Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Bu çalışma, farelerde periodontitisi indüklemek için modifiye edilmiş bir 6-0 naylon ligasyon yöntemini tanımlamaktadır, bu yöntem yüksek oranda tekrarlanabilir ve araştırmacıların periodontal hastalığı gelişiminden patolojik sonuçlarına kadar incelemeleri için bir alternatif teşkil etmektedir.
Periodontal hastalık (PH), dişlerin destek dokularını etkileyen inflamatuar bir hastalıktır ve dünya çapında en yaygın hastalıklardan biridir. Şiddetli formu olan periodontitis, yumuşak doku, diş ve kemiğin tahrip olmasına yol açar. Periodontitisin hayvan modelleri primatlar, köpekler, minyatür domuzlar ve fareler kullanılarak geliştirilmiştir. Bunlar arasında, ligatür kaynaklı fare modeli, insan periodontitisinin temel yönlerini etkili bir şekilde kopyalarken hızlı hastalık ilerlemesi, tekrarlanabilirlik, öngörülebilirlik ve düşük maliyet gibi avantajlar sunar. Ligatürlerin kullanıldığı fare modelleri, periodontal dokunun mikrobiyolojik ve immünolojik mikro ortamları hakkında değerli bilgiler sağlayarak, biyofilmlerin immün yanıtlardaki kritik rolünü ve sistemik hastalıklarla ilişkisini vurgulamıştır. Bu çalışma, farelerde periodontitisi indüklemek için modifiye edilmiş bir naylon ligasyon yöntemi sunmaktadır. Modifikasyon, ipek sütür yerine naylon bir sütür kullanmayı ve temas noktasından geçirmek yerine interproksimal temas alanının altına yerleştirmeyi içerir. Bu yaklaşım, periodontitisi etkili bir şekilde indüklerken tekniği basitleştirir. Sütür yerleştirme için ayrıntılı metodoloji grafiksel olarak gösterilmiştir ve periodontitisin ilerlemesi histolojik ve histometrik analizlerle gösterilmiştir.
Periodontal hastalık (PH), dişlerin destek dokularının iltihabi bir bozukluğudur ve dünyadaki en yaygın hastalıklar arasındadır1; PH insidansının dünya çapında %20-%50 arasında değiştiği bildirilmiştir2. PD'nin farklı ilerleme dereceleri vardır; diş eti iltihabı adı verilen hafif formu sadece yumuşak dokuları, periodontitis (PT) adı verilen şiddetli formu ise kemik3 gibi sert dokuları etkiler. PT enflamatuar bir hastalık olduğundan, diabetes mellitus5, kardiyovasküler hastalıklar6, olumsuz gebelik sonuçları7 veya preeklampsi8 gibi hormonal etkileşimler, enflamatuar hastalıklar9 ve hatta oküler değişiklikler10 veya demans11 gibi hastalık sürecinideğiştirebilecek çeşitli risk faktörleri tarafından değiştirilebilen karmaşık bir bağışıklık tepkisi olarak düşünülmelidir.
Bu nedenle, PT gelişimi veya prevalansı ile ilişkili etiyolojiyi anlamak, yeni veya daha etkili terapötik stratejileri test etmek veya sistemik hastalıklar ile PT veya periodontal mikrobiyota arasındaki herhangi bir ilişkiyi belirlemek için hayvan modellerine ihtiyaç vardır12.
Etkili bir araştırma yönteminin seçilmesi, YT'nin gelişimini anlamak ve araştırma sorularını yeterince yanıtlamak için çok önemlidir13. Yıllar geçtikçe, PT çalışması için farklı hayvan modelleri geliştirilmiştir; Bununla birlikte, primatlar, köpekler, tavşanlar ve minyatür domuzlar gibi modellerin kullanımı pahalı ve karmaşıktır 14,15,16. PT'nin murin modelleri, özellikle ligasyonla indüklenen PT modeli, hızlı geliştirme, tekrarlanabilirlik, öngörülebilirlik ve düşük maliyet dahil olmak üzere çok sayıda avantaja sahiptir 17,18,19.
PT'yi indüklemek için oral bakteri inokülasyonu, lipopolisakkarit enjeksiyonu ve ligatür indüksiyonu10,20 gibi çeşitli yöntemler kullanılmasına rağmen, her birinin avantajları ve dezavantajlarıvardır 17, naylon ligatür tarafından indüklenen PT'nin murin modeli, gelişimi için insan mekanizmasına benzemektedir20,21,22,23. PT, yerleşik mikrobiyotanın tutulması yoluyla ortaya çıkar, iltihaplanmaya neden olur ve doku kaybına yol açar. Ayrıca, fareler, PT çalışması için ilgilenilen farklı hücre popülasyonlarını veya molekülleri incelemek için genetik olarak değiştirilebilir.
Diş ligasyonu, ortodontik teller, ipek dikişler 24,25 veya naylon dikişler26 gibi farklı materyaller kullanılarak yapılabilir. Farelerde ligasyon yoluyla PT'yi indüklemek için en yaygın malzeme ipektir; bu metodoloji, Marchesan ve ark.18, Abe ve ark.27 ve Chadwick ve ark.22 gibi farklı yazarlar tarafından her biri kendi modifikasyonlarına sahip olarak açıklanmıştır ve bu yöntemlerin tümü birçok araştırmacı tarafından başarıyla kullanılmıştır28. Bununla birlikte, farelerde üst azı dişlerinin etrafına ipek bir dikiş yerleştirmek karmaşık olabilir. Marchesan ve ark. bir "ligatür tutucu" kullanılmasını önerdi; Abe ve ark. ve Chadwick ve ark. sütürü temas noktasından yerleştirdi, ancak Chadwick ve ark. onu M1 ve M2 azı dişlerinin etrafına yerleştirdi.
Farklı hayvan modellerinde PT gelişimi için farklı kalınlıklarda naylon sütürler kullanılmıştır 29,30,31. Lima ve ark.31 5-0 naylon sütür kullanmış; Önceki çalışmalarda da benzer sonuçlarla 6-0 naylon sütürler kullandık28.
Multifilament sütürlerle karşılaştırıldığında, naylon sütürler emilemeyen monofilament sentetiktir ve daha düşük bir inflamatuar doku yanıtı sergiler32; ek olarak, naylon sütürler de mikrobiyal birikimeizin verir 33,34 ve naylon sütürlerde fakültatif anaerobik bakteriler ile birlikte Fusobacterium nucleatum ve Porphyromona intermedia 35,36'nın yapıştığına dair kanıtlar vardır 12,14,17,19,24,27,35,37 (Tablo 1).
Bu özellikler, enflamatuar yanıtın materyal birikiminden ziyade çoğunlukla bakteri birikimine odaklanmasına izin verebilir. Ek olarak, naylon, ipek38'den daha iyi gerilme mukavemeti gibi mekanik özelliklere sahiptir.
Bu nedenle, bu çalışmada, interproksimal temas alanı altında M2 etrafına yerleştirilen 6-0 naylon sütür, farede ileri evre periodontitis gelişimini indüklemiştir. Bu yaklaşım, normal cımbızla ligatür yerleştirilmesine izin verir ve sonuçlar tutarlıdır. 30 gün sonra, PT gelişimi histometrik ve histolojik analiz ile doğrulanabilir.
Deney hayvanlarını içeren tüm prosedürler, resmi Meksika standardı NOM-062-ZOO-1999'a uygun olarak 'Laboratuvar Hayvanları Üzerinde Biyomedikal Araştırma Etik Çerçevesi'ne sıkı sıkıya bağlı kalınarak yürütülmüştür. Bu çalışma, Facultad de Estudios Superiores Iztacala (FES-Iztacala) etik kurulu tarafından CE/FESI/072024/1765 protokolü kapsamında onaylanmıştır. Fareler, FES-Iztacala hayvan tesisinde patojen içermeyen bir ortamda yiyecek ve suya ücretsiz erişimi olan hayvan odalarına yerleştirildi. Bu protokol, daha önce Abe ve ark.27 tarafından açıklanan yöntemin bir modifikasyonudur. Altı ila sekiz haftalık dişi BALB/c fareleri (16 g ağırlığında) kontrol (CTL) ve periodontitis (PT) gruplarına ayrıldı. Periodontitis, sürekli bakteriyel yapışmayı teşvik etmek ve ciddi, kronik hastalık ilerlemesini tetiklemek için 0. günde 6-0 naylon sütür yerleştirilerek indüklendi. 30 gün sonra, histometrik analiz yoluyla doku hasarını ve bağlantı kaybını (AL) değerlendirmek için tüm farelere ötenazi (kurumsal olarak onaylanmış protokoller izlenerek) uygulandı (Şekil 1). Kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.
1. Anestezi hazırlığı
2. Hayvan konumlandırma
3. Ligatür yerleştirme
4. Hayvanların geri kazanılması
5. Ligatür kontrolü
6. Histoloji
7. Veri analizi
8. İstatistiksel analiz
Bu metodoloji, indüklenmiş farelerin ikinci haftadan itibaren periodontitis (PT) geliştirmesine izin verir. Fareler, ligatun varlığını doğrulamak için haftalık olarak izlendi. 30. günde ötenazi yapıldı. Tüm grupların klinik özellikleri değerlendirildi. Kontrol grubu, zaman içinde renk ve marjinal dişeti yapısı gibi normal özelliklerini korudu. CTL grubundakilerle karşılaştırıldığında, PT grubu dokuları, indüklenen farelerde dişeti kenarında gözlenen in...
Mikrobiyolojik ve immün tepkiler gibi farklı yönleri değerlendirmek için periodontitisin çeşitli hayvan modelleri kullanılmıştır ve insan hastalığı ile bazı benzerlikleri vardır43. Bu bulgular, biyofilmlerin rolü, immün yanıt ve sistemik durumlarla etkileşimler gibi periodontal hastalığın çerçevesine dair kanıtlar sağlar44,45.
Periodontitisin hayvan mo...
Yazarlar, bu makalenin yayınlanması ile ilgili herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Bu çalışma kısmen Meksika Eyaleti Bilim ve Teknoloji Konseyi (COMECYT) hibe numarası [FICDTEM-2021-072] ve Araştırma Projeleri ve Teknolojik Yenilik Destek Programı (PAPIIT)-UNAM, hibe numarası [IN-217021] tarafından finanse edilmiştir. Bu videoyu yapmak için sağlanan olanaklar için Endoperiodontología, FES Iztacala, UNAM'daki uzmanlık programına ve bu videoyu hazırlamadaki desteği için DDS'den Rosalba Yañez Ortiz'e teşekkür ederiz. Bazı figürler Biorender programı ile oluşturulmuştur (Anlaşma numarası ME282NWCI1).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.9% NaCl solution | PiSA | Rinse maxillae | |
6-0 nylon suture | Atramat, Internacional Farmacéutica | PE1946-N | Ligature placement |
Amscope 3.7 program for digital camera | Amscope | x64, 4.11.21973.20230107 | Data colection |
EDTA solution | Sigma–Aldrich | E5134 | Decalcification |
Fine scissors | generic | To cut the 6-0 nylon suture | |
Fine tweezers | generic | 6-0 nylon suture | |
Gauze pad | generic | To keep corporal tempature | |
GraphPad Prism | GraphPad Prism | Version 8.3.0 | Data analysis |
Hypromellose | generic | Eye lubricant | |
Injectable water | Pisa | Dilution of anesthetic solution | |
Ketamine | Anesket, Pisa | Anesthetic | |
Micro centrifuge tubes | Cellpro | 801501 | To contain tissues durin decalcification |
Micropore | 3M | 1533 | To fix mouse |
Microscope digital camera | Amscope | MU1603 | Histology |
Microtubes | Axygen | MCT-150-C | Store anesthetic dilution |
Optical microscope | UNICO | Serie G380 | Histology |
Orhodontic elastics | TP Orthodintics, Inc | blue | To keep the snout open |
Paraformaldehyde solution | Sigma–Aldrich | 158127 | Tissue Fixation |
Paraplast | Leica | 39601006 | Histology |
Surgical microscope | Carl Zeiss GmbH Berlin | 6-0 nylon suture | |
Ultra Fine Insulin Syringes 6mm U-100, 0.3 mL | BD | 326385 | To inject the anesthetic solution |
Universal rubber bands | generic | To keep the snout open | |
Worktable | Generic | Wooden base to support mice | |
Xylazine | Porcin, Pisa | Preanesthetic |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır