JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu çalışma, bir inhalasyon odasında tüm vücut boyunca silikanın solunması ile bir silikoz sıçan modeli oluşturma tekniğini açıklamaktadır. Silikozlu sıçanlar, insan silikozunun patolojik sürecini, iyi tekrarlanabilirlik ile kolay, uygun maliyetli bir şekilde yakından taklit edebilir.

Özet

Silikozisin en önemli nedeni, iş ortamında silikanın solunmasıdır. Bazı anatomik ve fizyolojik farklılıklara rağmen, kemirgen modelleri insan silikozunu incelemek için önemli bir araç olmaya devam etmektedir. Silikoz için, klasik patolojik sürecin, yeni üretilmiş kuvars parçacıklarının solunması yoluyla indüklenebilir olması gerekir, bu da özellikle insan meslek hastalığını indüklemek anlamına gelir. Bu çalışma, silikozisin patolojik dinamik evrim sürecini oluşturmak ve etkili bir şekilde taklit etmek için bir teknik tanımladı. Ayrıca, teknik, herhangi bir ameliyat gerektirmeden iyi bir tekrarlanabilirliğe sahipti. İnhalasyon maruz kalma sistemi üretildi, doğrulandı ve solunabilir partikül inhalasyonu ile ilgili toksikoloji çalışmaları için kullanıldı. Kritik bileşenler aşağıdaki gibidir: (1) bir hava akışı kontrolörü ile ayarlanmış toplu kuru SiO2 toz jeneratörü; (2) 3 yetişkin sıçanı barındıran 0,3m3 tüm vücut inhalasyon maruz kalma odası; (3) oksijen konsantrasyonunu, sıcaklığı, nemi ve basıncı gerçek zamanlı olarak düzenlemek için bir izleme ve kontrol sistemi; ve (4) laboratuvar teknisyenlerini ve çevreyi korumak için bir bariyer ve atık bertaraf sistemi. Özetle, mevcut protokol tüm vücut yoluyla inhalasyonu rapor eder ve inhalasyon odası, düşük mortalite, daha az yaralanma ve daha fazla koruma ile güvenilir, makul ve tekrarlanabilir bir sıçan silikotik modeli oluşturmuştur.

Giriş

Silikanın solunmasından kaynaklanan silikozis, Çin'deki en ciddi meslek hastalığıdır ve her yıl toplam meslek hastalığı raporlarının %80'inden fazlasını oluşturmaktadır1. Silikozisin etiyolojisi açıktır ve önlenebilir ve kontrol altına alınabilir, ancak etkili bir tedavi yöntemi mevcut değildir2. Birçok ilacın temel çalışmalarda etkili olduğu kanıtlanmıştır, ancak kesin olmayan klinik etkileri vardır 3,4. Bu nedenle, silikozisin patolojik ve fizyolojik mekanizmalarının hala araştırılması gerekmektedir.

Birçok çalışma, silikozun patogenezini araştırmak için sıçanların veya farelerin trakeasına bir kerelik silika infüzyonu kullanmıştır 5,6. Bu kemirgen silikotik modeller kısa sürede elde edilebilsede 7, bu yöntemlerin hayvan travması ve yüksek ölüm oranı gibi zorlukları vardı. Bazı çalışmalar, spesifik olmayan bir akciğer reaksiyonunu indüklemek için depolanmış silikanın akciğerlere aşılanmasını içermiştir, ancak farelerdesilikotik nodüllerden bahsetmemiştir 8. Ayrıca, akut silikozdan uzakta, mesleki ortamlarda silikaya kronik maruziyet, akciğerlerde önemli ölçüde daha düşük pulmoner inflamasyona neden oldu ve pro-apoptotik belirteçlerden ziyade anti-apoptotik belirteçlerin seviyelerini yükseltti9. Bu nedenle, silikozun patogenezini daha fazla araştırmak için güvenilir, makul ve tekrarlanabilir bir hayvan modeline ihtiyaç vardır.

Bu çalışma, silikozisli hastaların hastalık sürecini tüm vücut yoluyla silika inhalasyonu yoluyla taklit etmek için bir yöntemi tanımlamaktadır, hava ile verilen bir silika jeneratörü, bir tüm vücut odası ve bir atık bertaraf sisteminden oluşan bir inhalasyon odasındaki hava ile verilen parçacıklar. Bu yöntem basittir, kullanımı kolaydır ve silikozun patolojik dinamik evrim sürecini etkili bir şekilde taklit eder. Ayrıca, birçok olası mekanizma ve silikozun patogenezi bu yöntem kullanılarak tanımlanmıştır 10,11,12. Önerilen protokolün, silikoz araştırmalarının ilgili alanında daha fazla araştırmaya yardımcı olması beklenmektedir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Tüm hayvan deneyleri, Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na göre yürütülmüş ve Kuzey Çin Bilim ve Teknoloji Üniversitesi Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (protokol kodu LX2019033 ve 2019-3-3 onayı). Bu çalışma için 3 haftalık erkek Wistar sıçanları kullanıldı. Tüm sıçanlar odun talaşı ile statik kafeslerde tutuldu. Hayvanlar 12 saat / 12 saat aydınlık / karanlık döngüsünde tutuldu ve yiyecek ve su ad libitum sağlandı. Takip deneyleri 1 haftalık adaptif beslenmeden sonra yapıldı.

1. Hayvan hazırlama

  1. Varışta, tüm fareleri belirli bir patojen içermeyen (SPF) odada barındırın.
  2. Sağlıklı sıçanları rastgele iki gruba ayırın (n = 10): saf hava soluyan kontrol sıçanları ve silika soluyan silikozlu sıçanlar.

2. Silika hazırlama

DİKKAT: İnsan vücudu tarafından solunan silika tozu akciğerlere zarar verebilir. Bu nedenle, bireyler operasyonlar sırasında tulum, tıbbi eldiven ve koruyucu maske (N95) giymelidir.

  1. Silika parçacıklarını (Malzeme Tablosuna bakınız) her maruziyetten önce 1,5 saat akik harcı ile topraklayın. Bunun nedeni, taze kırılmış kuvarsın yaşlı kuvars13'ten daha fazla miktarda aktif oksijen türü üretmesi ve 1-5 μm çapındaki silikanın en patojenik olmasıdır.
  2. Öğütme işleminden sonra silikayı (30 g) elektronik terazi kullanarak tartın, cam bir kaba koyun ve silika parçacıklarının yüzeyindeki patojenleri ortadan kaldırmak için elektrikli ısıtmalı hava üfleme kurutucusunda 180 °C'de 6 saat pişirin (Malzeme Tablosuna bakın).

3. Sıçanlara silika maruziyeti

  1. Enjeksiyonu ve piyasada bulunan jeneratör sistemlerini bağlayın ( Malzeme Tablosuna bakın) ve silikayı (30 g) jeneratöre yerleştirin. Bağlantı hattının normal olup olmadığını, güç kablosunun bağlı olup olmadığını ve güç kaynağının normal olup olmadığını kontrol edin.
    1. Püskürtme kulesinin su seviyesini ve atık gaz arıtma cihazının nemlendiricisini ( Malzeme Tablosuna bakın) manuel olarak kontrol edin ve yetersizse su ekleyin (standart çizgiye kadar değil).
    2. Atık gaz arıtma cihazının püskürtme kulesine musluk suyu ve nemlendiriciye damıtılmış su ekleyin (Şekil 1).
  2. Koruyucu kabinin içinin negatif basınç durumunda olup olmadığını doğrulamak için egzoz gazı tahliye cihazını ( Malzeme Tablosuna bakın) ve hava kaynağı anahtarını açın.
    1. Soluma odasının altındaki sıvı karıştırma, toz karıştırma, saf gaz akış kontrol vanaları ve atık su tahliye vanasının kapalı olduğunu onaylayın.
  3. Soluma odasına toplam 10 sıçan yerleştirin (Malzeme Tablosuna bakınız) ve soluma bölmesini ve ekranlı dolap kapılarını kapatın.
  4. Gösterge panelinde veya bilgisayarda aşağıdaki deneysel parametreleri ayarlayın: kabin basıncı: -50 ila -30 Pa; oksijen konsantrasyonu:% 21; kabin sıcaklığı: 26-30 °C; nem oranı:% 30 -% 70; toz giriş hızı: 2.0-2.5 mL / dak; ve kabin toz konsantrasyonu: 60 ± 5 mg/m3.
    NOT: Deney sırasında deney verilerini ve ekipman durumunu sürekli olarak gözlemleyin. Ekipman arızası alarmı zamanında işlem yapılmasını istedi.
    1. Her hayvanı haftada 5 gün, günde 3 saat sürekli olarak silikaya maruz bırakın ve kontrol grubundaki hayvanların saf hava solumasına izin verin.
  5. Deneyin tamamlanmasının ardından, karışık gaz akış kontrol vanasını kapatın ve saf gaz akış vanasını açın. Saf gazı sürekli olarak inhalasyon odasına enjekte edin.
    NOT: Bu çalışmada, inhalasyon odasındaki zehirli gaz tamamen yerine konana kadar saf gaz akışı (7.0-7.5m3/h) en az 20 dakika süreyle enjekte edilmiştir.
    1. Saf hava akış valfini kapatın, kapıyı açın, fareleri dışarı çıkarın ve patojensiz odaya geri gönderin.
  6. Fare rafını ve branşman borusu bileşenlerini sırayla çıkarın ve temizlik için lavaboya yerleştirin. Durulamadan sonra, otomatik temizleme valfini kapatın ve kapağı açın.
    1. İç duvarı temiz bir bezle silin veya depoyu kurutmak için saf gazı açın. Son olarak, dezenfeksiyonu gerçekleştirin. % 75 etanol ile temizledikten ve dezenfekte ettikten sonra, egzoz kapağını kapatın ve mümkün olan en kısa sürede, nemi buharlaştırmak için inhalasyon kabininin kapısını hafifçe açın, böylece inhalasyon kabininin içi kuru kalır.
  7. Deney sırasında silika konsantrasyonunun stabilitesini sağlamak için haftada iki kez üreticinin talimatlarını ( Malzeme Tablosuna bakın) izleyerek kabindeki silika konsantrasyonunu kapsamlı bir atmosferik örnekleyici ile kontrol edin. Numune almadan önce atmosferik örnekleyiciyi kalibre edin.
    1. Gravimetrik belirleme için dijital tek bölmeli analitik terazi kullanın. Hesaplanan silika konsantrasyonu 65 mg /m3 idi (Şekil 1 ve Tablo 1).
      NOT: Filtre kağıdını silika emiliminden önce ve sonra tartın. Silika konsantrasyonu aşağıdaki formül12 kullanılarak hesaplanmıştır:
      figure-protocol-5343
      burada W2 = numune alımından sonra filtre kağıdının ağırlığı, W1 = numune almadan önce filtre kağıdının ağırlığı ve V = havanın hacmi.

4. Akciğer dokularının edinilmesi ve sabitlenmesi

  1. Sıçanlara intraperitoneal pentobarbital (100 mg/kg vücut ağırlığı) ve Lidokain (4 mg/kg vücut ağırlığı) enjeksiyonu ile ötenazi yapın. Ölümü kalp atışı kaybıyla değerlendirin14.
  2. Deneyin sonunda, sağ alt akciğer, böbrek, karaciğer, dalak ve kemiği en az 4 saat boyunca% 24 paraformaldehit ile sabitleyin, parafine gömün ve 5 μm'lik bölümlerekesin 7,15.

5. Hematoksilen ve eozin (H & E) boyama

  1. Parafin bölümlerini ksilol içinde deparafin (Malzeme Tablosuna bakınız) her16 dakika boyunca 10 dakika boyunca iki kez deparafin edin ve% 100 etanol,% 95 etanol,% 90 etanol,% 80 etanol,% 70 etanol ve damıtılmış su içinde her biri 3 dakika boyunca rehidre edin.
  2. Bölümleri hematoksilen ile 5 dakika boyayın ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve ardından bölümleri suylayıkayın 10.
  3. Bölümleri% 2 hidroklorik alkole ve ardından renk maviye dönene kadar damıtılmış suya yerleştirin.
  4. Bölümleri 1 dakika boyunca eozin ile boyayın,% 95 etanol ile kurutun, ksilen ile şeffaf hale getirin, nötr sakızla kapatın ve ışık mikroskobu altında gözlemleyin12.

6. İmmünohistokimyasal boyama

  1. Parafin bölümlerini rutin olarak suyla yıkayın.
  2. Antijenleri 80 saniye boyunca yüksek basınçta (60 kPa) ve yüksek sıcaklıkta (100 °C) maruz bırakın ve ardından endojen peroksidazları ortadan kaldırmak için 15 dakika boyunca endojen bir peroksidaz blokeri (% 3) ile bloke edin7.
  3. Numuneleri CD68'e karşı yönlendirilmiş antikorlarla (1:200 seyreltme-4 μL CD68 ila 396 μL antikor seyreltici ekleyin; Malzeme Tablosuna bakınız) gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin.
  4. Numuneleri ikincil bir antikor (HRP konjuge keçi anti-fare IgG polimeri; Malzeme Tablosuna bakınız) ile 37 ° C'de 30 dakika inkübe edin ve ardından numuneleri 1x PBS ile yıkayın.
  5. İmmünoreaktiviteyi 3,3-diaminobenzidin (DAB; bkz . DAB'ı dokuya uyguladıktan sonra, dokunun lekelenmesini ışık mikroskobu altında gözlemleyin10.
    NOT: Boyanma süresi dokunun boyanma süresine göre birkaç saniye ile birkaç dakika arasında değişmiştir. Boyama işlemi, bölümler suya yerleştirilerek durduruldu. Bu çalışmada, dokunun kahverengi boyanması CD68'in pozitif ekspresyonunu temsil etti. Tüm antikorlar 1x PBS'de seyreltildi.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Önerilen yöntem kullanılarak, sıçanlarda bazı potansiyel mekanizmalar ve silikoz patogenezi araştırıldı. İnhalasyon odasının şeması Şekil 1'de gösterilmiştir. Oda, daha önce açıklandığı gibi hava ile verilen bir silika jeneratörü, bir tüm vücut odası ve bir atık bertaraf sisteminden oluşuyordu17. Önceki çalışmalarda solunum fonksiyonları, serum ve akciğerde inflamatuar faktörlerin seviyeleri, kollajen birikimi ve miyofibroblast fa...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Silikozun önde gelen nedeni olan silika, kalıplamada belirleyici bir rol oynar. Pnömokonyozlu hastalar tarafından solunan silika parçacıkları, mekanik kesim ile üretilen taze, serbest silika parçacıklarıdır. Silika, ya doğrudan taze parçalanmış parçacık yüzeylerinde ya da makrofajlar üzerindeki etkisiyle dolaylı olarak reaktif oksijen türleri üretebilir25. Bu nedenle, silika parçacıklarının öğütülmesi çok önemlidir. Önerilen protokolde silika, daha ince, daha düz...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmezler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82003406), Hebei Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (H2022209073) ve Hebei Eğitim Departmanı Bilim ve Teknoloji Projesi (ZD2022127) tarafından finanse edilmiştir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Air detector (compressive atmospheric sampler)Qingdao Xuyu Environmental Protection Technology Co. LTD
Anatomical table No specific brand is recommended.
Antibody of CD68Abcamab201340
DABZSGB-BIOZLI-9018
Electric heating air-blowing drierShanghai Yiheng Scientific Instrument Co., LTD
Electronic balanceOHRUS
Embedding machineleica
Exhaust gas discharge device  HOPE Industry and Trade Co. Ltd.
Generator systems HOPE Industry and Trade Co. Ltd.
Gloves (thin laboratory gloves)The secco medical
Hematoxylin and eosinBaSO Diagnostics Inc.BA4025
HOPE MED 8050 exposure control apparatusHOPE Industry and Trade Co. Ltd.
Inhalation chamber HOPE Industry and Trade Co. Ltd.
Injection syringe No specific brand is recommended.
Light microscope olympus
Object slideshitai
PV-6000 (HRP-conjugated goat anti-mouse IgG polymer)Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co. Ltds5631
Silicon dioxideSigma-Aldrich
Slicing machineleicaRM2255
Waste gas treatment deviceHOPE Industry and Trade Co. Ltd.
Wet boxCooperative plastic Products Factory
XylolTianjin Yongda Chemical Reagent Co., LTD

Referanslar

  1. Li, J., et al. The burden of pneumoconiosis in China: an analysis from the Global Burden of Disease Study. BMC Public Health. 22 (1), 1114(2019).
  2. The Lancet Respiratory Medicine. The world is failing on silicosis. The Lancet. Respiratory Medicine. 7 (4), 283(2019).
  3. Li, T., Yang, X., Xu, H., Liu, H. Early identification, accurate diagnosis, and treatment of silicosis. Canadian Respiratory Journal. 3769134, (2022).
  4. Adamcakova, J., Mokra, D. New insights into pathomechanisms and treatment possibilities for lung silicosis. International Journal of Molecular Sciences. 22 (8), 4162(2021).
  5. Li, Y., et al. Thalidomide alleviates pulmonary fibrosis induced by silica in mice by inhibiting ER stress and the TLR4-NF-κB pathway. International Journal of Molecular Sciences. 23 (10), 5656(2022).
  6. Zhang, E., et al. Exosomes derived from bone marrow mesenchymal stem cells reverse epithelial-mesenchymal transition potentially via attenuating Wnt/β-catenin signaling to alleviate silica-induced pulmonary fibrosis. Toxicology Mechanisms and Methods. 31 (9), 655-666 (2021).
  7. Li, S., et al. N-Acetyl-Seryl-Asparyl-Lysyl-Proline regulates lung renin angiotensin system to inhibit epithelial-mesenchymal transition in silicotic mice. Toxicology and Applied Pharmacology. 408, 408(2020).
  8. Walters, E. H., Shukla, S. D. Silicosis: Pathogenesis and utility of animal models of disease. Allergy. 76 (10), 3241-3242 (2021).
  9. Langley, R. J., Mishra, N. C., Peña-Philippides, J. C., Hutt, J. A., Sopori, M. L. Granuloma formation induced by low-dose chronic silica inhalation is associated with an anti-apoptotic response in Lewis rats. Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 73 (10), 669-683 (2010).
  10. Jin, F., et al. Ac-SDKP Attenuates activation of lung macrophages and bone osteoclasts in rats exposed to silica by inhibition of TLR4 and RANKL signaling pathways. Journal of Inflammation Research. 14, 1647-1660 (2021).
  11. Xu, H., et al. A new anti-fibrotic target of Ac-SDKP: inhibition of myofibroblast differentiation in rat lung with silicosis. PloS One. 7 (7), e40301(2012).
  12. Li, S., et al. Ac-SDKP increases α-TAT 1 and promotes the apoptosis in lung fibroblasts and epithelial cells double-stimulated with TGF-β1 and silica. Toxicology and Applied Pharmacology. 369, 17-29 (2019).
  13. Vallyathan, V., Shi, X. L., Dalal, N. S., Irr, W. Generation of free radicals from freshly fractured silica dust. Potential role in acute silica-induced lung injury. The American Review of Respiratory Disease. 138 (5), 1213-1219 (1988).
  14. Khoo, S. Y., Lay, B. P. P., Joya, J., et al. Local anesthetic refinement of pentobarbital euthanasia reduces abdominal writhing without affecting immunohistochemical endpoints in rats. Lab Anim. 2018 (52), 152-162 (2018).
  15. Chooi, K. F., Rajendran, D. B. K., Phang, S. S. G., Toh, H. H. A. The dimethylnitrosamine induced liver fibrosis model in the rat. Journal of Visualized Experiments. 112 (112), (2016).
  16. Valentin, J., Frobert, A., Ajalbert, G., Cook, S., Giraud, M. -N. Histological quantification of chronic myocardial infarct in rats. Journal of Visualized Experiments. 118 (118), (2016).
  17. Zhang, H., et al. silicosis decreases bone mineral density in rats. Toxicology and Applied Pharmacology. 348, 117-122 (2018).
  18. Zhang, B., et al. Targeting the RAS axis alleviates silicotic fibrosis and Ang II-induced myofibroblast differentiation via inhibition of the hedgehog signaling pathway. Toxicology Letters. 313, 30-41 (2019).
  19. Li, S., et al. Silica perturbs primary cilia and causes myofibroblast differentiation during silicosis by reduction of the KIF3A-repressor GLI3 complex. Theranostics. 10 (4), 1719-1732 (2020).
  20. Gao, X., et al. Pulmonary silicosis alters microRNA expression in rat lung and miR-411-3p exerts anti-fibrotic effects by inhibiting MRTF-A/SRF signaling. Molecular therapy. Nucleic Acids. 20, 851-865 (2020).
  21. Cai, W., et al. Differential expression of lncRNAs during silicosis and the role of LOC103691771 in myofibroblast differentiation induced by TGF-β1. Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, (2020).
  22. Cai, W., et al. Transcriptomic analysis identifies upregulation of secreted phosphoprotein 1 in silicotic rats. Experimental and Therapeutic. 21 (6), (2021).
  23. Li, Y., et al. Minute cellular nodules as early lesions in rats with silica exposure via inhalation. Veterinary Sciences. 9 (6), 251(2022).
  24. Mao, N., et al. Glycolytic reprogramming in silica-induced lung macrophages and silicosis reversed by Ac-SDKP treatment. International Journal of Molecular Sciences. 22 (18), 10063(2021).
  25. Hamilton, R. F., Thakur, S. A., Holian, A. Silica binding and toxicity in alveolar macrophages. Free Radical Biology and Medicine. 44 (7), 1246-1258 (2008).
  26. Park, R., et al. Exposure to crystalline silica, silicosis, and lung disease other than cancer in diatomaceous earth industry workers: a quantitative risk assessment. Occupational and Environmental. 59 (1), 36-43 (2002).
  27. Honnons, S., Porcher, J. M. In vivo experimental model for silicosis. Journal of Environmental Pathology, Toxicology and. 19 (4), 391-400 (2000).
  28. Lakatos, H. F., et al. Oropharyngeal aspiration of a silica suspension produces a superior model of silicosis in the mouse when compared to intratracheal instillation. Experimental Lung Research. 32 (5), 181-199 (2006).
  29. Li, B., et al. A suitable silicosis mouse model was constructed by repeated inhalation of silica dust via nose. Toxicology Letters. 353, 1-12 (2021).
  30. Hoy, R. F., Chambers, D. C. Silica-related diseases in the modern world. Allergy. 75 (11), 2805-2817 (2020).
  31. Davis, G. S. Pathogenesis of silicosis: current concepts and hypotheses. Lung. 164 (3), 139-154 (1986).
  32. Moss, O. R., James, R. A., Asgharian, B. Influence of exhaled air on inhalation exposure delivered through a directed-flow nose-only exposure system. Inhalation Toxicology. 18 (1), 45-51 (2006).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 188MaruziyetSolunabilir SilikaSolumaMesleki OrtamKuvars Par ac klarPatolojik S rend klenebilirnhalasyon OdasTeknikDinamik Evrim S reciTekrarlanabilirlikCerrahinhalasyon Maruz Kalma SistemiSiO2 Toz Jenerat rT m V cut nhalasyon Maruz Kalma Odaszleme ve Kontrol SistemiOksijen KonsantrasyonuS cakl kNemBas nBariyer Ve At k Bertaraf Sistemi

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır