Yazarlar hipokampal dilim kültürlerin hazırlanması için Matthew Floransa teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma, ABD Ulusal Yaşlanma Enstitüsü ve NZG Alzheimer Derneği bağışları ile desteklenmiştir.

1. Tespit Fiksatifler kanserojen vardır; eldiven giyin ve bir davlumbaz fiksatif anlaştım. Aksi belirtilmediği sürece, bütün inkübasyonlar, buz üzerinde gerçekleştirilir ve bütün çözümler kullanımdan önce filtre edilmelidir. Elektron mikroskobu dereceli reaktifleri kullanın. 1. Gün <ol><li class="jove_content"> Sonra deneysel koşullar (örneğin, viral enjeksiyon, ilaç tedavisi) içinde organotipik hippokampal dilimler ile zar yerleştirin, bir 60 x buz gibi soğuk 0.1 M fosfat tampon maddesi (Sorensen en fosfat tamponu), pH 7.3 içeren 15 mm polistiren Petri kabı. 1 Ekle - doğrudan dilimleri üstünde 0.1 M fosfat tampon 2 ml onları soğuk tutmak için. </li></ol> KRİTİK ADIM: Her zaman taze hazırlanmış tamponlar ve fiksatif kullanın. Tampon pH istenilen aralıkta olduğundan emin olun. Bunu yapmak için bir başarısızlık hücresel yapılar zarar verebilir. <ol start="2"><li> Dilim CA1 disiplinidir yalıtmak için, kullanmakyavaşça CA1 hücre tabakası (Şekil 1) paralel DG yanında dilim boyunca kesmek için tek neşter. Sonra dikey CA3 disiplinidir ve subiculum kaldırmak için kalan dilim kesti. Doku üst yüzeyine tanımlamak için dilim bir köşe kesin. </li></ol> NOT: ilgi protein hiçbir viral teslimat gerekli durumda ortam buz tampon durulayın hafif ile kaldırıldıktan sonra, tüm doku dilim sabit olabilir. Bu, daha sonra CA1 kesmek tarafından takip edilir. KRİTİK ADIM: sonra ızgaralar düzgün kesit için sırayla doku topside takip edin. <ol start="3"><li> Dikkatle neşter arkasına kullanarak membrandan doku kaldırmak. Yavaşça 0.1 M fosfat tamponu ihtiva eden bir 12-kuyucuklu plakaya doku aktarmak için bir Pasteur pipeti kullanarak. </li><li> Plaka kuyudaki tampon çıkarın ve ekleyin 500 &amp; mu; l - 1 aşağıdaki gibidir buz fiksatif ml (pH 7.3):% 0.1 pikrik asit,% 1 paraformaldehid, 0.1 M fosfat tamponlu% 2.5 lik glutaraldehit. 4 de 2 saat inkübe ° C. </li></ol> NOT: Pikrik asit Kuru iken patlayıcı olabilir. Ağzı kapalı bir kapta su ile ıslatılmış tutun. Kuru ve iyi havalandırılan bir yerde saklayın. <ol start="5"><li> Kuyudan fiksatif çıkarın ve 0,1 M fosfat tamponunda örnekleri 3 kez (20 dakika her) yıkayın. </li><li> 0.1 M maleat tampon, pH 6.0 &#39;de% 1 tannik asit (w / v)&#39; de 40 dakika süreyle inkübe edin. </li><li> Maleat tamponu (20 dk her) iki kez durulayın. </li><li> Karanlıkta maleat tampon içinde% 1 uranil asetat (w / v) &#39;de 40 dakika süreyle inkübe edin. Uranil asetat ışığa duyarlıdır ve radyoaktif. Erime sırasında Parafilm ile beher kaplayın ve 4 ° C&#39;de karanlıkta kullanılmamış tampon depolamak </li><li> Maleat tamponu (20 dk her) iki kez durulayın. </li><li> % 0.5 platin klor içinde 20 dakika inkübemaleat tampon içinde ide (w / v). </li><li> Maleat tamponu (20 dk her) iki kez durulayın. 4&#39;te örnekleri Mağaza ° C de daha fazla işlem için hazır olana kadar. </li></ol> 2. Dehidrasyon ve Katıştırma Propilen oksit kanserojen. Bir davlumbaz içinde çalışarak solumaktan kaçınınız. Su hiçbir iz yoktur mutlak,% 100 saflıkta etanol kullanın. Dehidratasyon için farklı konsantrasyonlarda üretmek için bu mutlak etanol seyreltin. 2. Gün <ol><li> % 50 etanol içinde 5 dakika için inkübe edin ve daha sonra% 70 etanol içinde 5 dakika için. </li><li> % 70 etanol içinde taze hazırlanmış% 1 p-fenilendiamin (PPD), oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. </li><li> % 70 etanol içinde üç kez yıkayın. </li><li> % 80 etanol içinde 5 dakika için ve daha sonra% 95 etanol içinde 5 dakika için inkübe edin. </li><li> % 100 etanol içinde iki kere 5 dakika her biri inkübe edin. </li><li> Vidalı kapaklı cam şişelerde hazırlayın ve onlar temiz ve tamamen kuru olduğundan emin olun. Cam şişe için dilimler aktarın vebasit ve açık her flakon etiketleyin. </li><li> Propilen oksit: 1:1 etanol içinde 5 dakika için inkübe edin. </li><li> % 100 propilen oksit içinde iki kere 5 dakika her biri inkübe edin. </li><li> Propilen oksit ile 1:1 &#39;lik bir karışım yapmak için her bir şişeye reçine (EPON) ekleyin. Yavaşça 2 saat boyunca karıştırın. Gömme engelliyor olabilir kabarcıklarını engellemek için çok sıkı şişeleri sallamayın. </li><li> Propilen oksit, ve 2 saat boyunca karıştırılır, 3:1 karışım yapmak için reçine ekleyin. </li><li> 100% reçine aktarın ve inkübe O / N. </li></ol> 3. Gün <ol start="12"><li> 60 Aclar plastik ve 24 saat süre ile tedavi tabakaları arasında sandviç örnekleri ° C. </li></ol> 3. Kesit ve Izgaralar Bağlanış 4. Gün <ol><li> Yarı ince (0,5 mikron) bölümleri kesip 1% toluidin mavi + örneklerin doğru yönlendirmeyi belirlemek için% 1 boraks ile leke. </li><li> Ince kesitler (60 nm) Kes ve nikel ızgaralar, ızgara başına bir bölümüne monte. </li></ol>4. İmmünohistokimya Tüm tamponları ve su kullanılmadan önce filtre edilmelidir. 5. Gün <ol><li> Düz bir yüzeye temiz Parafilm parçası üzerinde% 1 Tween-20/phosphate tampon (T / PB), pH 7.5, bir damla (~ 50 ul) yerleştirin. Yavaşça kenarından temiz forseps ile ızgara pick up ve tampon bölümünde aşağı ve RT 10 dakika inkübe üzerinde yüzer. </li><li> Kağıt filtre bölümü tarafı yukarı koyarak ızgara fazla sıvıyı boşaltın ve ardından RT 15 dakika için T / PB 50 mM glisin üzerinde yüzer. </li></ol> KRİTİK ADIM: kaçınmak için aşırı &#39;carry-over&#39; bir çözüm damlacığından inkübasyonlar sırasında sonraki çözümleri, yavaşça her çözüm değişim arasında 1. filtre kağıdı üzerine ızgara kenarına dokunarak fazla sıvıyı boşaltın. Ayrıca EM kolları arasında sıkışıp herhangi bir çözüm nazikçe çıkarmaya forseps kolları arasında filtre kağıdı bir şerit ile ıslanma tarafından taşıyıcı tutarak forseps ise ensubölümleri tamamen kurumaya yok çalacak. <ol start="3"><li> Filtre kağıdı ile ızgara kurutun ve daha sonra oda sıcaklığında 30 dakika için T / PB ikincil antikor hayvan dan% 2.5 BSA ve% 2.5 serum ihtiva eden çözelti engelleme üzerinde yüzer. </li><li> 4 ° C&#39;de RT veya O / N birincil antikor (T / PB) ile inkübe En uygun süre, sıcaklık ve inkübasyon yanı sıra antikor konsantrasyonu, deneysel olarak tespit olması gerekir. </li><li> Izgara T / PB ile üç kez (2 dakika her) yıkayın. </li><li> Oda sıcaklığında 1 saat için ikincil antikor (10 nm altın ile birlikte 01:20 anti-tavşan veya anti-fare) ile inkübe edin. </li><li> T / PB ile üç kez (2 dakika her) yıkayın. </li><li> 5 dk için T / PB içinde% 2 glutaraldehid ile Postfix&#39;i. </li><li> Sonra T / PB ve üç kez (2 dk her) filtrelenmiş su ile üç defa (2 dk her) yıkayın. </li><li> 10 dk için su içinde% 2 uranil asetat ile inkübe edin. </li></ol> Izgara lekelenme iken, placin göre bir CO2 serbest boşluk hazırlamakBir cam Petri kabı merkezinde Parafilm ga parçası. Sonra havada CO2 absorbe Parafilm etrafında çanak NaOH 4-6 pelet yerleştirin. Birkaç dakika için üst kapalı tutun. Pasteur pipeti kullanın ve hızla cam Petri kabındaki Parafilm için Reynold kurşun sitrat çözeltisi küçük bir hacim aktarın. Odasına CO2 yeniden giriş aza indirmek için Pasteur pipeti eklemek için yeterli üst açın. NOT: Reynold kurşun sitrat çözeltisi yapmak için, mikrodalga fırında deiyonize 100 ml su kaynatın ve hava geçirmez bir kapta soğumaya bırakın. Tıpa ile 50 ml hacminde bir şişede, 1.33 g kurşun karışımı nitrat, 1 dakika boyunca kuvvetli bir şekilde sallama ile 1.76 gr sodyum sitrat ve kaynamış su, 30 ml. Daha sonra 30 dakika boyunca aralıklı olarak çalkalanır. Bu bulutlu çözelti için, 1 M sodyum hidroksit 8 ml eklemek ve yavaş yavaş şişeye bir kaç kez ters. Çözüm belli olacak. Haşlanmış wa 50 ml çözüm getirinter. Sızdırmayacak şekilde kapalı çözüm saklayın. Çökelti belirirse, atmak ve yeni bir olun. <ol start="11"><li> Üç küçük bardak sıcak, taze kaynamış deiyonize su hazırlayın. İlk behere ızgara daldırma ve 30 saniye süreyle etrafında yavaşça girdap tarafından uranil asetat yıkayın. Diğer iki bardak bu adımı yineleyin. </li><li> Reynold kurşun sitrat çözeltisi damla ızgara yerleştirmek için yeterli Cam Petri kabı üst açın. Mümkünse kurşun sitrat üzerine nefes önlemek ve çökelti oluşumunu önlemek için bunu yaparken, bir maske. 10 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> Izgara kaldırmak için yeterli üst açın. Kurşun sitrat üzerine solumaktan kaçının. Sıcak, taze kaynamış damıtılmış su ile üç bardak sırayla batırarak ızgara üç kez yıkayın. Filtre kağıdı, bölüm kadar bir parça ızgara kurumasını bekleyin. Örnek şimdi elektron mikroskobu için hazır hale gelir. </li></ol>

<ol>
	<li>Faulk, W. P., Taylor, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunocolloid+method+for+the+electron+microscope.">An immunocolloid method for the electron microscope.</a> Immunochemistry. 8, 1081-1083 (1971).</li><li>Stirling, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immuno-+and+affinity+probes+for+electron+microscopy:+a+review+of+labeling+and+preparation+techniques.">Immuno- and affinity probes for electron microscopy: a review of labeling and preparation techniques.</a> J. Histochem. Cytochem. 38, 145-157 (1990).</li><li>Phend, K. D., Weinberg, R. J., Rustioni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+to+optimize+post-embedding+single+and+double+staining+for+amino+acid+neurotransmitters.">Techniques to optimize post-embedding single and double staining for amino acid neurotransmitters.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 40, 1011-1020 (1992).</li><li>Berryman, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tannic+acid+on+antigenicity+and+membrane+contrast+in+ultrastructural+immunocytochemistry.">Effects of tannic acid on antigenicity and membrane contrast in ultrastructural immunocytochemistry.</a> J. Histochem. Cytochem. 40, 845-857 (1992).</li><li>Akagi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+for+ultracryotomy+of+CNS+tissue+for+ultrastructural+and+immunogold+analyses.">Improved methods for ultracryotomy of CNS tissue for ultrastructural and immunogold analyses.</a> J. Neurosci. Methods. 153, 276-282 (2006).</li><li>Stirling, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructual+localization+of+lysozyme+in+human+colon+eosinophils+using+the+protein+A-gold+technique:+effects+of+processing+on+probe+distribution.">Ultrastructual localization of lysozyme in human colon eosinophils using the protein A-gold technique: effects of processing on probe distribution.</a> J. Histochem. Cytochem. 37, 709-714 (1989).</li><li>Phend, K. D., Rustioni, A., Weinberg, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+osmium-free+method+of+epon+embedment+that+preserves+both+ultrastructure+and+antigenicity+for+post-embedding+immunocytochemistry.">An osmium-free method of epon embedment that preserves both ultrastructure and antigenicity for post-embedding immunocytochemistry.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 43, 283-292 (1995).</li><li>Zhong, L., Cherry, T., Bies, C. E., Florence, M. A., Gerges, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogranin+enhances+synaptic+strength+through+its+interaction+with+calmodulin.">Neurogranin enhances synaptic strength through its interaction with calmodulin.</a> Embo J. 28, 3027-3039 (2009).</li><li>Zhong, L., Kaleka, K. S., Gerges, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogranin+phosphorylation+fine-tunes+long-term+potentiation.">Neurogranin phosphorylation fine-tunes long-term potentiation.</a> Eur. J. Neurosci. 33, 244-250 (2011).</li><li>Zhong, L., Gerges, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogranin+targets+calmodulin+and+lowers+the+threshold+for+the+induction+of+long-term+potentiation.">Neurogranin targets calmodulin and lowers the threshold for the induction of long-term potentiation.</a> PloS one. 7, e41275 (2012).</li><li>Horisberger, M., Vauthey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labelling+of+colloidal+gold+with+protein.+A+quantitative+study+using+beta-lactoglobulin.">Labelling of colloidal gold with protein. A quantitative study using beta-lactoglobulin.</a> Histochemistry. 80, 13-18 (1984).</li><li>Bendayan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+potential+and+versatility+of+colloidal+gold+cytochemical+labeling+for+molecular+morphology.">A review of the potential and versatility of colloidal gold cytochemical labeling for molecular morphology.</a> Biotech. Histochem. 75, 203-242 (2000).</li><li>Racz, B., Weinberg, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+organization+of+coflin+in+dendritic+spines.">Spatial organization of coflin in dendritic spines.</a> J. Neuroscience. 138 (2), 447-456 (2006).</li><li>Posthuma, G., Slot, J. W., Geuze, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Usefulness+of+the+immunogold+technique+in+quantitation+of+a+soluble+protein+in+ultra-thin+sections.">Usefulness of the immunogold technique in quantitation of a soluble protein in ultra-thin sections.</a> J. Histochem. Cytochem. 35, 405-410 (1987).</li><li>Howell, K. E., Reuter-Carlson, U., Devaney, E., Luzio, J. P., Fuller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+antigen,+one+gold?+A+quantitative+analysis+of+immunogold+labeling+of+plasma+membrane+5'-nucleotidase+in+frozen+thin+sections.">One antigen, one gold? A quantitative analysis of immunogold labeling of plasma membrane 5'-nucleotidase in frozen thin sections.</a> Eur. J. Cell Biol. 44, 318-327 .</li><li>Yokota, E., Kawaguchi, T., Kusaba, T., Niho, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[Immunologic+analysis+of+families+with+complement+receptor+deficiency].">[Immunologic analysis of families with complement receptor deficiency].</a> Nihon. Rinsho. 46, 2040-2045 (1988).</li><li>Kehle, T., Herzog, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+protein-gold+complexes+and+cell+surfaces:+a+method+for+precise+quantitation.">Interactions between protein-gold complexes and cell surfaces: a method for precise quantitation.</a> Eur. J. Cell Biol. 45, 80-87 (1987).</li><li>Bozzola, J. R., Lonnie, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+2.">Ch. 2.</a> Electron Microscopy. 30, (1992).</li><li>Cho, K. O., Hunt, C. A., Kennedy, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+rat+brain+postsynaptic+density+fraction+contains+a+homolog+of+the+Drosophila+discs-large+tumor+suppressor+protein.">The rat brain postsynaptic density fraction contains a homolog of the Drosophila discs-large tumor suppressor protein.</a> Neuron. 9, 929-942 (1992).</li><li>Hunt, C. A., Schenker, L. J., Kennedy, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PSD-95+is+associated+with+the+postsynaptic+density+and+not+with+the+presynaptic+membrane+at+forebrain+synapses.">PSD-95 is associated with the postsynaptic density and not with the presynaptic membrane at forebrain synapses.</a> J. Neurosci. 16, 1380-1388 (1996).</li><li>Gispen, W. H., Leunissen, J. L., Oestreicher, A. B., Verkleij, A. J., Zwiers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+localization+of+B-50+phosphoprotein:+the+(ACTH)-sensitive+protein+kinase+substrate+involved+in+rat+brain+polyphosphoinositide+metabolism.">Presynaptic localization of B-50 phosphoprotein: the (ACTH)-sensitive protein kinase substrate involved in rat brain polyphosphoinositide metabolism.</a> Brain Research. 328, 381-385 (1985).</li><li>Biewenga, J. E., Schrama, L. H., Gispen, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+phosphoprotein+B-50/GAP-43+in+neuronal+and+synaptic+plasticity.">Presynaptic phosphoprotein B-50/GAP-43 in neuronal and synaptic plasticity.</a> Acta Biochim. Pol. 43, 327-338 (1996).</li><li>Maunsbach, A. A., Bjorn, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+16.">Ch. 16.</a> Biomedical Electron Microscopy Illustrated Methods and Interpretations. , 383-426 (1999).</li></ol>

Biz ifşa etmek başka bir şey var.

Bu protokol, biz sıçan hipokampal dilim kültürlerde dendritik dikenler okumak beyin ve omurilik dokularının için Phend ve Weinberg yöntemi benimsemiştir. Hipokampal CA3-CA1 bölgesinde dendritik dikenler nöronal fonksiyonları düzenleyen önemli roller oynamaktadır proteinlerin geniş bir çeşitlilik içeren hassas yapılarıdır. Sunulan yöntem makul etiketleme verimliliği ve omurga içindeki spesifik antijenlerin dağılımı karakterize için yararlıdır iyi tekrarlanabilirlik izin, iyi ultrastrüktü...

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>NAME OF REAGENT</td>
 <td>COMPANY</td>
 <td>CATALOG NUMBER</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>60 x 15 mm polystyrene Petri dish</td>
 <td>Falcon</td>
 <td>351007</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Disposable scalpel</td>
 <td>EXELINT</td>
 <td>29552</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cell culture inserts</td>
 <td>Millipore</td>
 <td>PICM03050</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 nm Goat-anti-rabbit gold</td>
 <td>Electron Microscopy Sciences</td>
 <td>25108</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Anti-Neurogranin antibody</td>
 <td>Millipore</td>
 <td>AB5620</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>100% Picric acid</td>
 <td>Electron Microscopy Sciences</td>
 <td>19550</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>96% Paraformaldehyde</td>
 <td>Acros Organics</td>
 <td>AC41678-0030</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>25% Glutaraldehyde (EM grade)</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>G5882</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Uranyl acetate</td>
 <td>Electron Microscopy Sciences</td>
 <td>22400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>p-Phenylenediamine</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>P6001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Platinum (IV) chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>379840</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tannic acid</td>
 <td>Electron Microscopy Sciences</td>
 <td>21710</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

post-embedding immunogold labeling of synaptic proteins in hippocampal slice cultures

Immunoelectron mikroskopi Subselüler düzeyde biyolojik moleküllerin okumak için güçlü bir araçtır. Gibi kolloidal altın gibi elektron-yoğun işaretleri birleştiğinde antikorlar çeşitli dokularda 1 spesifik antijenlerin lokalizasyonu ve dağılımı ortaya çıkarabilir. İki en yaygın olarak kullanılan teknikler öncesi ve sonrası gömme gömme teknikleri vardır. Ön gömme İmmünogold-elektron mikroskobu (EM) teknikleri, doku içine gömülü önce antikor penetrasyonu izin permeabilize gerekir. Bu teknikler yapılar fakat antikorun kötü penetrasyon (genellikle sadece ilk birkaç mikrometre) bir önemli dezavantajı, 2 &#39;dir korumak için idealdir. Antijenleri daha kolay erişilebilir yerlerde etiketleme sabit dokuların bölümlerinde yer alır, çünkü post-gömme etiketleme yöntemleri bu sorunu önleyebilirsiniz. Yıllar boyunca, bir sayı değiştirme immunoreaktivitesi geliştirmek ve ultrastrüktürel korumak için post-gömme yöntemleri geliştirdik <sup&gt; 3-5. Doku fiksasyonu EM çalışmalarının önemli bir parçasıdır. Fiksatifler kimyasal yerinde dokuları kilitlemek için makromoleküller çapraz bağlar. Sabitleştirici seçimi yapısal koruma, aynı zamanda antijenite ve kontrast sadece etkiler. Osmium tetroksit (Oso 4), formaldehid ve glutaraldehid merkezi sinir sistemi (MSS) fiziksel ve kimyasal işleme sırasında yapısal hasar özellikle yatkındır dokular dahil olmak üzere, yıllardır standart fiksatif olmuştur. Ne yazık ki, 4 Oso yüksek bir reaktiviteye sahip olduğu ve zayıf ve yetersiz etiketleme ile sonuçlanan, antijenler 6 maskelemek için gösterilmiştir. Kimyasal sabitleme önlemek için alternatif yaklaşımlar dokuların donma içerir. Ancak bu teknikleri pahalı enstrümantasyon gerçekleştirmek ve ihtiyaç zordur. Bu sorunların bazıları ele almak ve CNS doku etiketleme, Phend ark geliştirmek. uranil asetat (UA) ve tannik aci ile Oso 4 değiştirilird (TA) ve başarıyla antijen saptama ve beyin ve omurilik dokularının 7 yapısal koruma duyarlılığı artırmak için ek modifikasyon tanıttı. Biz sıçan beyin dokusu için bu osmiyum-ücretsiz post-gömme yöntemi benimsemiş ve sinaptik proteinleri tespit etmek ve incelemek için İmmünogold etiketleme tekniği optimize ettik. Biz burada sıçan hipokampal CA1 piramidal nöronları sinaptik proteinlerin ultrastrüktürel lokalizasyonu belirlemek için bir yöntem mevcut. Biz organotipik hipokampal kültürlü dilim kullanabilirsiniz. Bu dilimler hipokampusun trisynaptic devresi korumak ve dolayısıyla sinaptik plastisite çalışmak için özellikle yararlıdır, bir çok mekanizma öğrenme ve hafıza rol oynadığı düşünülmektedir. Doğum sonrası 5 ve 6 fare / sıçan yavrular Organik tip hipokampal dilimleri 8 önceden tarif edildiği gibi hazırlanmış, ve akut devirme veya overexpress ekzojen proteinler için özellikle kullanışlı olduğu saptanmıştır. Biz daha önce ch için bu protokolü kullandıkneurogranin (Ng), sinaptik fonksiyon 8,9 düzenlenmesinde kritik bir role sahip bir nöron-spesifik protein aracterize. Biz de kalmodulin (CaM) ve Ca 2 + / CaM-bağımlı protein kinaz II (CaMKII) 10 ultrastrüktürel lokalizasyonu karakterize etmek için kullanmıştır. Sonuç olarak gösterildiği gibi, bu protokol dendritik omurga ve omurga 8 dağıtım karakterize yardımcı olmak için Ng etkili etiketleme iyi bir ince yapı koruma sağlar. Ayrıca, burada açıklanan işlemden nöronal fonksiyonları içinde yer alan birçok diğer proteinler okuyan geniş uygulanabilirliği olabilir.

Şekil 2B CA1 piramidal hipokampal nöronlar dendritik omurga endojen Ng moleküllerinin dağılım bir örneğini göstermektedir. Hipokampusun CA1 bölgesinde (Şekil 2A&#39;da görüldüğü gibi) içeren ultra-ince (60 nm) dokuları ile Nikel ızgaraları% 1 içinde kapalı sonra anti ile inkübasyondan önce% 2.5 BSA ve% 2.5 serum ile bloke edilmiş T / PB, 50 mM glisin, -Ng antikor. T / PB ile yıkandıktan sonra, ızgaralar sonra 10 nm altın birleştiğinde anti-tavşan sekonder...

Watch this Scientific Journal Video about Post-embedding Immunogold Labeling of Synaptic Proteins in Hippocampal Slice Cultures at JoVE.com

Post-embedding Immunogold Labeling of Synaptic Proteins in Hippocampal Slice Cultures

Proteinlerin lokalizasyonu ve dağıtım onların hücresel fonksiyonları anlamak için önemli bilgiler sağlar. Elektron mikroskobu üstün çözünürlük uzaysal (EM), belirli bir antijen aşağıdaki immünohistokimya hücre içi lokalizasyonu belirlemek için kullanılabilir. Sürdürmek antijenite EM araştırmalarda özellikle zor olmuştur süre yapısal bütünlüğünü koruyarak merkezi sinir sistemi (MSS), dokular için. Burada, çalışma MSS yapılar ve antijenleri korumak ve sıçan hipokampal CA1 piramidal nöronlarda sinaptik proteinleri karakterize etmek için kullanılan bir yöntemle kabul.

Hipokampal Dilim Kültürleri Synaptic Proteinler Post-gömme immunogold Etiketleme

Immunoelectron microscopy is a powerful tool to study biological molecules at the subcellular level. Antibodies coupled to electron-dense markers such as ...

post-embedding-immunogold-labeling-synaptic-proteins-hippocampal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

17.0K Görüntüleme.  Medical College of Wisconsin. Proteinlerin lokalizasyonu ve dağıtım onların hücresel fonksiyonları anlamak için önemli bilgiler sağlar. Elektron mikroskobu üstün çözünürlük uzaysal (EM), belirli bir antijen aşağıdaki immünohistokimya hücre içi lokalizasyonu belirlemek için kullanılabilir. Sürdürmek antijenite EM araştırmalarda özellikle zor olmuştur süre yapısal bütünlüğünü koruyarak merkezi sinir sistemi (MSS), dokular için. Burada, çalışma MSS yapılar ve an...

Video: Post-embedding Immunogold Labeling of Synaptic Proteins in Hippocampal Slice Cultures

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). &beta;-amyloid (A&beta;), a peptide produced in high amounts in AD, is known to reduce Long-Term Potentiation (LTP), a cellular correlate of learning and memory. Indeed, LTP impairment caused by A&beta; is a useful experimental paradigm for studying synaptic dysfunctions in AD models and for screening drugs capable of mitigating or reverting such synaptic impairments. Studies have shown that A&beta; produces the LTP disruption preferentially via its oligomeric form. Here we provide a detailed protocol for impairing LTP by perfusion of oligomerized synthetic A&beta;1-42 peptide onto acute hippocampal slices. In this video, we outline a step-by-step procedure for the preparation of oligomeric A&beta;1-42. Then, we follow an individual experiment in which LTP is reduced in hippocampal slices exposed to oligomerized A&beta;1-42 compared to slices in a control experiment where no A&beta;1-42 exposure had occurred.

Preparation of Oligomeric &amp;#946;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

One feature of Alzheimer's Disease is the elevation of A&beta;1-42 peptide. Here we provide a protocol for preparing synthetic A&beta;1-42 oligomers, which impairs hippocampal Long-Term Potentiation, a cellular correlate of memory. This procedure is useful for investigating mechanisms of A&beta;-induced pathology and drug screening.

Β-amiloid Oligomerik hazırlanması 1-42</subHipokampal Dilimleri Sinaptik Plastisite değer düşüklüğü> İndüksiyon

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Nörobilim

The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury

Organotypic hippocampal slice culture is an in vitro method to examine mechanisms of neuronal injury in which the basic architecture and composition of the hippocampus is relatively preserved 1. The organotypic culture system allows for the examination of neuronal, astrocytic and microglial effects, but as an ex vivo preparation, does not address effects of blood flow, or recruitment of peripheral inflammatory cells. To that end, this culture method is frequently used to examine excitotoxic and hypoxic injury to pyramidal neurons of the hippocampus, but has also been used to examine the inflammatory response. Herein we describe the methods for generating hippocampal slice cultures from postnatal rodent brain, administering toxic stimuli to induce neuronal injury, and assaying and quantifying hippocampal neuronal death.

The organoptypic hippocampal slice culture model is an in vitro model used to examine neuronal injury in a variety of paradigms. In this article, we describe the methods for generating slice cultures and quantifying neuronal injury.

Nöronal Sakatlık incelenmesi için Organotipik Hipokampal Dilim Kültür Modeli

Organotypic hippocampal slice culture is an in vitro method to examine mechanisms of neuronal injury in which the basic architecture and composition of ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the strength of their connections after brief periods of strong activation. This phenomenon, known as long-term potentiation (LTP) can last for hours or days and has become the best candidate mechanism for learning and memory 2. In addition, the well defined anatomy and connectivity of the hippocampus 3 has made it a classical model system to study synaptic transmission and synaptic plasticity4.
As our understanding of the physiology of hippocampal synapses grew and molecular players became identified, a need to manipulate synaptic proteins became imperative. Organotypic hippocampal cultures offer the possibility for easy gene manipulation and precise pharmacological intervention but maintain synaptic organization that is critical to understanding synapse function in a more naturalistic context than routine culture dissociated neurons methods.
Here we present a method to prepare and culture hippocampal slices that can be easily adapted to other brain regions. This method allows easy access to the slices for genetic manipulation using different approaches like viral infection 5,6 or biolistics 7. In addition, slices can be easily recovered for biochemical assays 8, or transferred to microscopes for imaging 9 or electrophysiological experiments 10.

We describe a method to prepare organotypic hippocampal slices that can be easily adapted to other brain regions. Brain slices are laid on porous membranes and culture media is allowed to form an interface. This method preserves the gross architecture of the hippocampus for up to 2 weeks in culture.

Organotipik Hipokampal Dilim Kültürler

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly oriented in the sagittal plane and develops mostly in the postnatal period in small rodents 3. Furthermore, several antibodies are available which selectively and intensively label Purkinje cells including all processes, with anti-Calbindin D28K being the most widely used. For viewing of dendrites in living cells, mice expressing EGFP selectively in Purkinje cells 11 are available through Jackson labs. Organotypic cerebellar slice cultures cells allow easy experimental manipulation of Purkinje cell dendritic development because most of the dendritic expansion of the Purkinje cell dendritic tree is actually taking place during the culture period 4. We present here a short, reliable and easy protocol for viewing and analyzing the dendritic morphology of Purkinje cells grown in organotypic cerebellar slice cultures. For many purposes, a quantitative evaluation of the Purkinje cell dendritic tree is desirable. We focus here on two parameters, dendritic tree size and branch point numbers, which can be rapidly and easily determined from anti-calbindin stained cerebellar slice cultures. These two parameters yield a reliable and sensitive measure of changes of the Purkinje cell dendritic tree. Using the example of treatments with the protein kinase C (PKC) activator PMA and the metabotropic glutamate receptor 1 (mGluR1) we demonstrate how differences in the dendritic development are visualized and quantitatively assessed. The combination of the presence of an extensive dendritic tree, selective and intense immunostaining methods, organotypic slice cultures which cover the period of dendritic growth and a mouse model with Purkinje cell specific EGFP expression make Purkinje cells a powerful model system for revealing the mechanisms of dendritic development.

We present a protocol that permits to view and to quantitatively asses the morphology of the dendritic tree of individual Purkinje cells grown in organotypic cerebellar slice cultures. This protocol is intended to promote studies on the mechanisms of Purkinje cell dendritic development.

Organotipik Dilim Kültürleri Purkinje Hücre Dendritik Morfoloji Analizi

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

Lateral Diffusion and Exocytosis of Membrane Proteins in Cultured Neurons Assessed using Fluorescence Recovery and Fluorescence-loss Photobleaching

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This directed trafficking is of fundamental importance to deliver, maintain or remove synaptic proteins.
Super-ecliptic pHluorin (SEP) is a pH-sensitive derivative of eGFP that has been extensively used for live cell imaging of plasma membrane proteins1-2. At low pH, protonation of SEP decreases photon absorption and eliminates fluorescence emission. As most intracellular trafficking events occur in compartments with low pH, where SEP fluorescence is eclipsed, the fluorescence signal from SEP-tagged proteins is predominantly from the plasma membrane where the SEP is exposed to a neutral pH extracellular environment. When illuminated at high intensity SEP, like every fluorescent dye, is irreversibly photodamaged (photobleached)3-5. Importantly, because low pH quenches photon absorption, only surface expressed SEP can be photobleached whereas intracellular SEP is unaffected by the high intensity illumination6-10. 
FRAP (fluorescence recovery after photobleaching) of SEP-tagged proteins is a convenient and powerful technique for assessing protein dynamics at the plasma membrane. When fluorescently tagged proteins are photobleached in a region of interest (ROI) the recovery in fluorescence occurs due to the movement of unbleached SEP-tagged proteins into the bleached region. This can occur via lateral diffusion and/or from exocytosis of non-photobleached receptors supplied either by de novo synthesis or recycling (see Fig. 1). The fraction of immobile and mobile protein can be determined and the mobility and kinetics of the diffusible fraction can be interrogated under basal and stimulated conditions such as agonist application or neuronal activation stimuli such as NMDA or KCl application8,10. 
We describe photobleaching techniques designed to selectively visualize the recovery of fluorescence attributable to exocytosis. Briefly, an ROI is photobleached once as with standard FRAP protocols, followed, after a brief recovery, by repetitive bleaching of the flanking regions. This 'FRAP-FLIP' protocol, developed in our lab, has been used to characterize AMPA receptor trafficking at dendritic spines10, and is applicable to a wide range of trafficking studies to evaluate the intracellular trafficking and exocytosis.

This report describes the use of live cell imaging and photobleach techniques to determine the surface expression, transport pathways and trafficking kinetics of exogenously expressed, pH-sensitive GFP-tagged proteins at the plasma membrane of neurons.

Kültür Nöronlar Membran Proteinlerin Yanal Difüzyon ve ekzositoz Floresans Kurtarma ve Floresans kaybı Photobleaching kullanarak Değerlendirilen

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During embryonic and postnatal development they actively proliferate and generate myelinating oligodendrocytes. These cells have commonly been studied in primary dissociated cultures, neuron cocultures, and in fixed tissue. Using newly available transgenic mouse lines slice culture systems can be used to investigate proliferation and differentiation of oligodendrocyte lineage cells in both gray and white matter regions of the forebrain and cerebellum. Slice cultures are prepared from early postnatal mice and are kept in culture for up to 1 month. These slices can be imaged multiple times over the culture period to investigate cellular behavior and interactions. This method allows visualization of NG2 cell division and the steps leading to oligodendrocyte differentiation while enabling detailed analysis of region-dependent NG2 cell and oligodendrocyte functional heterogeneity. This is a powerful technique that can be used to investigate the intrinsic and extrinsic signals influencing these cells over time in a cellular environment that closely resembles that found in vivo.

A technique to study NG2 cells and oligodendrocytes using a slice culture system of the forebrain and cerebellum is described. This method allows examination of the dynamics of proliferation and differentiation of cells within the oligodendrocyte lineage where the extracellular environment can be easily manipulated while maintaining tissue cytoarchitecture.

Organotipik Dilim Kültürler Oligodendrosit Dinamikler ve miyelinasyonun incelemek için

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

The Analysis of Neurovascular Remodeling in Entorhino-hippocampal Organotypic Slice Cultures

Ischemic brain injury is among the most common and devastating conditions compromising proper brain function and often leads to persisting functional deficits in the affected patients. Despite intensive research efforts, there is still no effective treatment option available that reduces neuronal injury and protects neurons in the ischemic areas from delayed secondary death. Research in this area typically involves the use of elaborate and problematic animal models. Entorhino-hippocampal organotypic slice cultures challenged with oxygen and glucose deprivation (OGD) are established in&#160;vitro models which mimic cerebral ischemia. The novel aspect of this study is that changes of the brain blood vessels are studied in addition to neuronal changes and the reaction of both the neuronal compartment and the vascular compartment can be compared and correlated. The methods presented in this protocol substantially broaden the potential applications of the organotypic slice culture approach. The induction of OGD or hypoxia alone can be applied by rather simple means in organotypic slice cultures and leads to reliable and reproducible damage in the neural tissue. This is in stark contrast to the complicated and problematic animal experiments inducing stroke and ischemia in vivo. By broadening the analysis to include the study of the reaction of the vasculature could provide new ways on how to preserve and restore brain functions. The slice culture approach presented here might develop into an attractive and important tool for the study of ischemic brain injury and might be useful for testing potential therapeutic measures aimed at neuroprotection.

A protocol for entorhino-hippocampal organotypic slice cultures, which allows reproducing many aspects of ischemic brain injury, is presented. By studying changes of the neurovasculature in addition to changes in the neurons, this protocol is a versatile tool to study plastic changes in neural tissue after injury.

Içinde Neurovascular Yaptırma Analizi Entorhino-hipokampal Organotipik Dilim Kültürler

Ischemic brain injury is among the most common and devastating conditions compromising proper brain function and often leads to persisting functional ...

Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity is achieved in neurons within a specific time frame. These long-term plasticity-related processes are the leading candidate models to study the basis of memory formation and persistence at the cellular level. Both STC and cross-tagging involve two serial processes: (1) setting of the synaptic tag as triggered by a specific pattern of stimulation, and (2) synaptic capture, whereby the synaptic tag interacts with newly synthesized plasticity-related proteins (PRPs). Much of the understanding about the concepts of STC and cross-tagging arises from the studies done in CA1 region of the hippocampus and because of the technical complexity many of the laboratories are still unable to study these processes. Experimental conditions for the preparation of hippocampal slices and the recording of stable late-LTP/LTD are extremely important to study synaptic tagging/cross-tagging. This video article describes the experimental procedures to study long-term plasticity processes such as STC and cross-tagging in the CA1 pyramidal neurons using stable, long-term field-potential recordings from acute hippocampal slices of rats.

This video article describes experimental procedures to study long-term plasticity and its associative processes such as synaptic tagging, capture and cross-tagging in the CA1 pyramidal neurons using acute hippocampal slices from rodents.

Kemirgenler gelen akut Hipokampal Dilimleri kullanarak Synaptic Etiketleme / yakalama ve Çapraz yakalama İncelenmesi

Synaptic tagging and capture (STC) and cross-tagging are two important mechanisms at cellular level that explain how synapse-specificity and associativity ...

High-Resolution Quantitative Immunogold Analysis of Membrane Receptors at Retinal Ribbon Synapses

Retinal ganglion cells (RGCs) receive excitatory glutamatergic input from bipolar cells. Synaptic excitation of RGCs is mediated postsynaptically by NMDA receptors (NMDARs) and AMPA receptors (AMPARs). Physiological data have indicated that glutamate receptors at RGCs are expressed not only in postsynaptic but also in perisynaptic or extrasynaptic membrane compartments. However, precise anatomical locations for glutamate receptors at RGC synapses have not been determined. Although a high-resolution quantitative analysis of glutamate receptors at central synapses is widely employed, this approach has had only limited success in the retina. We developed a postembedding immunogold method for analysis of membrane receptors, making it possible to estimate the number, density and variability of these receptors at retinal ribbon synapses. Here we describe the tools, reagents, and the practical steps that are needed for: 1) successful preparation of retinal fixation, 2) freeze-substitution, 3) postembedding immunogold electron microscope (EM) immunocytochemistry and, 4) quantitative visualization of glutamate receptors at ribbon synapses.

The postembedding immunogold method is one of the most effective ways to provide high-resolution analyses of the subcellular localization of specific molecules. Here we describe a protocol to quantitatively analyze glutamate receptors at retinal ribbon synapses.

Retina Şerit Sinapslar at Membran Reseptör Yüksek Çözünürlüklü Sayısal immunogold Analizi

Retinal ganglion cells (RGCs) receive excitatory glutamatergic input from bipolar cells. Synaptic excitation of RGCs is mediated postsynaptically by NMDA ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. This model is suitable for addressing different research questions that involve studies on neuroprotection, electrophysiological experiments on neurons, neuronal networks or tumor invasion. The hippocampal architecture and neuronal activity in multisynaptic circuits are well conserved in OHSC, even though the slicing procedure itself initially lesions and leads to formation of a glial scar. The scar formation alters presumably the mechanical properties and diffusive behavior of small molecules, etc. Slices allow the monitoring of time dependent processes after brain injury without animal surgery, and studies on interactions between various brain-derived cell types, namely astrocytes, microglia and neurons under both physiological and pathological conditions. An ambivalent aspect of this model is the absence of blood flow and immune blood cells. During the progression of the neuronal injury, migrating immune cells from the blood play an important role. As those cells are missing in slices, the intrinsic processes in the culture may be observed without external interference. Moreover, in OHSC the composition of the medium-external environment is precisely controlled. A further advantage of this method is the lower number of sacrificed animals compared to standard preparations. Several OHSC can be obtained from one animal making simultaneous studies with multiple treatments in one animal possible. For these reasons, OHSC are well suited to analyze the effects of new protective therapeutics after tissue damage or during tumor invasion. 
The protocol presented here describes a preparation method of OHSC that allows generating highly reproducible, well preserved slices that can be used for a variety of experimental research, like neuroprotection or tumor invasion studies.

Organotypic hippocampal slice cultures (OHSC) represent an in vitro model that simulates the in vivo situation very well. Here we describe a vibratome-based improved slicing protocol to obtain high quality slices for use in assessing the neuroprotective potential of novel substances or the biological behavior of tumor cells.

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...