JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Makale, pratik, gerçek dünya ortamlarında annenin kendi süt mikrobiyotasını kullanarak pastörize donör süt mikrobiyotasının yeniden yapılandırılması için bir protokolü açıklamaktadır. Etkili bakteri üremesi ve mikrobiyom modülasyonu gösterir ve bu prosedürün bir doğum hastanesinin ve ilgili insan sütü bankasının rutin bakımı içinde uygulanabilir uygulamasını destekler.

Özet

Annenin kendi sütü (MOM) yenidoğanlar için en eksiksiz besin kaynağıdır. Annelerin yeterli süt üretemediği veya emziremediği durumlarda tercih edilen alternatif, rutin olarak anne sütü bankaları tarafından sağlanan pastörize donör anne sütüdür (PDM). PDM, ticari olarak mevcut herhangi bir formüle kıyasla üstün bir besinsel ve immünolojik element yelpazesi sunar. Bununla birlikte, biyogüvenliği sağlamak için PDM, kommensal mikrobiyotayı inaktive eden ve belirli biyoaktif bileşikleri azaltan bir süreç olan pastörizasyona tabi tutulur. Bu çalışma, MOM'u mikrobiyal bir kaynak olarak kullanarak PDM mikrobiyotasını eski haline getirmek ve yaklaşımı gerçek dünyadaki bir klinik ortama uyarlamak için tasarlanmış bir protokol sunmaktadır.

Protokol, anneleri yeterli süt üretemeyen erken doğmuş bebeklere kişiselleştirilmiş donör sütü sağlamak amacıyla bir doğum hastanesinde ve ilgili anne sütü bankasında yürütülen bir klinik çalışmada uygulandı. Metodoloji, PDM'nin %10'u ile aşılanmasını ve ardından 37 ° C'de 4 saat boyunca inkübasyonu içerir. Mikrobiyolojik analiz, inkübasyon sonrası aşılanmış sütte (IM) başarılı bakteri üremesini gösterdi ve sulandırılmış sütün (RM) mikrobiyota profili MOM'unkine çok benziyordu ve bu da etkili mikrobiyota restorasyonunu gösteriyor. Bu sonuçlar, sulandırma protokolünün PDM'nin beslenme ve immünolojik kalitesini artırma potansiyeli ile yenidoğan bakımında uygulama için uygun olduğunu ve böylece anne sütüyle beslenmeyen yenidoğanların sağlığını ve gelişimini desteklediğini göstermektedir.

Giriş

Anne sütü, yeni doğanlar için en iyi beslenme kaynağı olarak kabul edilmektedir ve yalnızca temel makro ve mikro besinleri sağlamakla kalmaz, aynı zamanda antikorlar, sitokinler ve hücreler gibi bağışıklık sisteminin çeşitli metabolitleri ve bileşenleri de dahil olmak üzere karmaşık bir dizi element sağlar1. Ek olarak, anne sütündeki faydalı özellikler de bir kommensal mikroorganizma topluluğundan kaynaklanmaktadır. Anne sütünün tüm bu unsurları yenidoğanın gelişiminde çok önemli bir rol oynar1. Mikrobiyota olarak bilinen mikroorganizma topluluğu, diyet, anne yaşam tarzı, doğum şekli ve gebelik yaşı gibi faktörlerin bir kombinasyonundan etkilenir ve bu da her sütün belirli özelliklere sahip bir mikrobiyotaya sahip olmasına neden olur2. Anne sütü mikrobiyotasının yenidoğan gelişimine fayda sağladığı mekanizmalar, kommensal bakteriler tarafından kolonizasyon yoluyla enterik yüzeyin korunmasından, bağırsaktaki bağışıklık hücreleri ile etkileşime giren metabolitlerin üretimi yoluyla bağışıklık sistemi olgunlaşmasını teşvik etmeye kadar uzanır3. Bu nedenle, her annenin sütündeki kişiselleştirilmiş mikroorganizma profili, onu yeni doğanlar için kişiselleştirilmiş bir ilaç şekli haline getirir4.

