Biz hasta doku örnekleri koleksiyonu ile yardım için Minnesota Üniversitesi Doku Alımı Tesisi çalışanlarına teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma MB Minnesota Yumurtalık Kanseri Birliği tarafından ve MB Jinekolojik Onkoloji Bölüm fonunun, Randy Tıraş Kanser Araştırma ve MB Toplum Fonu tarafından, Savunma Bakanlığı Yumurtalık Kanseri Araştırma Programı (OCRP) MB OC093424 tarafından desteklenmiştir. Maliyeciler, çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayımlamak için karar ya da yazının hazırlanmasında herhangi bir rolü vardı.

Etik Bildirimi Yumurtalık kanseri Katı numuneler Kurumsal Değerlendirme Kurulu Komite sonra Minnesota Üniversitesi Doku Alımı Tesisi (TPF) elde edilmiştir: İnsan Konu Kurulu (KİK) onayı. 1.. Reaktif Kur <ol><li> % 10 FBS ve 100 birim penisilin-streptomisin ile takviye DMEM ile tam bir DMEM ortamıyla hazırlayın. 4 ° C &#39;de sıcak bir orta depolamak ve 37 ° C, kullanımdan önce. </li><li> Birden fazla donma önlemek için 5-10 ml ayrı cilt içine kısım dispase II nonfrost ücretsiz dondurucuda -20 ° C&#39;de çözülür ve mağaza. </li></ol> 2. Doku Toplama <ol><li> Makroskopik olarak bir patolog tarafından kanser gibi tanımlanan alanlarda cerrahi sırasında yumurtalık kanseri (boyut olarak ~ 5 g) katı madde örnekleri toplamak. Klinik örnekler-de tespit ve kurumsal protokollere göre kayıtlıdır. </li><li> Steril, sc örnekleri yerleştirinrew kapak, polipropilen, buzla soğutulmuş PBS nin 30 ml &#39;si ile doldurulmuş bir kap ve numune. Ve numune toplama 30 dakika (Şekil 1) içinde, buz üzerinde işlem için araştırma laboratuvarında için cerrahi patoloji laboratuvar numunelerini taşımak. </li></ol> 3. Doku İşleme <ol><li> Steril koşullar altında çalışarak, bir Petri kabı üzerine numune (60 mm x 60 mm), taze, buz soğukluğunda 10 ml PBS ihtiva eden ve bundan başka (2 mm veya daha az) mümkün olan en küçük parçalar halinde kesilmiş, bir steril bir jilet kullanılarak (aktarmak Şekiller 2A ve 2B). </li><li> DMEM dispase II (2.4 U / ml) (30 dakika boyunca 37 ° C) önceden ısıtılmış 10 ml içeren, 15 ml konik tüp içine kıyılmış dokuları aktarın ve 30 dakika boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C&#39;de inkübe edin. Örneklerin optimal sindirim sağlamak için, el ile hücre karışımının her bir 5 dakika çalkalayın. </li><li> 30 dakika inkübasyon, transferi (kullandıktan sonra10 ml serolojik pipet) bir hücre süzgecinden (70 um mesh) üzerine hücre bulamacı, 50 ml konik tüp üstüne yerleştirilir ve bir şırınga pistonunun kullanılarak örgü karşı hafif bir basınç uygulamak. (Mesh üstünde kalan) herhangi bir çözülmemiş doku atın ve 50 ml konik bir tüp içinde, steril, elde edilen hücre süspansiyonu toplar. 4 ° C &#39;de, 7 dakika (Şekil 3) için 320 x g&#39;de santrifüjleyin. </li><li> Süpernatant atılır ve% 10 FBS içeren DMEM, 10 ml hücre pelletini. </li><li> Hücre% 5 CO2 ile bir Petri tabağına ve süspansiyon 37 ° C de (Şekil 4) inkübe edin. </li><li> Ilk kaplama 24 saat sonra, ortam, değiştirin. Bu, hücre kalıntılarının uzaklaştırılmasından ve kültür içinde mevcut olan eritrositlerin çoğunluğu için izin verir. </li><li> ORTA birincil EOC&#39;nin kültürleri aşağı uygulamalar için hazır sonra aşağıdaki iki hafta boyunca her üç günde bir değiştirin. </li></ol>

<ol>
	<li>Kurman, R. J., Visvanathan, K., Roden, R., Wu, T. C., Ie M, S. h. i. h. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+treatment+of+ovarian+cancer:+shifting+from+early+stage+to+minimal+volume+of+disease+based+on+a+new+model+of+carcinogenesis.">Early detection and treatment of ovarian cancer: shifting from early stage to minimal volume of disease based on a new model of carcinogenesis.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 198 (4), 351-356 (2008).</li><li>Kuhn, E., Kurman, R. J., Shih, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+Cancer+Is+an+Imported+Disease:+Fact+or+Fiction.">Ovarian Cancer Is an Imported Disease: Fact or Fiction.</a> Curr. Obstet. Gynecol. Rep. 1 (1), 1-9 (2012).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+biomarkers+for+ovarian.">Early detection biomarkers for ovarian.</a> J. Oncol. , (2012).</li><li>Shepherd, T. G., Theriault, B. L., Campbell, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nachtigal+M.W.+Primary+culture+of+ovarian+surface+epithelial+cells+and+ascites-derived+ovarian+cancer+cells+from+patients.">Nachtigal M.W. Primary culture of ovarian surface epithelial cells and ascites-derived ovarian cancer cells from patients.</a> Nat. Protoc. 1 (6), 2643-2649 (2006).</li><li>Tsao, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells+immortalized+by+human+papilloma+viral+oncogenes+(HPV-E6E7+ORFs).">Characterization of human ovarian surface epithelial cells immortalized by human papilloma viral oncogenes (HPV-E6E7 ORFs).</a> Exp. Cell. Res. 218 (2), 499-507 (1995).</li><li>Auersperg, N., Maines-Bandiera, S. L., Dyck, H. G., Kruk, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cultured+human+ovarian+surface+epithelial+cells:+phenotypic+plasticity+and+premalignant+changes.">Characterization of cultured human ovarian surface epithelial cells: phenotypic plasticity and premalignant changes.</a> Lab. Invest. 71 (4), 510-518 (1994).</li><li>Brewer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+model+of+normal,+immortalized+ovarian+surface+epithelial+and+ovarian+cancer+cells+for+chemoprevention+of+ovarian+cancer.">In vitro model of normal, immortalized ovarian surface epithelial and ovarian cancer cells for chemoprevention of ovarian cancer.</a> Gynecol. Oncol. 98 (2), 182-192 (2005).</li><li>Sueblinvong, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment,+characterization+and+downstream+application+of+primary+ovarian+cancer+cells+derived+from+solid+tumors.">Establishment, characterization and downstream application of primary ovarian cancer cells derived from solid tumors.</a> PLoS One. 7 (11), (2012).</li><li>Rockwell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-in+vitro+tumour+cell+lines:+characteristics+and+limitations+as+models+for+human+cancer.">In vivo-in vitro tumour cell lines: characteristics and limitations as models for human cancer.</a> Br. J. Cancer Suppl. 41 (4), 118-122 (1980).</li><li>Wong, C., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+application+and+limitations+of+breast+cancer+cell+lines+to+study+tamoxifen+and+aromatase+inhibitor+resistance.">The development, application and limitations of breast cancer cell lines to study tamoxifen and aromatase inhibitor resistance.</a> J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 131 (3-5), 83-92 (2012).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Yumurtalık kanseri etiyolojisi ve gelişme daha iyi anlaşılması, bu yıkıcı hastalıktan etkilenen kadınların sonucunu iyileştirmek için çok önemlidir. Bu bağlamda, kullanılmasıdır kurulmuş ve &quot;ticari olarak temin edilebilen&quot; yumurtalık kanseri hücre çizgisi şüphesiz son derece yararlı olmuştur. Ancak, bugün biz kanseri hücre hatları onlar heterojenitenin 9,10 eksikliği gibi birçok açıdan kökenli insan tümör temsilcisi olmadığını biliyorum. <p class="jove_co...

Nispeten düşük insidansı rağmen, yumurtalık kanseri jinekolojik hastalıklar ve kadınlarda 1,2 arasında kanser ölümlerinin beşinci önde gelen nedeni arasında en ölümcül olanıdır. Bu sadakatle hastalığın 3&#39;ün başlangıcı ve ilerlemesini özetlemek güvenilir araçlar ve model eksikliğinden kaynaklanmaktadır. Yumurtalık kanseri hakkındaki bilgi, bugün çoğu asitik sıvı 4-7 geri ölümsüzleştirilmiş over yüzey epitel hücreleri (kaybetmez), yumurtalık kanseri hücre hatları ve primer yumurtalık kanser hücrelerinin kullanımı ile mümkün olmuştur. Ne yazık ki, bunların kullanımı ölümsüzleşme işlemi ile ya da in vitro pasajlar ilişkili genetik ve fenotipik bir dizi değişiklik ve asitik sıvı preparattan elde nüfusun heterojenliği dahil olmak üzere çeşitli sınırlamalara sahiptir. Bu nedenle, yumurtalık kanseri tanımlanabilir ve belirli katı örneklerden türetilmiş primer yumurtalık kanseri hücrelerinin uniqu temsilyumurtalık kanserinin ilerlemesini eğitim için e araçtır. Bu habis hücrelerin elde edilmesi ile ilgili başlıca zorluklar canlılık kaybına ve EOC, bu hücrelerin kültürü içinde çoğalma kapasitesinin vaktinden önce eksikliği ile birlikte stromal hücreleri ya da fibroblastlarının bir büyüme kaynaklanmaktadır. Katı tümörlerden tek hücre süspansiyonları oluşturmak için çeşitli yöntemler halen mekanik yollarla ya da enzimatik ayrışma yoluyla, ancak bazı teknikler tercih edilen sonucun 8 daha büyük bir miktarda, verim vardır. Burada, gösteriyor ki uygun, fibroblast içermeyen EOC hücrelerinin etkili bir kurtarma dispase II sonuçları ile enzimatik sindirim. Bu şekilde elde edilen kültürler EOC genetik manipülasyonu için son derece hassastır ve aynı zamanda, ilaç tarama deneylerinde yararlıdır, bu EOC kültürler çok alt uygulamalar için uygun olduğuna işaret etmektedir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="720">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:275px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:125px;">Company</td>
			<td style="width:155px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">REAGENTS:</td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1X PBS, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific)</td>
			<td style="width:125px;">Thermoscientific</td>
			<td style="width:155px;">02 1090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;DMEM medium, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">11995-065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Fetal bovine serum, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Thermo Scientific Hyclone</td>
			<td style="width:155px;">SH30396.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen)</td>
			<td style="width:125px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:155px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Dispase II, sterile (Roche)</td>
			<td style="width:125px;">Roche</td>
			<td style="width:155px;">04942 078 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">&#160;Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;Small dissecting scissors, sterile</td>
			<td style="width:125px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:155px;">08-945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">&#160;15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD, Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;10 ml serological pipette, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td style="width:155px;">13-678-11E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 ml syringe plunger, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Tyco Healthcare</td>
			<td align="right" style="width:155px;">8881516911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Nylon filter (70 &#956;m ) cell strainer, sterile (BD Falcon)</td>
			<td style="width:125px;">BD Falcon</td>
			<td align="right" style="width:155px;">352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:125px;"></td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10-cm Petri dish, sterile&#160;</td>
			<td style="width:125px;">Corning</td>
			<td align="right" style="width:155px;">430167</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method for obtaining primary ovarian cancer cells from solid specimens

Yumurtalık kanseri başlamasını ve ilerlemesini soruşturma için güvenilir araçlar acilen ihtiyaç vardır. Yumurtalık kanseri hücresi hatlarının kullanımı yumurtalık kanseri anlamak için değerli bir araç devam ederken, bunların kullanımı, birçok sınırlamalar vardır. Bu heterojenlik eksikliği ve genişletilmiş in vitro pasaj ile ilişkili genetik değişikliklerin bolluk vardır. Burada birincil yumurtalık kanseri hücrelerinin hızlı kurulması için bir yöntem sağlar: bir ameliyat sırasında toplanan katı klinik örnekler meydana açıklar. Yöntem, 30 dakika boyunca enzimatik sindirme klinik örnekleri tabi oluşur. İzole edilmiş hücre süspansiyonu büyümeye bırakılır ve ilaç taraması gibi alt uygulama için kullanılabilir. Kurulan yumurtalık kanseri hücre hatları üzerinden birincil yumurtalık kanseri hücre çizgilerinin avantajı, türetildikleri ve farklı sitelerde olup türetilebilir orijinal spesifik klinik numuneler için temsili olmasıdır primary veya metastatik over kanseri.

Yumurtalık kanseri Taze klinik örnekleri (Şekil 1), ameliyat sonrası toplandı ve hücre karışımın küçük parçalar oluşturan (Şekil 2A ve 2B) kesilir. Bu, enzimatik tedaviye numunelerin uygun poz sağlar. Hücre bulamacı enzimatik sindirme maruz bırakılmış ve 30 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edilir. Inkübasyon süresi boyunca bulamaç (özellikle her ajitasyon sonra) giderek daha bulanık hale gelir ve bu doku ayrıştırma bir işaretidir. İ...

Watch this Scientific Journal Video about Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens at JoVE.com

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Bu çalışma, bir katı klinik örneklerden birincil yumurtalık kanser hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu için ayrıntılı bir yöntemi tarif etmektedir. Yumurtalık kanseri klinik örnekler alt uygulamalar için son derece uygun olan uygun bir, fibroblast içermeyen epitelyal yumurtalık kanseri (EOC) hücreleri elde etmek için enzimatik sindirme tabi tutulur.

Katı Örneklerinin From İlköğretim Yumurtalık Kanseri Hücreleri alma için yöntem

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

method-for-obtaining-primary-ovarian-cancer-cells-from-solid-specimens

Research

JoVE Journal

Medicine

13.3K Görüntüleme.  University of Minnesota.  Bu çalışma, bir katı klinik örneklerden birincil yumurtalık kanser hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu için ayrıntılı bir yöntemi tarif etmektedir. Yumurtalık kanseri klinik örnekler alt uygulamalar için son derece uygun olan uygun bir, fibroblast içermeyen epitelyal yumurtalık kanseri (EOC) hücreleri elde etmek için enzimatik sindirme tabi tutulur. 