE положительно коррелирует с потерей веса мышей, поэтому масса тела также является очень важным показателем мониторинга.
  2. Контролировать состояние мышей через 0-21 день после иммунизации с помощью системы 0-5 баллов, указанной в таблице 1.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Промежуточные симптомы засчитываются как плюс-минус 0,5 балла.

5. Испытание в открытом поле

ПРИМЕЧАНИЕ: Экспериментальные животные, отобранные для этого этапа, являются мышами EAE в раннем начале, пике и периодах ремиссии. Кроме того, в качестве контроля использовались мыши WT. Следует отметить, что все мыши были протестированы на тревожное поведение перед моделированием, чтобы исключить мышей с тревожными расстройствами для моделирования EAE. Кроме того, мыши EAE в пиковый и ремиссионный периоды с полной двигательной неспособностью были исключены из теста.

  1. Подготовьте систему видеоанализа 40 × 40 × 40см3 открытого поля и систему видеоанализа активности передвижения (открытого поля) (см. Таблицу материалов).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Камера установлена в положении, которое полностью закрывает коробку, реакционная комната равномерно освещена, а испытательная комната должна быть тихой зоной.
  2. Поместите подопытных мышей в испытательную комнату для привыкания за 1 ч до начала эксперимента.
  3. Распылите всю область 70% этанола и протрите чистым бумажным полотенцем, чтобы убедиться, что реакционная камера чистая перед началом теста.
  4. Извлеките каждую мышь по отдельности из своей клетки и поместите ее в один и тот же угол арены, прежде чем начать исследовать.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Нижняя часть коробки разделена на 16 сеток, из которых средняя область четырех сеток является центральной областью, а окружающая область - периферийной областью.
  5. Нажмите кнопку «Начать захват» в строке меню системы анализа видео, запишите время и начните съемку.
  6. Сохраняйте тишину в тестовой комнате.
  7. Позвольте мыши свободно двигаться в течение 5 минут во время процесса записи.
  8. Остановите систему сбора и сохраните видео.
  9. Вытащите мышь с арены, поместите ее обратно в клетку и приступайте к следующей мыши.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Очистите испытательную зону 70% этанолом между прогонами для удаления запахов и других веществ.
  10. Анализируйте результаты с помощью системы видеоанализа.

6. Анализ фенотипа кости

  1. Усыпление мышей EAE и WT путем вывиха шейки матки на 21-й день.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Персонал, выполняющий операции по вывиху шейки матки, должен быть хорошо обучен, чтобы свести к минимуму боль, перенесенную во время смерти животного.
  2. Заставьте мышь лежать ровно в рассекающем лотке и зафиксируйте конечности.
  3. Зажмите кожу задних конечностей мыши щипцами и вскройте ножницами кожу и мышечную ткань мыши.
  4. Отделите бедренную кость от большеберцовой и тазобедренной костей аккуратно ножницами.
  5. Удалите мышцу, прилипшую к бедренной кости, ножницами и поместите бедренную кость в 70% этанол при комнатной температуре.
  6. Сканирование дистальной бедренной кости с помощью системы микро-КТ (см. Таблицу материалов) с изотропным размером вокселя 10 мкм, с пиковым напряжением рентгеновской трубки 70 кВ и интенсивностью рентгеновского излучения 0,114 мА.
    ПРИМЕЧАНИЕ: 3D-фильтр Гаусса позволяет расшучивать 2D-пороговые изображения.
  7. Проанализируйте 100 срезов, отсканированных от среднего бедренного ствола, чтобы измерить параметры бедренной кости, включая объем кости, объем ткани, минеральную плотность кости, трабекулярное разделение, трабекулярное число, плотность трабекулярного соединения, а также толщину трабекулярной и корковой мышц.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Начиная с проксимального конца дистальной пластины роста бедренной кости у мышей, были обнаружены участки, полностью лишенные структур эпифизарной шапки, которые продолжали простираться на 100 срезов в сторону проксимальной бедренной кости, которые были вручную очерчены контурами на нескольких вокселях от внутренней поверхности коры для идентификации эпифизарных трабекул.
  8. Создавайте 3D-реконструкции путем укладки пороговых 2D-изображений из контурных областей в системе микро-КТ.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Результаты

После иммунизации мышей массу тела мышей регистрируют ежедневно, а их клинические симптомы оценивают по протоколу, описанному выше (этап 4). У мышей C57BL/6J, иммунизированных пептидом MOG, поскольку расположение поражения в основном ограничено спинным мозгом, патогенез мышей EAE распростран?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Обсуждение

РС является демиелинизирующим воспалительным заболеванием ЦНС и является одним из наиболее распространенных неврологических расстройств, вызывающих хроническую инвалидность у молодых людей, налагающих огромную нагрузку на семьи и общество 3,4. РС всег...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы признают поддержку со стороны Национального фонда естественных наук Китая (32070768, 31871404, 31900658, 32270754) и Государственной ключевой лаборатории исследований лекарственных средств.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
1 mL syringe(with 26 G needle)Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd60017031
2 mL microcentrifuge tubeHAIKELASIKY-LXG2A
22 G needleShanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd60017208
Complete Freund’s AdjuvantSigmaF5881Stored at 4 °C, 1 mg of heat-inactivated MTB (H37Ra) per mL
Conditioned place preference systemShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdAnimal behavior
EthanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10009218Stored at RT
Locomotion activity (open field) video analysis systemShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdDigBehv-002Animal behavior
MOG35-55 peptideGill Biochemical Co., LtdGLS-Y-M-03590Stored at -20 °C
Mycobacterium tuberculosis H37RaBD231141Stored at 4 °C
Open field reaction chamberShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdAnimal behavior
Pertussis toxinCalbiochem516560Stored at 4 °C
Phosphate Buffered SalineMade in our laboratory
ScissorShanghai Medical Instrument (group) Co., LtdJ21010
Sealing filmHeathrow ScientificHS 234526B
Sorvall Legend Micro 21R MicrocentrifugeThermo Scientific75002447
Steel ballQIAGEN69975
TissueLyser IIQIAGEN85300
TweezerShanghai Medical Instrument (group) Co., LtdJD1060
μCT 35 desktop microCT scannerScanco Medical AG, Bassersdorf, Switzerland

Ссылки

  1. Zhernakova, A., Withoff, S., Wijmenga, C. Clinical implications of shared genetics and pathogenesis in autoimmune diseases. Nature Reviews Endocrinology. 9 (11), 646-659 (2013).
  2. Filippi, M., et al. Multiple sclerosis. Nature Reviews Disease Primers. 4 (1), 43(2018).
  3. Dobson, R., Giovannoni, G. Multiple sclerosis - a review. Europen Journal of Neurology. 26 (1), 27-40 (2019).
  4. Rietberg, M. B., Veerbeek, J. M., Gosselink, R., Kwakkel, G., van Wegen, E. E. Respiratory muscle training for multiple sclerosis. Cochrane Database of Systematic Reviews. 12 (12), (2017).
  5. O'Brien, K., Gran, B., Rostami, A. T-cell based immunotherapy in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis. Immunotherapy. 2 (1), 99-115 (2010).
  6. Feinstein, A., Freeman, J., Lo, A. C. Treatment of progressive multiple sclerosis: what works, what does not, and what is needed. Lancet Neurology. 14 (2), 194-207 (2015).
  7. Li, H., Lian, G., Wang, G., Yin, Q., Su, Z. A review of possible therapies for multiple sclerosis. Molecular and Cellular Biochemistry. 476 (9), 3261-3270 (2021).
  8. Lewis, V. M., et al. depression and suicide ideation in people with multiple sclerosis. Journal of Affective Disorders. 208, 662-669 (2017).
  9. Boeschoten, R. E., et al. Prevalence of depression and anxiety in Multiple Sclerosis: A systematic review and meta-analysis. Journal of the Neurological Sciences. 372, 331-341 (2017).
  10. Constantinescu, C. S., Farooqi, N., O'Brien, K., Gran, B. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS). British Journal of Pharmacology. 164, 1079-1106 (2011).
  11. Glatigny, S., Bettelli, E. Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) as Animal Models of Multiple Sclerosis (MS). Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 8 (11), 028977(2018).
  12. Procaccini, C., De Rosa, V., Pucino, V., Formisano, L., Matarese, G. Animal models of Multiple Sclerosis. European Journal of Pharmacology. 759, 182-191 (2015).
  13. Mix, E., Meyer-Rienecker, H., Hartung, H. P., Zettl, U. K. Animal models of multiple sclerosis-potentials and limitations. Progress in Neurobiology. 92 (3), 386-404 (2010).
  14. DiToro, D., et al. Insulin-like growth factors are key regulators of T helper 17 regulatory T cell balance in autoimmunity. Immunity. 52 (4), 650-667 (2020).
  15. Jain, R., et al. Interleukin-23-induced transcription factor Blimp-1 promotes pathogenicity of T helper 17 cells. Immunity. 44 (1), 131-142 (2016).
  16. Du, C., et al. Kappa opioid receptor activation alleviates experimental autoimmune encephalomyelitis and promotes oligodendrocyte-mediated remyelination. Nature Communications. 7, 11120(2016).
  17. Yang, C., et al. Betaine Ameliorates Experimental Autoimmune Encephalomyelitis by Inhibiting Dendritic Cell-Derived IL-6 Production and Th17 Differentiation. The Journal of Immunology. 200 (4), 1316-1324 (2018).
  18. McGinley, A. M., et al. Interleukin-17A serves a priming role in autoimmunity by recruiting IL-1β-producing myeloid cells that promote pathogenic T cells. Immunity. 52 (2), 342-356 (2020).
  19. Kocovski, P., et al. Differential anxiety-like responses in NOD/ShiLtJ and C57BL/6J mice following experimental autoimmune encephalomyelitis induction and oral gavage. Laboratory Animals. 52 (5), 470-478 (2018).
  20. Seibenhener, M. L., Wooten, M. C. Use of the Open Field Maze to measure locomotor and anxiety-like behavior in mice. Journal of Visualized Experiments. (96), e52434(2015).
  21. Walsh, R. N., Cummins, R. A. The Open-Field Test: a critical review. Psychological Bulletin. 83 (3), 482-504 (1976).
  22. Tauil, C. B., et al. Depression and anxiety disorders in patients with multiple sclerosis: association with neurodegeneration and neurofilaments. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 54 (3), 10428(2021).
  23. Gentile, A., et al. Interaction between interleukin-1beta and type-1 cannabinoid receptor is involved in anxiety-like behavior in experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Neuroinflammation. 13, 231(2016).
  24. Hearn, A. P., Silber, E. Osteoporosis in multiple sclerosis. Multiple Sclerosis. 16, 1031-1043 (2010).
  25. Gibson, J. C., Summers, G. D. Bone health in multiple sclerosis. Osteoporosis International. 22, 2935-2949 (2011).
  26. Ye, S., Wu, R., Wu, J. Multiple sclerosis and fracture. The International Journal of Neuroscience. 123, 609-616 (2013).
  27. Zamvil, S. S., et al. Lupus-prone' mice are susceptible to organ-specific autoimmune disease, experimental allergic encephalomyelitis. Pathobiology. 62 (3), 113-119 (1994).
  28. Oh, J., Vidal-Jordana, A., Montalban, X. Multiple sclerosis: clinical aspects. Current Opinion in Neurology. 31 (6), 752-759 (2018).
  29. Smith, P. Animal models of multiple sclerosis. Current Protocols. 1 (6), 185(2021).
  30. Aharoni, R., Globerman, R., Eilam, R., Brenner, O., Arnon, R. Titration of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)-Induced experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model. Journal of Neuroscience Methods. 351, 108999(2021).
  31. Lassmann, H., Bradl, M. Multiple sclerosis: experimental models and reality. Acta Neuropathological. 133 (2), 223-244 (2017).
  32. Goverman, J., Perchellet, A., Huseby, E. S. The role of CD8(+) T cells in multiple sclerosis and its animal models. Current Drug Targets. Inflammation and Allergy. 4 (2), 239-245 (2005).
  33. Schultz, V., et al. Acutely damaged axons are remyelinated in multiple sclerosis and experimental models of demyelination. Glia. 65 (8), 1350-1360 (2017).
  34. McRae, B. L., et al. Induction of active and adoptive relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) using an encephalitogenic epitope of proteolipid protein. Journal of Neuroimmunology. 38 (3), 229-240 (1992).
  35. Zamvil, S., et al. T-cell clones specific for myelin basic protein induce chronic relapsing paralysis and demyelination. Nature. 317 (6035), 355-358 (1985).
  36. Jackson, S. J., Lee, J., Nikodemova, M., Fabry, Z., Duncan, I. D. Quantification of myelin and axon pathology during relapsing progressive experimental autoimmune encephalomyelitis in the Biozzi ABH mouse. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 68 (6), 616-625 (2009).
  37. Gudi, V., Gingele, S., Skripuletz, T., Stangel, M. Glial response during cuprizone-induced de- and remyelination in the CNS: lessons learned. Frontiers in Cellular Neuroscience. 8, 73(2014).
  38. Yu, Q., et al. Strain differences in cuprizone induced demyelination. Cell & Bioscience. 7, 59(2017).
  39. Dehghan, S., Aref, E., Raoufy, M. R., Javan, M. An optimized animal model of lysolecithin induced demyelination in optic nerve; more feasible, more reproducible, promising for studying the progressive forms of multiple sclerosis. Journal of Neuroscience Methods. 352, 109088(2021).
  40. Kuypers, N. J., James, K. T., Enzmann, G. U., Magnuson, D. S., Whittemore, S. R. Functional consequences of ethidium bromide demyelination of the mouse ventral spinal cord. Experimental Neurology. 247, 615-622 (2013).
  41. Haji, N., et al. TNF-alpha-mediated anxiety in a mouse model of multiple sclerosis. Experimental Neurology. 237, 296-303 (2012).
  42. Butler, E., Matcham, F., Chalder, T. A systematic review of anxiety amongst people with Multiple Sclerosis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 10, 145-168 (2016).
  43. Peres, D. S., et al. TRPA1 involvement in depression- and anxiety-like behaviors in a progressive multiple sclerosis model in mice. Brain Research Bulletin. 175, 1-15 (2021).
  44. Bouxsein, M. L., et al. Guidelines for assessment of bone microstructure in rodents using micro-computed tomography. Journal of Bone and Mineral Research. 25 (7), 1468-1486 (2010).
  45. Chappard, D., Retailleau-Gaborit, N., Legrand, E., Baslé, M. F., Audran, M. Comparison insight bone measurements by histomorphometry and microCT. Journal of Bone and Mineral Research. 20 (7), 1177-1184 (2005).
  46. Akhter, M. P., Lappe, J. M., Davies, K. M., Recker, R. R. Transmenopausal changes in the trabecular bone structure. Bone. 41 (1), 111-116 (2007).
  47. Wei, H., et al. Identification of Fibroblast Activation Protein as an Osteogenic Suppressor and Anti-osteoporosis Drug Target. Cell Reports. 33 (2), 108252(2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

187

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены