Cömertçe MIN6 hücreleri sağlamak için, Boulder, Colorado Üniversitesi&#39;nden Kristi Anseth laboratuara teşekkür ederiz. NSF tarafından bu proje için finansman sağlanmıştır.

1. PEGDM sentezi ve fotoaktif PEGDM macromer çözeltisi <ol><li> PEG 2g (lineer, 10.000 Da), sert plastik bir kap ile 40ml cam şişenin içine tartılır. </li><li> Metakrilik anhidrit yaklaşık 308μL ekleyin ve gevşek flakon kapağı. </li><li> Mikrodalga, standart bir ev mikrodalga 2 dakika için yüksek flakon. Giyim ısıya dayanıklı eldiven, ek bir 5 dakika sonra iyice girdap yüksek flakon, mikrodalga. </li><li> Kısaca flakon eldiven ile ele alınması için yeterli soğumaya izin verir. Şapkasını çıkarmak ve flakon dönen metilen klorür yavaş yavaş ekleyin. Çözüm gerektiği gibi örnek vorteks, berrak ve homojen görünmesi için yeterli ekleyin. 2 mL kullanılan metilen klorid toplam hacmi 1.5 olmalıdır. </li><li> 200 ml soğuk Çökelme PEGDM çözüm damla damla ekleyerek, dietil eter karıştırılır. </li><li> Vakum filtrasyon PEGDM toplayın ve kurutun. </li><li> Yeterli miktarda PEGDM çözülürdeiyonize su (genellikle 100 -150 mL). </li><li> 1000 Da molekül ağırlığı kesme ile 5 gün süreyle diyaliz tüp deiyonize suya karşı çözüm Dialyze. Su günde bir kez değiştirin. </li><li> -80 ° C gecede, uygun kaplarda ve donma içine çözüm kısım. Saflaştırılmış beyaz PEGDM toz verimi için 4 gün boyunca çözüm Lyophilize. 4 ° C kullanılmadığı zaman toz saklayın. </li><li> Fotoaktif PEGDM çözelti hazırlamak için, ilk deiyonize su Irgacure 2959 eriterek 0.5 kilo yüzde photoinitiator stok solüsyonu hazırlayın. Vorteks çözüm ve karanlık bir yerde saklayın. </li><li> 10 ağırlıkça% PEGDM ve Hank Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) 0.025 ağırlıkça% Irgacure 2959 çözüm hazırlayın. Vortex iyice PEGDM dağılması sağlamak. Biz genellikle bir seferde bu çözeltinin 1ml hazırlamak. </li><li> 1.8 mL mikrosantrifüj tüpe 0,2 mikron şırınga filtresi aracılığıyla filtreleme çözümü sterilize edin. Alüminyum folyo ile tüp sarınve 4 mağaza ° C </li></ol> 2. Kültür, enfeksiyon, ve MIN6 hücrelerin agregasyon <ol><li> 37 nemlendirilmiş bir ortamda% 10 FBS, 7mm şekeri, 100 adet / ml penisilin / streptomisin ve 0.5 mg / ml amphotercin B ° C ve% 5 CO 2 ile desteklenmiş RPMI 1640 orta MIN6 hücreler kültür. </li><li> Tedavi edilen kültür flask yüzeyinden hücrelerin serbest bırakmak için, 37 ile hücreleri durulama, orta aspire ° C kalsiyum / magnezyum HBSS HBSS aspirat, daha sonra 2 ml 37 ° C tripsin-EDTA çözüm ekleyin ve hücreler izin 3 dakika inkübe edin. </li><li> Sıkıca ücretsiz hücrelerini vurmak için balonun yan kavanozu, daha sonra 8 ml 37 ° C orta ve şiddetle hücre süspansiyonu pipetle ve aşağı kabarcıklar tanıtmak için özen. </li><li> 15 ml steril bir santrifüj tüpü içine hücreleri Pipet ve bir hemasitometre ya da diğer hücre sayma işlemi kullanarak bir hücre sayımı gerçekleştirmek. </li><li> Yapıcı hücreleri enfekte etmek için hazırlanıyorvirüs, enfekte hücrelerin toplam sayısı ilk enfeksiyon istenen çokluğu (İçişleri Bakanlığı) (hücre başına 50 ila 100 enfeksiyöz partiküller) ulaşmak için gerekli olan virüs süspansiyonu hacmi belirlemek ve hesaplamak. </li><li> Dikkatle HBSS bir ön aliquoted hacmi 1.8 mL mikrosantrifüj tüp içine uygun miktarda virüs süspansiyonu pipeting HBSS virüs sulandırınız. HBSS toplayarak hücreleri de ortalama 50 mcL uygundur. </li><li> Pipetlemeyin 6-iyi bir süspansiyon kültür plakasına kuyulardan ortalama 400.000 hücre elde etmek için gerekli hacim kendi tüp içinde, sonra onları pipeting ve aşağı hücreleri tarafından dağılırlar. </li><li> İstenen İçişleri Bakanlığı ulaşmak için her kuyuya uygun seyreltilmiş virüs hacmi ekleyin. </li><li> Toplam hacmi 1.7 ml kadar getirmek için her biri iyi orta ekleyin. </li><li> Orbital çalkalamalı inkübatör içinde bir tabak yerleştirin. Orta nazikçe kuyular (~ 100 rpm) etrafında yıkar, böylece düşük bir ayarı çalkalayıcı ayarlayın. Aggrega için hücrelerin izin ver24-36 saat te. 75-175 mikron yaklaşık bir çapa sahip agregalar oluşturulmalıdır. </li></ol> 3. PEGDM hücreler, Encapsulation <ol><li> Hücreler dispersiyonu (adım 2.4) ya da aşağıdaki toplama (adım 2.10) olarak kapsüllü olabilir. Hidrojel habercisi PEGDM çözümü bir sıvı olduğundan, hücreler crosslinking ve hidrojel oluşumu için önce çökmemesi için. Yerleşme büyük agrega gibi hızla ortaya çıkması bekleniyor ise, bu hücrelerin jel merkezi bir düzlemde yerleşmek böylece iki adımda hidrojel üretmek için yararlı olabilir. Dağınık hücreler için uygun bir adım hidrojel sentezi prosedür gösterilmiştir (Şekil 2) ve iki aşamalı bir prosedür de gösterilmiştir (3,2-3,9) (Şekil 3) ve aşağıda ayrıntılı. </li><li> Hidrojel 1 ml plastik şırınga kapalı sivri ucu kesme ve raf sonuna kadar açık yerleştirerek oluşturduğu olacağı bir gemi oluşturun. </li><li> Fotoaktif PEGDM pipetleyin 20 mcL böylecepiston üzerine şırınganın açık ucunu geçirdikleri evrim hacmi tüm piston yüzeyini kaplayan emin olun. Küçük artışlarla piston, düz bir sıvı yüzey elde etmek için ayarlayın. </li><li> Raf ve yaklaşık 8 dakika (365nm, ~ 7 mW / cm 2), bir UV lamba altında raf hidrojel crosslinking için izin pozisyonu pipetlemeyin yerleştirin. Bu süre zarfında, hücrelerin hazırlık başlamış olabilir </li><li> 1.8 mL mikrosantrifüj tüpe pipetleyin istenilen sayıda hücre / agrega içeren bir ses, şapka ve 5 dakika boyunca 130 g tüp santrifüj. </li><li> Bir micropipettor kullanarak, tüpün ucunda hücre pelletini bozmadan özenle medya çıkarın. Medya kafa pelet yaklaşırken, bir ince kullanmak için 10 mcL pipetlemeyin ucu yararlı olabilir. </li><li> Fotoaktif PEGDM çözüm (agrega ile çalışıyorsanız, geniş ağızlı pipetlemeyin uç) 20 mcL yavaşça hücre pelletini tekrar süspansiyon ve inci üstüne enjektöre hücre süspansiyonue daha önce hidrojel kısmı çapraz bağlı. </li><li> Hidrojel inşaatı tamamlamak için ek bir 8 dakika UV ışık şırınga Açığa. Bittiğinde, hücrelerin tam silindirik (Şekil 3) hidrojel içinde kapsüllü olmalıdır. </li><li> Şırınga ve kısaca jel yıkamak için 24-iyi plaka iyi HBSS 1 mL içine hidrojel çıkarın. İstenen şartlar altında, 24 plaka ve kültürünün iyi medya 1 ml jel aktarın. </li></ol> 4. Hipoksi izleme <ol><li> Herhangi bir noktada kültür, görüntü sırasında hücreler hipoksik sinyal başlaması izlemek için floresan mikroskobu kullanarak. Eğer çok iyi bir plaka görüntü ya da mikroskop aşamasında yerleştirmeden önce bir mikroskop lamı jel transfer görüntülü olmanın bağlı. Ds Kırmızı Tepe uyarma 556nm elde etti ve zirve emisyon 586nm oluşur. Emisyon oldukça yoğun olduğu ve böylece photobleaching bazı gözlemcilere olmamıştıred sorunlu olabilir. Protein üretimi ve ilk sinyali algılama başlangıcı arasındaki gecikme süresi yaklaşık 12 saattir. Sinyal bireysel sinyalizasyon hücreleri tanımlamak için yeterince spesifik, ancak çözünürlüğü, hücre içi sinyal localisation belirlemek için yetersiz olabilir. Sinyal hücreleri, sinyal genellikle sitoplazma boyunca eşit olarak görülmektedir. Sinyal yoğunluğu artmış protein ifadesi, genel protein birikimi, veya gecikmeli protein olgunlaşması nedeniyle henüz tam olarak belirlenmemiştir olsa da, hipoksi için uzun pozlama ile artırabilirsiniz. </li></ol> 5. Temsilcisi sonuçları PEG hidrojel MIN6 agrega kapsüllü bir temsili örnek Şekil 4&#39;te gösterilmiştir. Tepki gerçekleştirildiği geminin şeklini alarak, çapraz jel boyunca katı olacaktır. Implantasyon yabancı bir cisim yeniden önlenmesinde yardım etmek için pürüzsüz bir dış yüzeye sahip bir jel tercih ediliryanıtlarının yokluğu. Jel içinde, hücre agrega matris tamamen kapalı ve homojen, daha iyi besin taşınması için izin dağıtılmış olmalıdır. Şekil 5 MIN6 agrega hipoksik sinyalizasyon Temsilcisi görüntüler resmedilmiştir. Görüntü yakalama önce marker virüsü ile enfekte Özdeş MIN6 agrega,% 20 O 2 (5a) veya% 1 O 2 (5b) 44 saat süreyle ya kültüre edildi . <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3521/3521fig1.jpg" /> Şekil 1 bizim hipoksi marker sisteminin etkinliği şematik. Ds Kırmızı DR gen ve upstream HRE organizatörü adenoviral ekleme hipoksinin neden olduğu HIF-1 kontrolü altında floresan protein üretimi için izin verir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3521/3521fig2.jpg" /> Şekil 2 tek adım kapsülleme Usul akış şeması bir cr MIN6 hücrelerinin dağınıkosslinked PEGDM hidrojel. Her jel için, dağınık hücrelerin fotoaktif PEGDM macromer çözüm 40μL askıya alınır. Bu bir dekapite 1mL şırınga yerleştirilir ve hidrojel, 10-12 dakika sonra 365nm UV ışık altında oluşur. Tamamlandığında, hidrojel disk, enjektörden çıkarılır, yıkanır ve kuluçka için bir orta dolu bir plaka yerleştirilir. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3521/3521fig3.jpg" /> Şekil 3, çapraz PEGDM hidrojel toplu MIN6 hücrelerinin çift adım kapsülleme Usul akış şeması . Her jel için, bir yarı-jel ilk 8 dakika fotoaktif PEGDM macromer çözüm 20μL UV crosslinking oluşur. MIN6 agrega dikkatle öncesi kurulan yarı-jel üstünde eklenir fotoaktif macromer çözüm ek bir 20μL askıya alınır. Tam jel tam medial kapsüllü agrega ile UV ışınlarına maruz kalma ek bir 8 dakika oluşurjel düzlem. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3521/3521fig4.jpg" /> Şekil 4. 20X büyütme altında 40μL hidrojel Image. MIN6 agrega (~ 400.000 toplam hücreleri) jel içinde açıkça görülür. Hidrojel çapı yaklaşık 6mm (bar = 1mm). <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/3521/3521fig5.jpg" /> Şekil 5 Floresan hipoksi PEGDM hidrojel toplu MIN6 hücreleri sinyal. 44 saat boyunca% 20 O 2 kapsüllü ve sonra kuluçka yerleştirilen hücreler% 2 O 2 44 saat süreyle inkübe sonra kapsüllü hücreler açık, her yerde sinyal ekran hipoksi sinyalizasyon (a) gösterilecek. (Bar = 100μm) (b).

<ol>
	<li>Kelly, W., Lillehei, R., Merkel, F., Idezuki, Y., Goetz, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allotransplantation+of+the+pancreas+and+duodenum+along+with+the+kidney+in+diabetic+nephropathy.">Allotransplantation of the pancreas and duodenum along with the kidney in diabetic nephropathy.</a> Surgery. 61, 827-837 (1967).</li><li>Shapiro, J. A. M., Ricordi, C., Hering, B. J., Auchincloss, H., Lindblad, R., Robertson, R. P., Secchi, A., Brendel, M. D., Berney, T., Brennan, D. C., Cagliero, E., Alejandro, R., Ryan, E. A., DiMercurio, B., Morel, P., Polonsky, K. S., Reems, J., Bretzel, R. G., Bertuzzi, F., Froud, T., Kandaswamy, R., Sutherland, D. E. R., Eisenbarth, G., Segal, M., Preiksaitis, J., Korbutt, G. S., Barton, F. B., Viviano, L., Seyfert-Margolis, V., Bluestone, J., Lakey, J. R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+trial+of+the+Edmonton+Protocol+for+islet+transplantation.">International trial of the Edmonton Protocol for islet transplantation.</a> N. Eng. J. Med.. 355, 1318-1330 (2006).</li><li>Sun, A. M., O'Shea, G. M., Goosen, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injectable+microencapsulated+islet+cells+as+a+bioartificial+pancreas.">Injectable microencapsulated islet cells as a bioartificial pancreas.</a> Appli. Biochem. Biotechnol. 10, 87-99 (1984).</li><li>Iwata, H., Amemiva, H., Matsuda, T., Takano, H., Hayashi, R., Akutsu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+microencapsulated+islets+in+agarose+gel+as+bioartificial+pancreas+by+studies+of+hormone+secretion+in+culture+and+by+xenotransplantation.">Evaluation of microencapsulated islets in agarose gel as bioartificial pancreas by studies of hormone secretion in culture and by xenotransplantation.</a> Diabetes. 39, 224-225 (1989).</li><li>Zhang, W. J., Laue, C., Hyder, A., Schrezenmeir, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purity+of+alginate+affects+the+viability+and+fibrotic+overgrowth+of+encapsulated+porcine+iselt+xenografts.">Purity of alginate affects the viability and fibrotic overgrowth of encapsulated porcine iselt xenografts.</a> Transplant Proc. 33, 3517-3519 (2001).</li><li>Lin-Gibson, S., Bencherif, S., Cooper, J. A., Wetzel, S. J., Antonucci, J. M., Vogel, B. M., Horkay, F., Washburn, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+and+characterization+of+PEG+dimethacrylates+and+their+hydrogels.">Synthesis and characterization of PEG dimethacrylates and their hydrogels.</a> Biomacromolecules. 5, 1280-1287 (2004).</li><li>Weber, L. M., He, J., Bradley, B., Haskins, K., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PEG-based+hydrogels+as+an+in+vitro+encapsulation+platform+for+testing+controlled+&#x03B2;-cell+microenvironments.">PEG-based hydrogels as an in vitro encapsulation platform for testing controlled &#x03B2;-cell microenvironments.</a> Acta. Biomater. 2, 1-8 (2006).</li><li>Weber, L. M., Lopez, C. G., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+PEG+hydrogel+crosslinking+density+on+protein+diffusion+and+encapsulated+islet+survival+and+function.">Effects of PEG hydrogel crosslinking density on protein diffusion and encapsulated islet survival and function.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 90, 720-729 (2009).</li><li>Bryant, S. J., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogel+properties+influence+ECM+production+by+chondrocyte+photoencapsulated+in+poly(ethylene+glycol)+hydrogels.">Hydrogel properties influence ECM production by chondrocyte photoencapsulated in poly(ethylene glycol) hydrogels.</a> J. Biomed. Mater. Res. 59, 63-72 (2001).</li><li>Bryant, S. J., Nuttelman, C. R., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytocompatibility+of+UV+and+visible+light+photoinitiating+systems+on+cultured+NIH/3T3+fibroblasts+in+vitro.">Cytocompatibility of UV and visible light photoinitiating systems on cultured NIH/3T3 fibroblasts in vitro.</a> J. Biomater. Sci. Polymer Edn. 11, 439-457 (2000).</li><li>Dionne, K. E., Colton, C. K., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+oxygen+on+isolated+pancreatic+tissue.">Effect of oxygen on isolated pancreatic tissue.</a> Trans. Am. Soc. Artif. Intern. Organs. 35, 739-741 (1989).</li><li>Dionne, K. E., Colton, C. K., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+hypoxia+on+insulin+secretion+by+isolated+rat+and+canine+islets+of+Langerhans.">Effect of hypoxia on insulin secretion by isolated rat and canine islets of Langerhans.</a> Diabetes. 42, 12-21 (1993).</li><li>De Groot, M., Schuurs, T. A., Keizer, P. P. M., Fekken, S., Leuvenink, H. G. D., van Schilfgaarde, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+encapsulated+rat+pancreatic+islets+to+hypoxia.">Response of encapsulated rat pancreatic islets to hypoxia.</a> Cell Transplant. 12, 867-875 (2003).</li><li>Fancy, M. L., Topiwala, R., Sahai, P., S, J. O., Blanchette, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlating+hypoxia+with+insulin+secretion+using+a+fluorescent+hypoxia+detection+system.">Correlating hypoxia with insulin secretion using a fluorescent hypoxia detection system.</a> J. Biomed. Mater. Res. B. 97, 148-155 (2011).</li><li>Webb, J. D., Coleman, M. L., Pugh, C. W. H. y. p. o. x. i. a. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hypoxia-inducible+factors+(HIF),+HIF+hydroxylases+and+oxygen+sensing.">hypoxia-inducible factors (HIF), HIF hydroxylases and oxygen sensing.</a> Cell. Mol. Life Sci. 66, 3539-3554 (2009).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan yöntem, fizyolojik olmayan koşullarda minimum kullanımı ile PEG hidrojel hücre kapsülleme için hızlı ve basit bir yöntem sunuyor. PEG biyouyumluluk ve modifikasyon kolaylığı için çok yararlı kapsülleme malzemesi temsil eder. Basit farklılıklar fotoaktif çözüm PEG yüzdesi, örneğin, gözenek boyutu ile mekanik basınç modülü gibi özellikleri, ve taşınım özellikleri ayarlamak için kullanılır. Ayrıca, PEG yan zincirler ilavesi ile kolayca değiştirilebilir. PEG hidrojeller, bu nedenle, gelecek vaat eden bir klinik cihaz ve in vitro araştırma için esnek bir platform temsil PEG-kapsüllü hücreleri hipoksi izleme için bir yöntem de sunulmuştur. Bu yöntem, hipoksi algılama basitliği ve ilgi hücreleri feda etmeye gerek önlemek için yararlıdır. Teknik koşulları, bize çeşitli hücre tiplerinin çeşitli uygulanabilirgeniş efulness. Örneğin, kök hücre farklılaşması için bir işaret olarak hipoksi, kök hücre Micromass kültürlerde takip edilebilir. Ancak, bu yöntem sadece hücreleri daha sonra toplanmış dağınık olan hücre sistemleri veya sistem dağıtmak için uygulanabilir. Ayrıca, floresan sinyal algılama, büyük ya da yoğun dokularda zor olabilir.

<table border="1"><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı </td></tr><tr><td> PEG </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 309.028-500G </td><td></td></tr><tr><td> Metakrilik Anhidrit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 276.685-100ML </td><td></td></tr><tr><td> Mikrodalga </td><td> Emerson </td><td> MW8784SB </td><td></td></tr><tr><td> Vortexer </td><td> Bilimsel Sanayi </td><td> SI-A236 </td><td></td></tr><tr><td> Metilen Klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D65100-1L </td><td></td></tr><tr><td> Dietil eter </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 346.136-1L </td><td></td></tr><tr><td> Diyaliz Boru </td><td> Spektrum </td><td> 132640 </td><td></td></tr><tr><td></td><td> Laboratuvarlar </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Derin dondurucu </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td&gt; Lyophilizer </td><td> Labconco </td><td> 7670521 </td><td></td></tr><tr><td> Vakum pompası </td><td> Şartları yerine getirmemek </td><td> 8917Z-01 </td><td></td></tr><tr><td> Irgacure 2959 </td><td> Ciba-Geigy </td><td> 029891301PS04 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Mediatech </td><td> 21-022-CV </td><td></td></tr><tr><td> Şırınga Filtre </td><td> VWR </td><td> 28145-477 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Mediatech </td><td> * </td><td> * Özel formülasyonu </td></tr><tr><td> FBS </td><td> PAA Laboratuvarları </td><td> A15-351 </td><td></td></tr><tr><td> Penisilin-Streptomisin </td><td> Mediatech </td><td> 30-002-CI </td><td></td></tr><tr><td> Amfoterisin B </td><td> Mediatech </td><td> 30-003-CF </td><td></td></tr><tr><td> Kuvöz </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3597 </td><td> NAPCO Serisi 8000 WJ w / O2 bastırma </td></tr><tr><td> Tripsin EDTA </td><td> Mediatech </td><td> 25-052-CI </td><td></td></tr><tr><td> Orbital Çalkalayıcı</td><td> VWR </td><td> 12620-926 </td><td></td></tr><tr><td> UV Lambası </td><td> Sanyo Denri </td><td> FLR40SBLB / M </td><td> İki 40W, 365nm BlackLight mavi UV ampulleri tutan </td></tr><tr><td> Santrifüj </td><td> Eppendorf </td><td> 5811 000.010 * </td><td> * Sipariş numarası. Model 5810 R </td></tr><tr><td> Mikroskop </td><td> Nikon </td><td> TI-ND6-PFS </td><td> 556nm uyarma / 586nm emisyonu filterset ile </td></tr></table>

tracking hypoxic signaling within encapsulated cell aggregates

Diabetes mellitus tip 1, insülin üretim kaybı ve potansiyel olarak öldürücü hiperglisemi, pankreas beta-hücrelerinin sonuçları otoimmün yıkım. Eksojen insülin enjeksiyonuna alternatif bir tedavi seçeneği olarak, fonksiyonel pankreatik doku nakli 1,2 incelenmiştir. Bu yaklaşım, normoglycemia daha doğal, uzun vadeli bir restorasyon söz sunuyor. Konağın bağışıklık sistemi donör doku Koruma ret ve kapsülleme bu amaca ulaşmanıza yardımcı olmak için kullanılan bir yöntemdir önlemek için gereklidir. Aljinat 3 ve agaroz 4 biyolojik olarak elde edilen malzemeler, kapsül yapımı için geleneksel bir seçim var ama inflamasyon veya fibrotik aşırı çoğalma 5 besin ve oksijen taşıma engel neden olabilir . Alternatif olarak, sentetik poli (etilen glikol) (PEG) bazlı hidrojel, yüksek saflıkta, kolayca Fonksiyonlu, olmayan onur kırıcıkontrol edilebilir gözenek büyüklüğüne sahip ve son derece 6,7,8, biyouyumlu. PEG hidrojeller ek bir fayda olarak, fizyolojik olmayan sıcaklıklarda 6,7 uygulama gerektirmez, basit bir fotoğraf crosslinking reaksiyon hızla oluşmuş olabilir . Böyle bir prosedür burada tanımlanmıştır. Crosslinking reaksiyon, photoinitiator UV bozulması, 1 - [4 - (2-metil)-fenil]-2-hidroksi-2-metil-1-propan-1-(Irgacure 2959), serbest radikaller üretir saldırı hangi zincir dimethacrylated PEG (PEGDM) indükleyici crosslinking vinil karbon-karbon çift bağları sona erer. Crosslinking 10 dakika içinde elde edilebilir. Olumlu hücreleri 7,9 desteklemek için böyle bir şekilde inşa PEG hidrojeller gösterilen, düşük photoinitiator konsantrasyon ve kısa UV radyasyona maruz kalma, 10 kapsüllü bir doku canlılığı ve fonksiyonu için zararlı değildir. PEG yöntemi ile aşağıda açıklanan biz metakrilat iken, PEGDM dir.Basınçlı Sigma gibi sunucuları satın aldı. Kapsülleme doğal bir sonucu vasküler bir ağ hücrelerin izolasyonu. Bu nedenle besin temini, özellikle oksijen azalır ve difüzyon ile sınırlıdır. Bu düşük oksijen kullanılabilirliği, özellikle insülin salgı işlevi 11-13 oksijen son derece bağımlı β-hücreleri etkileyebilir . Kapsül kompozisyon ve geometri için difüzyon oranları ve uzunlukları aynı zamanda oksijen etkisi olacaktır. Bu nedenle, biz de PEG kapsül içinde hipoksik hücrelerin belirlenmesi için kullanılan bir tekniktir açıklar. Rekombinant adenovirüs hücreleri Enfeksiyon, hücre içi hipoksi-indüklenebilir faktör (HIF) yollar 14 aktive edildiğinde bir floresan sinyali sağlar . HIFs hipoksiye transkripsiyonel yanıt birincil düzenleyiciler olarak, hipoksik sinyalizasyon (15) tespiti için ideal bir hedef işaretleyici temsil eder. Bu yaklaşım, Hypoxi kolay ve hızlı algılama sağlarc hücreleri. Kısaca, adenovirüs, hipoksi duyarlı bir unsuru (HRE) trimer kontrolü altında kırmızı floresan proteini (Clontech Ds Kırmızı DR) için sıra vardır. Düşük oksijen koşullarının HIF-1 stabilizasyonu floresan protein (Şekil 1) transkripsiyonunu sürücü olacaktır. Bu virüsün inşaat Ek ayrıntılar daha önce 15 olarak yayınlanmıştır . , Virüs -80% 10 gliserol saklanır ° C 3.4 x 10 10 pfu / ml &#39;lik bir konsantrasyon 1,5 mL santrifüj tüplerine 150 mcL alikotları . Laboratuarımızda Önceki çalışmalar, agrega,% 20 oksijen kültür 4 hafta boyunca canlılığını korumak MIN6 hücreleri kapsüllü göstermiştir. MIN6 2 kültüre agrega veya% 1 oranında oksijen etidyum bromür ile boyanarak yanı sıra% 20 oksijen hücrelere göre morfolojik değişiklikler nekrotik hücreler her iki işaretleri (% 85-90 hakkında hala canlı) gösterdi. Agrega,% 20 oranında görüntülenir pürüzsüz bir küre şeklini lost ve agrega hücrelerin düzensiz gruplar gibi göründü. Düşük oksijen stres canlılığı içinde belirgin bir düşüşe neden olmasa da, açıkça MIN6 agregasyonu ve glukoz ile uyarılmış insülin salgılanması 15 olarak ölçülen fonksiyonu etkiliyor. Kapsüllü hücrelerin% 20 ve% 1 oranında oksijen Western blot analizi de HIF-1α DsRed DR protein ekspresyonu ile ilişkilidir düşük oksijen şartlarında kültür hücreleri için önemli bir artış gösterdi.

Watch this Scientific Journal Video about Tracking Hypoxic Signaling within Encapsulated Cell Aggregates at JoVE.com

Tracking Hypoxic Signaling within Encapsulated Cell Aggregates

Bir çapraz PEG hidrojel hücrelerin fotoğraf kapsülleme için bir yöntem açıklanmıştır. Kapsüllü fare İnsulinoma (MIN6) agrega içinde Hipoksik sinyal floresan marker sistemi kullanılarak izlenir. Bu sistem değişiklikleri ile hücre fenotipi hipoksik sinyal hidrojel iskele ve korelasyon içinde hücre seri muayene sağlar.

Encapsulated Hücre Agregalar içinde Takip Hipoksik Sinyalizasyonu

In Diabetes mellitus type 1, autoimmune destruction of the pancreatic &beta;-cells results in loss of insulin production and potentially lethal ...

tracking-hypoxic-signaling-within-encapsulated-cell-aggregates

Research

JoVE Journal

Bioengineering

10.5K Görüntüleme.  University of South Carolina. Bir çapraz PEG hidrojel hücrelerin fotoğraf kapsülleme için bir yöntem açıklanmıştır. Kapsüllü fare İnsulinoma (MIN6) agrega içinde Hipoksik sinyal floresan marker sistemi kullanılarak izlenir. Bu sistem değişiklikleri ile hücre fenotipi hipoksik sinyal hidrojel iskele ve korelasyon içinde hücre seri muayene sağlar.

Video: Tracking Hypoxic Signaling within Encapsulated Cell Aggregates

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a modified two-photon microscope1. As opposed to conventional approaches (raster scan or wide field based on a stack of frames), the 3D orbital tracking allows to localize and follow with a high spatial (10 nm accuracy) and temporal resolution (50 Hz frequency response) the 3D displacement of a moving fluorescent particle on length-scales of hundreds of microns2. The method is based on a feedback algorithm that controls the hardware of a two-photon laser scanning microscope in order to perform a circular orbit around the object to be tracked: the feedback mechanism will maintain the fluorescent object in the center by controlling the displacement of the scanning beam3-5. To demonstrate the advantages of this technique, we followed a fast moving organelle, the lysosome, within a living cell6,7. Cells were plated according to standard protocols, and stained using a commercially lysosome dye. We discuss briefly the hardware configuration and in more detail the control software, to perform a 3D orbital tracking experiment inside living cells. We discuss in detail the parameters required in order to control the scanning microscope and enable the motion of the beam in a closed orbit around the particle. We conclude by demonstrating how this method can be effectively used to track the fast motion of a labeled lysosome along microtubules in 3D within a live cell. Lysosomes can move with speeds in the range of 0.4-0.5 &#181;m/sec, typically displaying a directed motion along the microtubule network8.

In this video protocol we track - at high speed and in three dimensions - fluorescently labeled lysosomes within living cells, using the orbital tracking method in a modified two-photon microscope.

Modifiye İki foton mikroskop 3D Orbital Takip: Hücre içi veziküllerin İzlemeye Bir Uygulama

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Biyomühendislik

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic development, wound healing, and immune responses. However, cell migration is also a key mechanism in cancer enabling these cancer cells to detach from the primary tumor to start metastatic spreading. Within the past years various cell migration assays have been developed to analyze the migratory behavior of different cell types. Because the locomotory behavior of cells markedly differs between a two-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) environment it can be assumed that the analysis of the migration of cells that are embedded within a 3D environment would yield in more significant cell migration data. The advantage of the described 3D collagen matrix migration assay is that cells are embedded within a physiological 3D network of collagen fibers representing the major component of the extracellular matrix. Due to time-lapse video microscopy real cell migration is measured allowing the determination of several migration parameters as well as their alterations in response to pro-migratory factors or inhibitors. Various cell types could be analyzed using this technique, including lymphocytes/leukocytes, stem cells, and tumor cells. Likewise, also cell clusters or spheroids could be embedded within the collagen matrix concomitant with analysis of the emigration of single cells from the cell cluster/ spheroid into the collagen lattice. We conclude that the 3D collagen matrix migration assay is a versatile method to analyze the migration of cells within a physiological-like 3D environment.

Cell migration is a biological phenomenon that is involved in a plethora of physiological, such as wound healing and immune responses, and pathophysiological processes, like cancer. The 3D-collagen matrix migration assay is a versatile tool to analyze the migratory properties of different cell types within in a 3D physiological-like environment.

Bir Üç boyutlu Kollajen Matrix içindeki Hücre Göç Analizi

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous number of imaging techniques currently available and the progress in instrumentation, there is still a need for highly sensitive probes that are suitable for in vivo imaging. One typical problem of available preclinical fluorescent probes is their rapid clearance in vivo, which reduces their imaging sensitivity. To circumvent rapid clearance, increase number of dye molecules at the target site, and thereby reduce background autofluorescence, encapsulation of the near-infrared fluorescent dye, DY-676-COOH in liposomes and verification of its potential for in vivo imaging of inflammation was done. DY-676 is known for its ability to self-quench at high concentrations. We first determined the concentration suitable for self-quenching, and then encapsulated this quenching concentration into the aqueous interior of PEGylated liposomes. To substantiate the quenching and activation potential of the liposomes we use a harsh freezing method which leads to damage of liposomal membranes without affecting the encapsulated dye. The liposomes characterized by a high level of fluorescence quenching were termed Lip-Q. We show by experiments with different cell lines that uptake of Lip-Q is predominantly by phagocytosis which in turn enabled the characterization of its potential as a tool for in vivo imaging of inflammation in mice models. Furthermore, we use a zymosan-induced edema model in mice to substantiate the potential of Lip-Q in optical imaging of inflammation in vivo. Considering possible uptake due to inflammation-induced enhanced permeability and retention (EPR) effect, an always-on liposome formulation with low, non-quenched concentration of DY-676-COOH (termed Lip-dQ) and the free DY-676-COOH were compared with Lip-Q in animal trials.

Fluorescence-quenching of a Liposomal-encapsulated Near-infrared Fluorophore as a Tool for In Vivo Optical Imaging

The use of fluorophores for in vivo imaging can be greatly limited by opsonization, rapid clearance, low detection sensitivity and cytotoxic effects on the host. Encapsulation of fluorophores in liposomes by film hydration and extrusion leads to fluorescence quenching and protection which enables in vivo imaging with high detection sensitivity.

Aracı Olarak bir lipozomal-kapsüllü Yakın-Kızılötesi floroforun Floresan-söndürme<em&gt; İn Vivo</em&gt; Optik Görüntüleme

Optical imaging offers a wide range of diagnostic modalities and has attracted a lot of interest as a tool for biomedical imaging. Despite the enormous ...

Fluorescence Biomembrane Force Probe: Concurrent Quantitation of Receptor-ligand Kinetics and Binding-induced Intracellular Signaling on a Single Cell

Membrane receptor-ligand interactions mediate many cellular functions. Binding kinetics and downstream signaling triggered by these molecular interactions are likely affected by the mechanical environment in which binding and signaling take place. A recent study demonstrated that mechanical force can regulate antigen recognition by and triggering of the T-cell receptor (TCR). This was made possible by a new technology we developed and termed fluorescence biomembrane force probe (fBFP), which combines single-molecule force spectroscopy with fluorescence microscopy. Using an ultra-soft human red blood cell as the sensitive force sensor, a high-speed camera and real-time imaging tracking techniques, the fBFP is of ~1 pN (10-12 N), ~3 nm and ~0.5 msec in force, spatial and temporal resolution. With the fBFP, one can precisely measure single receptor-ligand binding kinetics under force regulation and simultaneously image binding-triggered intracellular calcium signaling on a single live cell. This new technology can be used to study other membrane receptor-ligand interaction and signaling in other cells under mechanical regulation.

We describe a technique for concurrently measuring force-regulated single receptor-ligand binding kinetics and real-time imaging of calcium signaling in a single T lymphocyte.

Floresan biyomembran Kuvvet Probe: Tek Hücre üzerinde Reseptör-ligand Kinetiklerinin Eşzamanlı kantitasyonu ve Bağlama kaynaklı Hücre içi Sinyal

Membrane receptor-ligand interactions mediate many cellular functions. Binding kinetics and downstream signaling triggered by these molecular interactions ...

Transport Properties of Ibuprofen Encapsulated in Cyclodextrin Nanosponge Hydrogels: A Proton HR-MAS NMR Spectroscopy Study

The chemical cross-linking of &#946;-cyclodextrin (&#946;-CD) with ethylenediaminetetraacetic dianhydride (EDTA) led to branched polymers referred to as cyclodextrin nanosponges (CDNSEDTA). Two different preparations are described with 1:4 and 1:8 CD-EDTA molar ratios. The corresponding cross-linked polymers were contacted with 0.27 M aqueous solution of ibuprofen sodium salt (IP) leading to homogeneous, colorless, drug loaded hydrogels.
The systems were characterized by high resolution magic angle spinning (HR-MAS) NMR spectroscopy. Pulsed field gradient spin echo (PGSE) NMR spectroscopy was used to determine the mean square displacement (MSD) of IP inside the polymeric gel at different observation times td. The data were further processed in order to study the time dependence of MSD: MSD = f(td). The proposed methodology is useful to characterize the different diffusion regimes that, in principle, the solute may experience inside the hydrogel, namely normal or anomalous diffusion. The full protocols including the polymer preparation and purification, the obtainment of drug-loaded hydrogels, the NMR sample preparation, the measurement of MSD by HR-MAS NMR spectroscopy and the final data processing to achieve the time dependence of MSD are here reported and discussed. The presented experiments represent a paradigmatic case and the data are discussed in terms of innovative approach to the characterization of the transport properties of an encapsulated guest within a polymeric host of potential application for drug delivery.

The motion regimes of ibuprofen encapsulated in &#946;-cyclodextrin nanosponges polymer network are investigated using pulsed-field-gradient spin-echo (PGSE) NMR technique. Synthesis, purification, drug loading, implementation of the NMR pulse sequence and data analysis to work out the mean square displacement of the drug at several observation times are described in detail.

Siklodekstrin Nanosponge Hidrojeller İbuprofen Encapsulated Ulaştırma Özellikleri: Bir Proton HR-MAS NMR Spektroskopisi Çalışması

The chemical cross-linking of &#946;-cyclodextrin (&#946;-CD) with ethylenediaminetetraacetic dianhydride (EDTA) led to branched polymers referred to as ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, which is regulated by a variety of soluble and physical signals in the microenvironment. Described here is a method created to study the process of branching morphogenesis by forming engineered three-dimensional (3D) epithelial tissues of defined shape and size that are completely embedded within an extracellular matrix (ECM). This method enables the formation of arrays of identical tissues and enables the control of a variety of environmental factors, including tissue geometry, spacing, and ECM composition. This method can also be combined with widely used techniques such as traction force microscopy (TFM) to gain more information about the interactions between cells and their surrounding ECM. The protocol can be used to investigate a variety of cell and tissue processes beyond branching morphogenesis, including cancer invasion.

This manuscript describes a soft lithography-based technique to engineer uniform arrays of three-dimensional (3D) epithelial tissues of defined geometry surrounded by extracellular matrix. This method is amenable to a wide variety of cell types and experimental contexts and allows for high-throughput screening of identical replicates.

Ekstraselüler Matrix içinde Gömülü Mühendislik Üç boyutlu Epitel Dokular

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Targeted Plasma Membrane Delivery of a Hydrophobic Cargo Encapsulated in a Liquid Crystal Nanoparticle Carrier

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. Recently, nanoparticles (NPs) have shown significant promise in the development of such delivery systems. Here, a liquid crystal NP (LCNP)-based delivery system has been employed for the controlled delivery of a water-insoluble dye, 3,3&#8242;-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (DiO), from within the NP core to the hydrophobic region of a plasma membrane bilayer. During the synthesis of the NPs, the dye was efficiently incorporated into the hydrophobic LCNP core, as confirmed by multiple spectroscopic analyses. Conjugation of a PEGylated cholesterol derivative to the NP surface (DiO-LCNP-PEG-Chol) enabled the binding of the dye-loaded NPs to the plasma membrane in HEK 293T/17 cells. Time-resolved laser scanning confocal microscopy and F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) imaging confirmed the passive efflux of DiO from the LCNP core and its insertion into the plasma membrane bilayer. Finally, the delivery of DiO as a LCNP-PEG-Chol attenuated the cytotoxicity of DiO; the NP form of DiO exhibited ~30-40% less toxicity compared to DiOfree delivered from bulk solution. This approach demonstrates the utility of the LCNP platform as an efficient modality for the membrane-specific delivery and modulation of hydrophobic molecular cargos.

A liquid crystal nanoparticle (LCNP) nanocarrier is exploited as a vehicle for the controlled delivery of a hydrophobic cargo to the plasma membrane of living cells.

Sıvı Kristal Nanopartikül Carrier bir Hidrofobik Kargo Encapsulated, hedeflenen Plazma Zarı Teslimat

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. ...

Assembly and Tracking of Microbial Community Development within a Microwell Array Platform

The development of microbial communities depends on a combination of complex deterministic and stochastic factors that can dramatically alter the spatial distribution and activities of community members. We have developed a microwell array platform that can be used to rapidly assemble and track thousands of bacterial communities in parallel. This protocol highlights the utility of the platform and describes its use for optically monitoring the development of simple, two-member communities within an ensemble of arrays within the platform. This demonstration uses two mutants of Pseudomonas aeruginosa, part of a series of mutants developed to study Type VI secretion pathogenicity. Chromosomal inserts of either mCherry or GFP genes facilitate the constitutive expression of fluorescent proteins with distinct emission wavelengths that can be used to monitor community member abundance and location within each microwell. This protocol describes a detailed method for assembling mixtures of bacteria into the wells of the array and using time-lapse fluorescence imaging and quantitative image analysis to measure the relative growth of each member population over time. The seeding and assembly of the microwell platform, the imaging procedures necessary for the quantitative analysis of microbial communities within the array, and the methods that can be used to reveal interactions between microbial species area all discussed.

The development of microbial communities depends on a combination of factors, including environmental architecture, member abundance, traits, and interactions. This protocol describes a synthetic, microfabricated environment for the simultaneous tracking of thousands of communities contained in femtoliter wells, where key factors such as niche size and confinement can be approximated.

Bir Mikro Kuyruklu Dizi Platformunda Mikrobik Topluluk Geliştirmenin Montajı ve Takibi

The development of microbial communities depends on a combination of complex deterministic and stochastic factors that can dramatically alter the spatial ...

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

Currently, most in vitro models of wound healing, such as well-established scratch assays, involve studying cell migration and wound closure on two-dimensional surfaces. However, the physiological environment in which in vivo wound healing takes place is three-dimensional rather than two-dimensional. It is becoming increasingly clear that cell behavior differs greatly in two-dimensional vs. three-dimensional environments; therefore, there is a need for more physiologically relevant in vitro models for studying cell migration behaviors in wound closure. The method described herein allows for the study of cell migration in a three-dimensional model that better reflects physiological conditions than previously established two-dimensional scratch assays. The purpose of this model is to evaluate cell outgrowth via the examination of cell migration away from a spheroid body embedded within a fibrin matrix in the presence of pro- or anti-migratory factors. Using this method, cell outgrowth from the spheroid body in a three-dimensional matrix can be observed and is easily quantifiable over time via brightfield microscopy and analysis of spheroid body area. The effect of pro-migratory and/or inhibitory factors on cell migration can also be evaluated in this system. This method provides researchers with a simple method of analyzing cell migration in three-dimensional wound associated matrices in vitro, thus increasing the relevance of in vitro cell studies prior to the use of in vivo animal models.

Characterizing Cell Migration Within Three-dimensional In Vitro Wound Environments

The goal of this protocol is to evaluate the effect of pro- and anti-migratory factors on cell migration within a three-dimensional fibrin matrix.

İçinde üç boyutlu Vitro hücre göç karakterize ortamlar yara

Currently, most in vitro models of wound healing, such as well-established scratch assays, involve studying cell migration and wound closure on ...

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, typically via intravitreal injections. Encapsulated cells expressing the biologic of choice are becoming a tool for local protein production and release (e.g., via long-term drug delivery). In addition, encapsulation systems utilize permeable materials that allow diffusion of nutrients, waste, and therapeutic factors into and out of cells. This occurs while masking the cells from the host immune response, avoiding the need for suppression of the host immune system. This protocol describes the use of alginate as a polymer in microencapsulation coupled with the electrospray method as a microencapsulation technique. ARPE-19 cells, a spontaneously arising human RPE cell line, has been used in long-term cell therapy experiments due to its lifetime functionality, and it is used here for encapsulation and delivery of the capsules to mouse eyes. The manuscript summarizes the steps for cell microencapsulation, quality control, and ocular delivery.

Presented here is a protocol for the use of alginate as a polymer in microencapsulation of immortalized cells for long-term delivery of biologics to rodent eyes.

Fare Gözüne Biyolojik Teslim için Kapsüllü Hücre Teknolojisi

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...