Sağlıklı bir mikrobiyotanın varlığı, özellikle hastane ortamında olmaları ve olgunlaşmamış bir bağışıklık sistemine sahip olmaları nedeniyle bu dış etkilere karşı daha savunmasız olan prematüre bebekler için ekolojik nişi işgal ederek ve beslenmeyi destekleyerek yenidoğanın potansiyel olarak patojenik mikroorganizmalar tarafından kolonizasyona karşı korunmasına yardımcı olabilir. Ayrıca, erken doğum yapan anneler genellikle yeni doğan bebekleri için yeterli miktarda süt üretmekte zorluk çekerler. Süt üretimi tipik olarak daha düşüktür, gebelik yaşı5 ne kadar küçükse. Bu durumlarda, yenidoğanı beslemek için en iyi seçenek, İnsan Sütü Bankaları (HMB) tarafından sağlanan pastörize donör sütüdür6.

Brezilya, dünyanın en büyük ve en kapsamlı HMB ağına sahiptir7. Bu ağ, Sağlık Bakanlığı tarafından yönetilen ulusal birleşik sağlık sistemi (Sistema Único de Saúde) aracılığıyla ülke genelinde 160.000 L'den fazla pastörize donör insan sütünü (PDM) ebeveynlere ücretsiz olarak toplar, hazırlar ve dağıtır7. Pastörizasyon, yenidoğanlara yönelik bağışlanan sütün biyogüvenliğini sağlamak için gereklidir. Bu işlem genellikle, bir kase çiğ donör anne sütünün 30 dakika boyunca 62,5 ° C'de bir su banyosuna daldırılmasını içeren Holder yöntemi kullanılarak gerçekleştirilir 6,8. Elde edilen PDM daha sonra tüketime hazır olana kadar soğutma altında saklanır. Bununla birlikte, pastörizasyon, sütün kommensal mikrobiyotasının canlılığını azaltır ve çeşitli biyoaktif bileşenlerin biyoyararlanımını azaltır. Bunun nedeni, pastörizasyon işleminin patojenik mikroorganizmaların yenidoğana bulaşmasını önlemek için standartlaştırılmış olmasıdır. Bu bağlamda, 2017 yılında Cacho ve meslektaşları, bir annenin kendi sütünün kommensal mikrobiyotasını çeşitli oranlarda PDM9'a aşılayarak yeniden oluşturma olasılığını tanımladılar. Bulguları, annenin kendi sütünün% 10'luk bir konsantrasyonunun (MOM) kullanılmasının, MOM mikrobiyom profilinin orijinal bileşimini korumak için en uygun konsantrasyon olduğunu göstermiştir. Bu yaklaşım, tipik olarak mensal olmasına rağmen, sulandırılmış sütte orantısız bir şekilde bulunursa zararlı hale gelebilecek spesifik bakterilerin aşırı üreme riskini azaltır. Spesifik olarak, çalışma, 4 saat boyunca inkübe edilen 1:10'luk bir seyreltmenin (% 10 MOM +% 90 PDM), seyreltilmemiş MOM'da bulunanın yaklaşık% 60'ı - iyi dengelenmiş bir bakteri yükü ile sonuçlandığını gözlemledi - daha güvenli ve daha etkili bir yaklaşıma işaret ediyor. Buna karşılık, 3:10 gibi daha yüksek seyreltmeler, aşırı bakteri üremesine yol açarak, güvenliği sağlamak için kontrollü konsantrasyonlara ve koşullara olan kritik ihtiyacı vurguladı.

Bu makalede, PDM'de anne sütü mikrobiyotasının sulandırılmasına yönelik bu prosedürün, bir doğum hastanesinin ve ilgili insan sütü bankasının rutin bakımı dahilinde gerçek dünyadaki durumlarda gerçekleştirilebileceğini gösteriyoruz.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Bu protokol, araştırma grubumuz (Brazilian Registry of Clinical Trials, ReBEC RBR-729kr8x) tarafından yürütülen bir klinik araştırmanın prosedürlerinin bir parçası olarak gerçekleştirilmiş ve Etik Kurul onayı almıştır (süreç CAAE nº 41063520.4.0 000.0121) ve randomizasyon ve numune harmanlaması öncesinde tüm katılımcılardan bilgilendirilmiş onam alınmıştır.

Süt mikrobiyotasının sulandırılması prosedürü üç adımda yapılır:

1. Annenin çiğ sütünün alınması

NOT: Süt elde etme prosedürü başka bir yerde bulunabilir10,11.

  1. İşlemden önce, etik kurula göre anneden bilgilendirilmiş onam alın ve anneyi rahatlatmak için prosedürle ilgili her türlü şüphe, endişe, korku ve endişeyi gidererek anneye yapılacak her şeyi açıkladığınızdan emin olun.
  2. Annenin, her doğum servisinin belirlenmiş yerel hijyen standartlarına uygun olarak, üniteden sorumlu hemşirenin gözetiminde sterilize edilmiş bir kaba elektrikli göğüs pompası kullanarak süt sağmasını sağlayın.
  3. Toplandıktan sonra, sütün bulunduğu kabı annenin bilgileri, toplama tarihi ve saati ile etiketleyin. Annenin kendi sütünü (MOM) -4 °C veya daha düşük bir sıcaklıkta 12 saate kadar saklayın.

2. Pastörize donör sütünün çözülmesi (PDM)

NOT: HMB'ler, maksimum 6 aya kadar bir süre boyunca -4 °C'nin altındaki bir sıcaklıkta donmuş kendi PDM stoklarına sahiptir ve prosedür, literatürde başka bir yerde 12,13,14 iyi açıklanmıştır.

  1. Plastik kapaklı sterilize edilmiş cam kaplarda saklanan çiğ sütü veya PDM'yi 40 °C'de bir su banyosunda çözerek sıcaklığın korunmasını ve daha kısa işlem süresini sağlayın.
    NOT: PDM'yi oda sıcaklığında veya soğutma sıcaklığında (buzdolabının içinde) çözdürmeyin, çünkü bu durumlarda çözülme süreleri uzar, bu da mikrobiyal maruziyeti ve büyümeyi destekler.
  2. Şişedeki süt 5 °C'nin üzerine çıkmadan önce insan sütü şişelerini su banyosundan çıkarın.

3. Mikrobiyom sulandırması için PDM'nin MOM ile aşılanması

NOT: PDM'nin MOM ile aşılanması işlemi için standart hacimsel oran %90'dır: %10 (h/h). Prosedürün adımları aşağıdaki gibidir:

  1. Teknisyene laboratuvar önlüğü, maske, şapka ve eldiven takmasını söyleyin.
  2. Çalışma yüzeyini yerel kurumsal protokole uygun bir yüzey temizleme solüsyonu ile temizleyin.
  3. Kullanılacak malzemeleri düzenleyin ve ekipmanı hazırlayın. İnkübatörü (su banyosu) suyla önceden 37 °C'ye ısıtın.
  4. Kullanılacak aşılanmış sütün son hacmini planlayın ve uygun boyutta bir kap seçin. Taze çiğ MOM'lu kabı ve sıvı formdaki PDM'yi çalışma yüzeyine yerleştirin.
  5. Sonraki 16S dizileme ve bakteri sayımı için steril ekipman kullanarak MOM'dan 1 mL'ye kadar bir alikot toplayın. Alikotu -80 ° C'de DNase / RNaz içermeyen bir kriyotüpte saklayın.
  6. İstenen nihai süt hacminin %10'una eşdeğer kalan hacmi, steril bir hacimsel alet (örn. şırınga, pipet) kullanarak 37 °C'de bir su banyosuna daldırılmak üzere gıdaya uygun bir kaba aktarın.
  7. Sonraki 16S dizileme ve bakteri sayımı için steril ekipman kullanarak PDM'nin 1 mL'lik bir alikotunu toplayın. Alikotu -80 ° C'de DNase / RNaz içermeyen bir kriyotüpte saklayın.
  8. Steril volümetrik alet (örn. şırınga, pipet) kullanarak istenen nihai süt hacminin %90'ına eşdeğer bir PDM miktarını önceki adımdaki MOM ile birlikte kaba aktarın ve şimdi aşılanmış anne sütünü (IM) oluşturun.
  9. Kabı, herhangi bir harici sıvının şişenin içini kirletmesini önleyen bir kapakla kapatın ve süte aşılanan mikroorganizmaların çoğalmasını sağlamak için 37 °C'de 4 saat boyunca su banyosuna daldırın.
  10. 4 saat sonra, fermente IM içeren kabı, şimdi sulandırılmış süt (RM) olarak adlandırılan su banyosundan çıkarın.
  11. Sonraki 16S dizilimi ve bakteri sayımı için steril ekipman kullanarak 1 mL'ye kadar bir alikot ayırın. Alikot deposunu -80 °C'de DNase/RNaz içermeyen bir kriyotüpte saklayın.
  12. Kalan hacmi yenidoğanları beslemek için sterilize edilmiş bir kaba aktarın.

4. Plakalar üzerinde bakteri kültürü ile yöntemin doğrulanması

NOT: Kontaminasyonu önlemek ve seyreltmelerin doğruluğunu sağlamak için tüm prosedürler steril koşullar altında gerçekleştirilmelidir. Bakteri üremesi, başka bir yerde açıklanan yöntemler kullanılarak tahmin edilebilir 9,15.

  1. Her süt örneğinin (PDM, MOM, IM, RM) steril tuzlu su içinde 10-1, 10-2, 10-3 ve 10-4 konsantrasyonlarında seri seyreltmelerini hazırlayın. Düzgün bakteri dağılımı sağlamak için her seyreltmeyi iyice karıştırın.
  2. Steril bir Drigalski halkası veya cam yayıcı kullanarak her seyreltilmiş numuneden 100 μL'yi Man-Rogosa-Sharpe (MRS) ve Mannitol Salt Agar (MSA) plakalarına üçlü kopyalar halinde açın ve yayın. Hacmin agar plakasına eşit şekilde yayıldığından emin olun.
  3. MRS agar plakalarını, laktik asit bakteri büyümesi için düşük oksijenli bir ortam oluşturmak üzere içeren anaerobik bir kavanozda inkübe edin.
  4. Staphylococcus türlerinin büyümesini desteklemek için Mannitol Salt Agar (MSA) plakalarını aerobik olarak inkübe edin.
  5. Plakaları 37 ± 2 °C'de 48-72 saat inkübe edin.
  6. Her agar tipinde sayılabilir sayıda bakteri kolonisi (25-250 koloni) ile seyreltmeyi seçin
  7. Seçilen seyreltme için üç çoğaltma plakasının her birinde görünür kolonileri sayın.
  8. Hem MRS hem de MSA ortamında seçilen seyreltme için üçlü plakalardan ortalama koloni sayısını hesaplayın.
  9. Aşağıdaki formülü kullanarak her numune için mL başına koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayısını belirleyin ve yorumlamayı kolaylaştırmak için 10 tabanlı bir logaritmik ölçeğe (log10) dönüştürün. Sonuçların istatistiksel analizine devam edin.
    CFU/mL sayısı = Koloni sayısı × mL cinsinden kaplanmış toplam seyreltme faktörü/hacmi

5. Süt mikrobiyom analizi

NOT: Süt mikrobiyom analizi,16 başka bir yerde açıklanan yöntemlere ve boru hattına göre yapılabilir. Bu analizde kullanılan R betiğinin ekran görüntüsü Ek Şekil S1'de sunulmuştur.

  1. Numunenin 500 μL'sini 180 × g'da 15 saniye boyunca tortu hücrelerine ve partiküllere santrifüjleyin.
  2. 350 μL süpernatan toplayın ve DNA ekstraksiyonu için kullanın.
  3. Ekstrakte edilen DNA'yı bir spektrofotometre kullanarak ölçün.
  4. 16S ribozomal RNA'nın V3 ve V4 bölgelerini 20 ng DNA ve 357F/805R primerleri kullanarak amplifiye edin (bkz. Malzeme Tablosu)17.
  5. Elde edilen amplikonları saflaştırmak için manyetik boncuklar kullanın ve bir DNA florimetre kullanarak barkodlu amplikonların miktarını belirleyin.
  6. Amplifikatörleri eşleştirilmiş uçlu 250 bp modunda sıralayın.
  7. Kaliteli kırpma ve adaptör çıkarma işlemi gerçekleştirerek elde edilen dizileri işleyin18. Phred33 puanlaması ile eşleştirilmiş uç modunu (PE) kullanın ve yüksek kaliteli okumalar sağlamak için minimum 200 bp okuma uzunluğu ayarlayın.
  8. Bir manifest dosya formatı ve şu komutu kullanarak eşleştirilmiş uç dizi verilerini QIIME 219'a aktarın: qiime tools import.
  9. Şu komutu kullanarak gürültü giderme, çoğaltma ve kimera giderme için içe aktarılan dizileri DADA2 ile işleyin: qiime dada2 gürültü giderme-eşli. Bu adım, yüksek kaliteli temsili diziler ve bir özellik tablosu oluşturur.
  10. Şu komutları kullanarak yalnızca yeterli temsile sahip olanları korumak için özellikleri ve dizileri filtreleyin: qiime özellik-tablosu filtre-özellikleri ve qiime özellik-tablosu filtre-seqs.
  11. Aşağıdakileri kullanarak primerler (V3-V4) tarafından güçlendirilen bölgeleri ayıklayarak bir referans veritabanı hazırlayın: qiime özellik sınıflandırıcı ayıklama-okumalar.
  12. Komutu yürüterek Silva referans veritabanı ile %97 kimlik eşiğinde taksonomik sınıflandırma için VSEARCH algoritmasını kullanın:
    qiime özellik sınıflandırıcı classify-consensus-vsearch
  13. BIOM araçlarını kullanarak taksonomik atamaları özellik tablosuyla entegre edin: biom add-metadata.
  14. Başka bir yerde açıklandığı gibi istatistiksel analizler yapın20,21.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Plaka kültürü ile bakteri üreme analizi
Cacho ve ark.9 tarafından önerildiği gibi, PDM'yi MOM ile aşılama yöntemini doğrulamak için yapılan mikrobiyolojik testler, CFU/mL sayımına dayanarak, 4 saatlik inkübasyondan önce ve sonra aşılanmış süt örnekleri arasında önemli bir fark olmadığını göstermiştir. Bununla birlikte, bu iki zaman noktasında koloni sayısında farklılıklar gözlendi, bu da Staphylococcus

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Burada, çeşitli nedenlerle yeni doğan bebeğine yeterli süt sağlayamayan belirli bir anneden süt mikrobiyotasının yeniden yapılandırılmasını PDM'ye sağlamayı amaçlayan, bir anne sütü bankasına bağlı doğum hastanelerinde uygulanacak bir protokol sunuyoruz. Protokol basittir ve temelde iki adıma dayanmaktadır. Birincisi, donör sütünün uygun şekilde toplanması ve ardından pastörizasyonu için anne sütü bankalarında rutin olarak gerçekleştirilen prosedür...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar rekabet eden çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Yazarlar, Programa de Pesquisas para o SUS, PPSUS/2020, Ministério da Saúde do Brasil'den sağlanan finansman desteğini minnetle kabul eder; Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Estado de Santa Catarina, Hibe Numarası: 2021TR000506; Programa de Pesquisa Universal, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) do Ministério de Ciência e Tecnologia do Brasil, Hibe Numarası: 420996/2023-0; Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica 2022 - 2024, Hibe Numarası: 120815/2023-0. Numune sağlayan gönüllülere de teşekkür ediyoruz.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Electric breast milk pumpHorigenXN-2219M2Soft pump dual plus
Pyrex media bottlesCorning CLS1395100Glass containers with plastic lids 
1000 µL pipette Labmate proCorning HTL SA  5666Variable volume pipettor 
Cryogenic vial Corning CLS431417DNase/RNase-free 2 mL vials 
15 mL centrifuge tubesCorning CLS431470DNase/RNase-free 15 mL tubes 
Water bathEcoSonicsQ3.0/40A
Man–Rogosa–Sharpe (MRS) Difco288210Lactic acid bacteria growth media
Mannitol Salt Agar (MSA)HimediaMH118Staphylococcus  growth media
Anaerobic JarPermutionCreate a low-oxygen environment for lactic acid bacteria growth
Extracta  Kit – DNA e RNALoccusMPTA-PV16-B YDNA extraction Kit
NanodropPromegaE6150Quantus DNA
GoTaqG2PromegaM7841PCR amplication System
Quantus FluorometerPromegaE5150DNA / RNA quantitation kit
MiSeq SystemIllumina Inc.M-GL-00006 v4.0Sequencing equipment
MiSeq Reagent Kit v2 (300-cycles)Illumina Inc.MS-102-2002Sequencing kits and reagents
Software name 
Trimmomatichttp://www.usadellab.org/cms/index.php?page=trimmomaticRead trimming tool for Illumina NGS data
QIIME 2 https://docs.qiime2.org/2024.10/Microbiome analysis package 
Primer namePrimer sequence
16S_357F TCGTCGGCAGCGTCAGA
TGTGTATAAGAGACAGC
CTACGGGNGGCWGCAG
16S_805RGTCTCGTGGGCTCGGAG
ATGTGTATAAGAGACAGG
ACTACHVGGGTATCTAATC

Referanslar

  1. Szyller, H., et al. Bioactive components of human milk and their impact on child's health and development, Literature Review. Nutrients. 16 (10), 1487(2024).
  2. Fernández, L., Rodríguez, J. M. Human milk microbiota: Origin and potential uses. Nestle Nutr Inst Workshop Ser. 94, 75-85 (2020).
  3. Fernández, L., Ruiz, L., Jara, J., Orgaz, B., Rodríguez, J. M. Strategies for the preservation, restoration and modulation of the human milk microbiota. Implications for human milk banks and neonatal intensive care units. Front Microbiol. 9, 2676(2018).
  4. Meier, P. P. More evidence: Mothers' own milk is personalized medicine for very low birthweight infants. Cell Rep Med. 3 (8), 100710(2022).
  5. Fewtrell, M. S., et al. Predictors of expressed breast milk volume in mothers expressing milk for their preterm infant. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 101 (6), F502-F506 (2016).
  6. Abrams, S. A., et al. Donor human milk for the high-risk infant: Preparation, safety, and usage options in the United States. Pediatrics. 139 (1), e20163440(2017).
  7. Brasil é referência em doação de leite materno. , Serviços e Informações do Brasil. At https://www.gov.br/pt-br/noticias/saude-e-vigilancia-sanitaria/2020/02/brasil-e-referencia-em-doacao-de-leite-materno (2024).
  8. Landers, S., Updegrove, K. Bacteriological screening of donor human milk before and after holder pasteurization. Breastfeed Med. 5 (3), 117-121 (2010).
  9. Cacho, N. T., et al. Personalization of the microbiota of donor human milk with mother's own milk. Front Microbiol. 8, 1470(2017).
  10. Pumping breast milk. , Centers for Disease Control and Prevention - CDC. https://www.cdc.gov/nutrition/infantandtoddlernutrition/breastfeeding/pumping-breast-milk.html (2023).
  11. Expressing and storing breast milk. , NHS UK. https://www.nhs.uk/conditions/baby/breastfeeding-and-bottle-feeding/breastfeeding/expressing-breast-milk/ (2020).
  12. Arslanoglu, S., et al. Recommendations for the establishment and operation of a donor human milk bank. Nutr Rev. 81 (Supplement_1), 1-28 (2023).
  13. Moro, G. E., et al. Processing of donor human milk: Update and recommendations from the European Milk Bank Association (EMBA). Front Pediatr. 7, 49(2019).
  14. Landers, S., Hartmann, B. T. Donor human milk banking and the emergence of milk sharing. Pediatr Clin North Am. 60 (1), 247-260 (2013).
  15. Stachelska, M. A. Identification of Lactobacillus delbrueckii and Streptococcus thermophilus strains present in artisanal raw cow milk cheese using real-time PCR and classic plate count methods. Pol J Microbiol. 66 (4), 491-499 (2017).
  16. Ruiz, L., et al. Comparison of two approaches for the metataxonomic analysis of the human milk microbiome. Front Cell Infect Microbiol. 11, 622550(2021).
  17. Lopez Leyva, L., Brereton, N. J. B., Koski, K. G. Emerging frontiers in human milk microbiome research and suggested primers for 16S rRNA gene analysis. Comp Struct Biotechnol J. 19, 121-133 (2021).
  18. Bolger, A. M., Lohse, M., Usadel, B. Trimmomatic: A flexible trimmer for Illumina sequence data. Bioinformatics. 30 (15), 2114-2120 (2014).
  19. Bolyen, E., et al. interactive, scalable and extensible microbiome data science using QIIME 2. Nat Biotechnol. 37 (8), 852-857 (2019).
  20. McMurdie, P. J., Holmes, S. phyloseq: An R package for reproducible iInteractive analysis and graphics of microbiome census data. PLoS ONE. 8 (4), e61217(2013).
  21. R Core Team. R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. https://www.R-project.org/ (2024).
  22. Torrez Lamberti, M. F., et al. Metabolomic profile of personalized donor human milk. Molecules. 25 (24), 5783(2020).
  23. Mallardi, D., et al. Inoculation of mother's own milk could personalize pasteurized donor human milk used for feeding preterm infants. J Transl Med. 19 (1), 420(2021).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 216

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır