Name: rearing the fruit fly drosophila melanogaster under axenic and gnotobiotic conditions
Uploaded: 2016-07-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions at JoVE.com

Bu protokolün bazı detayları da yazının yararlı yorum sağlanan Dr. Adam Dobson, yardımı ile optimize edilmiştir. Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri Vakfı tarafından desteklenmiştir (FNIH) hibe sayısı R01GM095372 (JMC, A (CN) W, AJD ve AED). FNIH hibe sayısı 1F32GM099374-01 (PDN) ve Brigham Young University başlangıç ​​fonları (JMC, MLK, MV). Yayın maliyetleri Brigham Young University Yaşam Bilimleri Koleji ve Bitki ve Yaban Hayatı Bilimleri Bölümü tarafından desteklendi.

1. Kültür Bakteriler (Başlat ~ 1 Hafta Yumurta Toplama önce) <ol><li> Modifiye MRS 20 (MMRS) plakaları ve suyu boruları (Tablo 1) hazırlayın. Her 100 mm Petri plaka içine agar 20 ml MMRS dökün ve / kuru gecede soğumasını bekleyin, ya da 5 ml MMRS 18 mm test tüpleri içine et suyu. </li><li> Streak Asetobakter pomorum, A. tropicalis, Lactobacillus brevis, L. agar plakaları MMRS ilgili plantarum. Gece boyunca 30 ° C&#39;de Acetobacter inkübe edin. Kapatmadan önce, karbon dioksit ile hava geçirmez bir kapta ve sel tabak koyarak anaerobik Lactobacillus kuluçkaya yatmaktadır. gece boyunca 30 ° C&#39;de inkübe edin. Not: L. brevis kolonileri 24-48 saat kadar görünür olmayabilir. Plakalar 4 ° C de muhafaza edilebilir ve koloniler 3 hafta için kullanılabilir. </li><li> İki üç gün steril diyet (bölüm 5) ile dechorionated yumurta aktarmadan önce, bir test tüpü con içine MMRS plakadan tek bir koloni almakronyum MMRS buyyondan. Her iki 30 ° C&#39;de, çalkalanarak Acetobacter büyümek ve 24 saat boyunca ya da bulanık kadar statik Lactobacillus büyür. </li></ol> 2. Steril Diyet hazırlayın <ol><li> 2 L&#39;lik bir Erlenmeyer şişesi içinde, steril bir diyet (Tablo 2) hazırlanması. o 3 ardışık kez haşlanmış kadar diyet mikrodalga; Her kaynatın arasında karıştırın. </li><li> konik santrifüj tüplerine diyet aktarma sırasında karıştırmaya devam etmek üzere, bir şişeyi çalkalama levhasının üzerine yerleştirin. 50 ml santrifüj tüplerine diyet 7.5 ml aktarın. Gevşek bir kapalı, otoklav polipropilen raf tüpler kap ve yer. </li><li> Bir 121 ° C&#39;de otoklav 25 dakika boyunca 15 psi ile uçucu diyet sterilize edin. otoklav gelen rafları çıkarın ve hemen soğuma sırasında ayrı değil diyet sağlamak için yatay olarak her raf sallayın. kapağı veya tüplerin jantlara diyetin transferini önlemek için dikey rafları sallamak için dikkatli olun. Diyet tam 45 dakika boyunca bir karıştırıcıda soğumasına izin verin veYine elle yatay diyet sallayın. Not: Diyet bir hafta kadar için 4-15 ° C&#39;de muhafaza edilebilir. </li><li> örtülü Otoklavlanabilir raflar kullanmaya alternatif olarak (2.1-2.3 adımlar), veya asit koruyucu içeren diyetler sinekleri yükseltmek için, aşağıdaki adımları gerçekleştirin: <ol><li> şişeye bir karıştırma çubuğuna sahip 2 L&#39;lik bir şişede 1 litre sıvı diyet hazırlayın. diyet Otoklav. </li><li> Otoklavlamadan sonra, 10 mi koruyucu eklenir ve ısıtılmış bir karıştırma plakası üzerinde sürekli karıştırılır. ağar, 50-60 ° C&#39;ye soğuduktan sonra, 50-60 ° C&#39;de ısıtılarak şişe sıcaklığı biyo-güvenlik kabini ısıtılmış bir karıştırma plakası balon hareket ve bakımı. </li><li> biyogüvenlik kabini, ayrı ayrı konik tüpler içine pipet ~ 7.5 ml. </li></ol></li></ol> 3. Yumurta döşeme Kafesleri Hazırlamak <ol><li> 100 ml su, 10 gr bira mayası, 10 g glukoz ve agar 1 g mikrodalga tarafından üzüm sulu agar tabakları sağlayın. Adım 1.1 Çıban için 3 kez getirin ve dondurulmuş üzüm suyu co 10 gr ekleyinncentrate Agar plaka üzerine yumurta görünürlüğünü artırmak için. </li><li> agar 55 ° C&#39;ye soğuduktan sonra, 100 mm Petri kaplarına 20 ml dökün ve katılaşmaya sağlar. </li><li> 15 g su ile 1 gr bira mayası karıştırılarak bir maya macunu ile agar plakaları yüzeyini kaplar. arkasında ince bir maya kalıntısı bırakarak, aşırı kapalı dökün, sonra, yüzey kaplı emin agar plaka üzerine maya macunu dökün. Birden plakaları kullanıldığında, hamur ardışık birden fazla plakalara dökülebilir. </li><li> Bir kafesin dibine agar aktarın. Not: 32 oz deli konteyner akrilik sinek kafesleri için iyi bir alternatiftir. <ol><li> üst delik açan ve toksik olmayan bir yapıştırıcı ile delik üzerinde bir hava örgü yapıştırma 32 oz deli kutu kapağı sağlayın. tutkal ise suda çözünen kapaklı su maruziyetini önlemek. </li></ol></li><li> Transferi 200-300 kabın içine uçar ve kapak ile kapatın. PREVEN için boş bir Petri kabı kapağı ile örgü korumalı delik kapağıistenirse agar yüzeyinden t buharlaşma ve kapağın içinde nemli kağıt mendil ekleyin. 16-20 saat boyunca 25 ° C sıcaklıkta gece boyunca sinekler inkübe edin. </li></ol> 4. Yumurta Toplama <ol><li> plastik kovan içine naylon örgü yerleştirerek yumurta toplama bir elek hazırlayın. </li><li> Üzerinde yumurta plaka almak için, boş bir kaba aktarılarak kafes sinekler çıkarın. Aynı sinekler ertesi gün kullanılacaksa, taze mayalı üzüm suyu agar plaka içeren yeni bir kafes hemen aktarın. Sinekler 3-5 ardışık gün için kullanılabilir </li><li> agar kırmak için dikkatli olmak, temiz bir fırça ile agar ölü sinekler çıkarın. </li><li> yavaşça, damıtılmış su ile agar plaka yıkama agar yüzeyinden yumurta fırçalama ve tel üzerinde bulamacın dökülerek yumurta toplamak. Tüm ya da yumurta en agar plakasından temizleninceye kadar 3-4 kez tekrarlanır. </li></ol> 5. Dechorionate Yumurta ve Steril D TransferiIET <ol><li> % 70 etanol ile (iki tarafın da dahil) iç püskürtülerek biyogüvenlik kabini hazırlayın. Bir laboratuar dokusu ile alt silin ve ~ 15 dakika boyunca UV ışığı ile kaputu sterilize edin. etanol ile püskürtme ve hemen biyogüvenlik kabini yerleştirerek tüm biyolojik olmayan malzemeleri (örnek bardak, fırça, forseps, çöp konteyneri, 400 ml steril su ve% 0.6 sodyum hipoklorit 100 ml) sterilize edin. 15 dakika boyunca UV ışığı ile sterilize edin. </li><li> 120 ml&#39;lik numune fincan ya da diğer steril kap içine yumurta burcunu yerleştirerek 2 sodyum hipoklorit yıkar ilk başlayın. Yavaşça sadece jant altına kadar kovan içine ~% 0.6 sodyum hipoklorit solüsyonu 90 ml dökün. </li><li> 2.5 dakika boyunca yumurta durulayın. Periyodik yukarı ve aşağı hipoklorit çözeltisi içinde burcunu taşımak için forseps kullanarak yumurta yeniden askıya. </li><li> İkinci örnek kabına doğrudan burcu aktarın, biyogüvenlik kabini içinde, 90 ml çamaşır suyu ile önceden doldurulmuş. </li><li> Tekrar etbiyogüvenlik kabini içinde 5.3 adım. ikinci ağartma işleminin sonunda, yumurta burcun kenarlarına bağlı başlamalıdır. </li><li> yürütmek biyogüvenlik kabini 5,7-5,8 adımları. </li><li> ağartıcı atın ve steril su ile 3 kez burcunu yıkayın. forseps ile burcunu hareket ettirerek yumurta her yıkama sırasında birkaç kez yeniden askıya. Üçüncü yıkama sonunda çoğu yumurta burç tarafına eklenmelidir. </li><li> etanol içinde sterilize bir fırça kullanılarak, steril bir diyete burç tarafından yumurta aktarın. tek tek veya küçük gruplar halinde yumurta transferi. flakon başına 30-50 yumurta hedefleyin. Oksijen tüpü girmesine izin gevşek kapakları bırakın. şişeler aksenik kalması ise, bir böcek inkübatör transfer; Aksi takdirde, aşağıdaki gibi bakteri ekleyin. </li></ol> 6. gnotobiyotik 4 Bakteri Türlerinin Kullanımı Sinekler olun <ol><li> Bakteriler hazırlayın <ol><li> Gerekli malzemeleri ile sterilize biyogüvenlik kabini hazırlayın (pipettes, pipet kutuları, sterilize santrifüj tüpleri, MRS suyu ve adım 4.1 olarak test tüpü rafları). Etanol-batırılmış laboratuvar test tüpleri dışını silin biyogüvenlik kabini yerleştirmeden önce silin. </li><li> İlk steril bir mikro santrifüj tüpüne gece boyunca büyümeye 500 ul aktararak, bakterinin ufalanması. bakteriyel yoğunluk düşükse, her tüpe 1,5 ml kadar ekleyin ya da sırayla süpernatant kaldırmak ve aynı tüp ekstra kültürü ekleyin. 10.000 x g&#39;de 10 dakika süre ile biyo-güvenlik kabini ve santrifüj örnekleri çıkarın. numuneler arasındaki kirlenmesini önlemek için filtre ipuçlarını kullanın. </li><li> OD 600 ölçülerek, her kültürünün yoğunluğunu belirler. Çok-çukurlu plaka okuyucusu kullanılarak halinde, 1-, 2-, ve 4- kat seyreltiler halinde 96 oyuklu bir plakaya her bir kültür, 200 ul transfer. </li><li> Bir plaka okuma spektrometresi kullanılarak her bir hücre pelletini (5.2.2) ve aşağıdaki denklem sulandırmak için olan MMRS miktarını belirler. &amp; 50 aşılamak için yeterli suyu eklemeyi planlıyoruz# 956; her sinek flakon l. <ol><li> 1, 1: 2 ve 1: plaka okuma spektrometresi üzerine her bir bakteri kültürü 4 seyreltme OD 1 600 okuma toplayın. 0.1 ve 0.2, bu değer ve 6.1.4.2 ya 6.1.4.3 verilen formüllerde &#39;O&#39; ve &#39;D&#39; ve kendi ilgili seyreltme faktörü kullanımı arasında bir OD600 değeri üreten Bakteriyel suşların her biri için seyreltme seçin. </li><li> Burada açıklanan 4 tür kullanıyorsanız, (belirlenen önceden CFU dönüşüm 20 OD 600) Bu denklemi kullanarak eşdeğer koloni oluşturan birim hücreleri (CFU) / ml yoğunluklara normalleştirmek: E = ((OB) x V x D) / C E = hacim (ul) pelet tekrar süspansiyon nerede, O = OD 600 bakteri, B = OD 600 boş medya, D = katlama seyreltme, V = ul bakteri kültürü önce santrifüj, önceden belirlenmiş sabiti C = OD 600. Yan Kod bu denklemler kullanılarak hesaplamalar örnekleri için dosya bakın. spektrofotometre için&quot;OB&quot; yerine &quot;O&quot; otomatik olarak boş kullanın s. Not: aşağıdaki gibi önceden belirlenmiş sabitleri (10 7 CFU ml -1 normalize birimler OD 600, 20 yılında elde edilen sabitler): A. tropicalis (0.052), A. pomorum (0.038), L brevis (0.056), L plantarum (0.077). </li><li> Diğer bakteri türlerini kullanarak, bu denklemi kullanarak 600 = 0.1 OD yoğunluğu normalleştirmek (hayır CFU / OD 600 sabit mevcuttur): E = ((OB) x V x D) /0.1 OD 600 Not: üniteleri aşama 6.1.4.2 ile aynıdır. Yan Kod bu denklemler kullanılarak hesaplamalar örnekleri için dosya bakın. </li></ol></li><li> biyogüvenlik kabini, bir pipet ucu ile süpernatant kaldırmak ve adım 6.1.4.2 hesaplanan taze MMRS veya PBS içinde pelletini. </li></ol></li><li> Bakteriler aşılamak <ol><li> Steril diyet An ile konik tüpler transfer bakterilerin 50 uld biyogüvenlik kabini yumurta dechorionated. şişeleri arasında kirlenmeyi önlemek için yumurta transferinden sonra bakteri ekleyin. </li><li> 25 ° C&#39;de bir inkübatör içinde inoküle tüpleri </li></ol></li></ol> Sterilite 7. Önlem CFU Yük / Test <ol><li> Seramik boncuk 125 ul ve MMRS suyu 125 ul içeren bir 1.7 ml mikrofuge&#39;de tüp tüm vücut sinek homojenatlarında transfer 5 sinekler (5-7 gün sonrası eclosion) CFU yükünü ölçmek için. 4.0 m / saniye, 30 saniye boyunca bir doku homojenleştirici kullanılarak homojenize sinekler. <ol><li> Alternatif olarak, boncuk ve el 1 dakika boyunca plastik havan tokmaklarının ile mikrosantrifüj tüpler homojenize atlayabilirsiniz. </li><li> Gut Mikrobiyota miktarının ise eksojen mikropları 22 kaldırmak için sinekler sterilize yüzey. Aktarım homogenizations için yeni bir mikrosantrifüj tüpü 1 dakika, aspirat etanol ve transferi için 100 ul% 70 etanol ihtiva eden bir mikrosantrifüj tüpü gider. bağırsak DNA içeriği ölçülecek olursa, f durulamaveya etanol yıkamadan önce% 0.6 sodyum hipoklorit ile 1 dk. </li></ol></li><li> 875 ul MMRS, 5 saniye boyunca girdap ile Homojenat seyreltilir ve bir mikrotitre plakasının birinci oyuğuna homojenat 120 ul pipetleyin. </li><li> 10 ul Homojenat ve önümüzdeki iki kuyu 70 ul MRS kullanarak 8 dilüsyonları: İki ardışık 1 gerçekleştirin. <ol><li> İlk kuyudan 10 ul çıkarın ve ikinci kuyu içeren 70 ul Marsilya ekleyin. Üçüncü de içeren 70 ul Marsilya transferi, iyice ikinci kuyudan 10 ul ikinci kuyunun içeriğini karıştırın ve iyice karıştırın. inceltilmiş, 1: 8 ve 1:64 bu 3 toplam orijinal 1000 ul homojenat konsantrasyonlarına yol açar. </li></ol></li><li> Transfer MMRS plakasına her seyreltme için 10 ul (arzu edildiği takdirde, bir çok kanallı pipet kullanarak). Biraz agar yüzeyine aşağı seyreltisi birkaç milimetre yaymak ve sıvı plakasını geçmeden önce kurumasını bekleyin çanak eğin. Sıvı th üzerinde kururPlakalar iki komşu damlacıkların karışmasını azaltma, 2 gün eski hızlı, e ​​plakası. </li><li> 1-2 gün boyunca 30 ° C&#39;de inkübe edin. bir zamanlar farklı, bireysel koloniler görünür inkübatör plakaları çıkarın ve 10-100 izole koloniler ile bir seyreltme saymak. </li><li> denklemi E = C x D / P x V sinek başına E = CFU, C = kolonilerin sayısı / K, D = seyreltme, P ul sinek Homojenat, V = hacim kaplama = kullanarak anında başına CFU hesaplayın ve F = homojenize sineklerin sayısı. </li></ol>

<ol>
	<li>McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Giving+microbes+their+due--animal+life+in+a+microbially+dominant+world.">Giving microbes their due--animal life in a microbially dominant world.</a> J Exp Biol. 218, 1968-1973 (2015).</li><li>Smith, K., McCoy, K. D., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+axenic+animals+in+studying+the+adaptation+of+mammals+to+their+commensal+intestinal+microbiota.">Use of axenic animals in studying the adaptation of mammals to their commensal intestinal microbiota.</a> Semin Immunol. 19 (2), 59-69 (2007).</li><li>Rieder, L. E., Larschan, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wisdom+from+the+fly.">Wisdom from the fly.</a> Trends Genet. 30 (11), 479-481 (2014).</li><li>Arias, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+and+the+development+of+biology+in+the+20th+century.">Drosophila melanogaster and the development of biology in the 20th century.</a> Methods Mol Biol. 420, 1-25 (2008).</li><li>Lee, W. J., Brey, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+microbiomes+influence+metazoan+development:+insights+from+history+and+Drosophila+modeling+of+gut-microbe+interactions.">How microbiomes influence metazoan development: insights from history and Drosophila modeling of gut-microbe interactions.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 29, 571-592 (2013).</li><li>Erkosar, B., Leulier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+adult+microbiota,+gut+homeostasis+and+longevity:+novel+insights+from+the+Drosophila+model.">Transient adult microbiota, gut homeostasis and longevity: novel insights from the Drosophila model.</a> FEBS Lett. 588 (22), 4250-4257 (2014).</li><li>Chandler, J. A., Lang, J. M., Bhatnagar, S., Eisen, J. A., Kopp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+communities+of+diverse+Drosophila+species:+ecological+context+of+a+host-microbe+model+system.">Bacterial communities of diverse Drosophila species: ecological context of a host-microbe model system.</a> PLoS Genet. 7 (9), e1002272 (2011).</li><li>Broderick, N. A., Buchon, N., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-induced+changes+in+drosophila+melanogaster+host+gene+expression+and+gut+morphology.">Microbiota-induced changes in drosophila melanogaster host gene expression and gut morphology.</a> MBio. 5 (3), 01117 (2014).</li><li>Wong, C. N., Ng, P., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-diversity+bacterial+community+in+the+gut+of+the+fruitfly+Drosophila+melanogaster.">Low-diversity bacterial community in the gut of the fruitfly Drosophila melanogaster.</a> Environ Microbiol. 13 (7), 1889-1900 (2011).</li><li>Staubach, F., Baines, J. F., Kunzel, S., Bik, E. M., Petrov, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+species+and+environmental+effects+on+bacterial+communities+associated+with+Drosophila+in+the+laboratory+and+in+the+natural+environment.">Host species and environmental effects on bacterial communities associated with Drosophila in the laboratory and in the natural environment.</a> PLoS One. 8 (8), e70749 (2013).</li><li>Brummel, T., Ching, A., Seroude, L., Simon, A. F., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+lifespan+enhancement+by+exogenous+bacteria.">Drosophila lifespan enhancement by exogenous bacteria.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (35), 12974-12979 (2004).</li><li>Cox, C. R., Gilmore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+microbial+colonization+of+Drosophila+melanogaster+and+its+use+as+a+model+of+Enterococcus+faecalis+pathogenesis.">Native microbial colonization of Drosophila melanogaster and its use as a model of Enterococcus faecalis pathogenesis.</a> Infect Immun. 75 (4), 1565-1576 (2007).</li><li>Ridley, E. V., Wong, A. C., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbe-dependent+and+nonspecific+effects+of+procedures+to+eliminate+the+resident+microbiota+from+Drosophila+melanogaster.">Microbe-dependent and nonspecific effects of procedures to eliminate the resident microbiota from Drosophila melanogaster.</a> Appl Environ Microbiol. 79 (10), 3209-3214 (2013).</li><li>Rogers, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+divergence+in+gastrointestinal+microbiota+in+physically-separated+genetically+identical+mice.">Functional divergence in gastrointestinal microbiota in physically-separated genetically identical mice.</a> Sci Rep. 4, 5437 (2014).</li><li>Chaston, J. M., Newell, P. D., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenome-wide+association+of+microbial+determinants+of+host+phenotype+in+Drosophila+melanogaster.">Metagenome-wide association of microbial determinants of host phenotype in Drosophila melanogaster.</a> MBio. 5 (5), 01631-01714 (2014).</li><li>Huang, J. H., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consumption+of+dietary+sugar+by+gut+bacteria+determines+Drosophila+lipid+content.">Consumption of dietary sugar by gut bacteria determines Drosophila lipid content.</a> Biology Letters. , (2015).</li><li>Shin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+microbiome+modulates+host+developmental+and+metabolic+homeostasis+via+insulin+signaling.">Drosophila microbiome modulates host developmental and metabolic homeostasis via insulin signaling.</a> Science. 334 (6056), 670-674 (2011).</li><li>Storelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactobacillus+plantarum+promotes+Drosophila+systemic+growth+by+modulating+hormonal+signals+through+TOR-dependent+nutrient+sensing.">Lactobacillus plantarum promotes Drosophila systemic growth by modulating hormonal signals through TOR-dependent nutrient sensing.</a> Cell Metab. 14 (3), 403-414 (2011).</li><li>Wong, A. C., Chaston, J. M., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inconstant+gut+microbiota+of+Drosophila+species+revealed+by+16S+rRNA+gene+analysis.">The inconstant gut microbiota of Drosophila species revealed by 16S rRNA gene analysis.</a> ISME J. 7 (10), 1922-1932 (2013).</li><li>Newell, P. D., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interspecies+interactions+determine+the+impact+of+the+gut+microbiota+on+nutrient+allocation+in+Drosophila+melanogaster.">Interspecies interactions determine the impact of the gut microbiota on nutrient allocation in Drosophila melanogaster.</a> Appl Environ Microbiol. 80 (2), 788-796 (2014).</li><li>Broderick, N. A., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut-associated+microbes+of+Drosophila+melanogaster.">Gut-associated microbes of Drosophila melanogaster.</a> Gut Microbes. 3 (4), 307-321 (2012).</li><li>Ren, C., Webster, P., Finkel, S. E., Tower, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+internal+and+external+bacterial+load+during+Drosophila+aging+without+life-span+trade-off.">Increased internal and external bacterial load during Drosophila aging without life-span trade-off.</a> Cell Metab. 6 (2), 144-152 (2007).</li><li>Wong, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Host+as+the+Driver+of+the+Microbiota+in+the+Gut+and+External+Environment+of+Drosophila+melanogaster.">The Host as the Driver of the Microbiota in the Gut and External Environment of Drosophila melanogaster.</a> Appl Environ Microbiol. 81 (18), 6232-6240 (2015).</li><li>Dobson, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+genetic+determinants+of+microbiota-dependent+nutrition+revealed+by+genome-wide+analysis+of+Drosophila+melanogaster.">Host genetic determinants of microbiota-dependent nutrition revealed by genome-wide analysis of Drosophila melanogaster.</a> Nat Commun. 6, 6312 (2015).</li><li>Bakula, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+persistence+of+a+microbial+flora+during+postembryogenesis+of+Drosophila+melanogaster.">The persistence of a microbial flora during postembryogenesis of Drosophila melanogaster.</a> J Invertebr Pathol. 14 (3), 365-374 (1969).</li><li>Ryu, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+homeostasis+by+the+homeobox+gene+caudal+and+commensal-gut+mutualism+in+Drosophila.">Innate immune homeostasis by the homeobox gene caudal and commensal-gut mutualism in Drosophila.</a> Science. 319 (5864), 777-782 (2008).</li><li>Blum, J. E., Fischer, C. N., Miles, J., Handelsman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequent+replenishment+sustains+the+beneficial+microbiome+of+Drosophila+melanogaster.">Frequent replenishment sustains the beneficial microbiome of Drosophila melanogaster.</a> MBio. 4 (6), 00860 (2013).</li><li>Bitner-Mathe, B. C., Klaczko, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+Drosophila+melanogaster+wing+morphology:+effects+of+sex,+temperature+and+density.">Plasticity of Drosophila melanogaster wing morphology: effects of sex, temperature and density.</a> Genetica. 105 (2), 203-210 (1999).</li><li>Edward, D. A., Chapman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-specific+effects+of+developmental+environment+on+reproductive+trait+expression+in+Drosophila+melanogaster.">Sex-specific effects of developmental environment on reproductive trait expression in Drosophila melanogaster.</a> Ecol Evol. 2 (7), 1362-1370 (2012).</li><li>Ridley, E. V., Wong, A. C., Westmiller, S., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+the+resident+microbiota+on+the+nutritional+phenotype+of+Drosophila+melanogaster.">Impact of the resident microbiota on the nutritional phenotype of Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 7 (5), e36765 (2012).</li><li>Newell, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+function+and+comparative+genomic+analyses+of+the+Drosophila+gut+microbiota+identify+candidate+symbiosis+factors.">In vivo function and comparative genomic analyses of the Drosophila gut microbiota identify candidate symbiosis factors.</a> Front Microbiol. 5, 576 (2014).</li><li>Dewhirst, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylogeny+of+the+defined+murine+microbiota:+altered+Schaedler+flora.">Phylogeny of the defined murine microbiota: altered Schaedler flora.</a> Appl Environ Microbiol. 65 (8), 3287-3292 (1999).</li><li>Min, K. T., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wolbachia,+normally+a+symbiont+of+Drosophila,+can+be+virulent,+causing+degeneration+and+early+death.">Wolbachia, normally a symbiont of Drosophila, can be virulent, causing degeneration and early death.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (20), 10792-10796 (1997).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

<html> Burada anlatılan yöntem birlikte aksenik yetişkinlerin 18,27 seri devir veya antibiyotik tedavisi 13,18 dahil aksenik sinekler, yetiştirme alternatif yöntemlerle, embriyo dechorionation 8,11,18,25,26,27 birkaç yaklaşımlardan biridir. Diğer dechorionation yöntemleri etanol yıkamaları yer alır ve 11,25,26 azaltmak ya da 8 hipoklorit uzanır. (Etanol yıkar olmadan) burada belirtildiği gibi yetiştirilen zaman 100 Drosophila genotipleri aks...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/54219/rearing-fruit-fly-drosophila-melanogaster-under-axenic-gnotobiotic">Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions</a>. The Protocol was updated.
Step 6.1.4.2 of the Protocol was updated from:
If using the 4 species described here, normalize cells to equivalent colony forming unit (CFU)/ml densities (OD600 to CFU conversion determined previously20) using this equation: 
E = ((O-B) x V x D)/C 
where E = volume to resuspend pellet in (&#956;l), O = OD600 bacteria, B = OD600 blank media, D = fold-dilution, V = &#181;l bacterial culture prior to centrifugation, C = OD600 of predetermined constant. See Supplemental Code File for examples of calculations using these equations. For spectrophotometers that automatically blank, use &#34;O&#34; in place of &#34;O-B&#34;. 
Note: The predetermined constants (units OD600, normalized to 107 CFU ml-1, constants derived in20) are as follows: A. tropicalis (0.052), A. pomorum (0.038), L. brevis (0.056), L. plantarum (0.077).
to:
If using the 4 species described here, normalize cells to equivalent colony forming unit (CFU)/ml densities (OD600 to CFU conversion determined previously20) using this equation: 
E = ((O-B) x V x D)/C 
where E = volume to resuspend pellet in (&#956;l), O = OD600 bacteria, B = OD600 blank media, D = fold-dilution, V = &#181;l bacterial culture prior to centrifugation, C = OD600 of predetermined constant. See Supplemental Code File for examples of calculations using these equations. For spectrophotometers that automatically blank, use &#34;O&#34; in place of &#34;O-B&#34;. 
Note: The predetermined constants (units OD600, normalized to 107 CFU ml-1, constants derived in20) are as follows: A. tropicalis (0.053), A. pomorum (0.038), L. brevis (0.077), L. plantarum (0.056).

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/54219/rearing-fruit-fly-drosophila-melanogaster-under-axenic-gnotobiotic">Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions</a>. The Protocol was updated.

Erratum: Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

Çoğu hayvan yakından ölüme 1 doğumdan bakterilerin ( &#39;Mikrobiyota&#39;) ile ilişkilidir. Mikroorganizma içermeyen ( &#39;aksenik&#39;) ve mikroorganizma ilişkili (konvansiyonel) hayvanların karşılaştırılması mikropların metabolik, besinsel, vasküler, hepatik, solunum, immünolojik, endokrin ve nörolojik fonksiyon 2 olmak üzere hayvan sağlığı çeşitli yönlerini, etkilediği gösterilmiştir. Meyve Drosophila melanogaster mikrop 3,4 mevcudiyetinde Bu yöntemlerin pek çoğu anlaşılması için ve hayvan sağlığı 5,6 ilgili Mikrobiyota etkisini incelemek için önemli bir modeldir uç. Hiçbir bakteri türleri her birey ( &#39;çekirdek&#39;) mevcuttur, ancak Asetobakter ve Lactobacillus türlerinin sayısal hem laboratuvar yetiştirilen ve vahşi yakalanmış D. Mikrobiyota hakim melanogaster. Acetobacteraceae, Firmi (Komagataeibacter ve Gluconobacter dahil)ve Enterobacteriaceae (örneğin Enterococcus ve Leuconostoc gibi) cutes ya yüksek bolluk 7-12 düşük bolluk Drosophila bireylerde sıklıkla mevcut ya da düzensiz mevcuttur. Drosophila ve memelilerin Mikrobiyota içinde ve nesiller 14,19 karşısında kararsız olduğunu. Mikrobiyota bağımlı özellikler ölçerken Mikrobiyota değişkenlik fenotipik gürültüye neden olabilir. Örneğin, Drosophila 15-18 Acetobacteraceae etkisi lipid (trigliserid) depolama. Acetobacteraceae başka 19&#39;unda birden flakonun sinekler daha bol iseniz, izogenik sinekler farklı fenotipleri 20 olabilir. Farelerde 14 Mikrobiyota inconstancy sorununa yönelik bir çözüm, fare yavrular (Schaedler florası değiştirilmiş) her yeni nesil 8 baskın mikrobiyal türlerin tanımlanmış bir topluluk getirerek, 1960&#39;lı yıllardan bu yana uygulamada olmuşturHer yavru fare Mikrobiyota aynı anahtar üyelerine maruz sağlamak. Mikrobiyota çalışmanın 32 birincil hedefi değildir ve deneysel koşullar, çeşitli önemli mikrop varlığını sağlamak için bir örnek teşkil bile Bu uygulama Mikrobiyota bileşimi için kontrol eder. Drosophila beslenme mikropların etkisini tanımlamak için, aksenik sinek hatları türetmek için çeşitli protokoller embriyoların hipoklorit dechorionation (ya türetilmiş de novo her nesil veya steril diyetler transferi ile generationally tutulan) ve antibiyotik tedavisi 13 de dahil olmak üzere, geliştirilmiştir. Bu tür antibiyotikler tedavi ve seri transferi, de novo dechorionation ile karıştırıcı değişkenler (örneğin, yumurta yoğunluğu, artık kirletici mikrop, hedef dışı antibiyotik etkiler) karşı daha fazla kontrol her ikisi için de kolaylık ve hızlılık gibi farklı yaklaşımlar faydaları vardır. Ne olursa olsun yöntemininEmbriyoların aksenik belirtilen mikrobiyal türlerin hazırlama, tanıtım tanımlı ( &#39;gnotobiyotik&#39;) toplulukları ile Drosophila kültürü izin verir. Alternatif olarak, Schaedler florasının kullanımı taklit bu topluluk her flakon sürekli-etkileyen mikropların varlığını sağlamak ve Mikrobiyota inconstancy komplikasyonlarını önlemek için (sadece birkaç adım 6-7 takiben) geleneksel-koydu yumurta inoküle edilebilir. Burada embriyoların de novo dechorionation tarafından aksenik ve gnotobiyotik Drosophila yükseltmek için protokol tarif ve tanıttı veya kontamine mikrobiyal takson varlığını teyit için.

<table><tbody><tr><td>Brewer&#039;s Yeast</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>903312</td><td>http://www.mpbio.com/product.php?pid=02903312</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158968-3KG</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/158968?lang=en&amp;amp;region=US</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher--Lab Scientific</td><td>fly802010</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/drosophila-agar-8-100mesh-10kg/nc9349177</td></tr><tr><td>Welch&#039;s 100% Grape Juice Concentrate</td><td>Walmart or other grocery store</td><td>9116196</td><td>http://www.walmart.com/ip/Welch-s-Frozen-100-Grape-Juice-Concentrate-11.5-oz/10804406</td></tr><tr><td>Cage: 32 oz. Translucent Round Deli Container</td><td>Webstaurant Store</td><td>999L5032Y</td><td>http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-sd5032y-32-oz-translucent-round-deli-container-24-pack/999L5032Y.html</td></tr><tr><td>Translucent Round Deli Container Lid</td><td>Webstaurant Store</td><td>999YNL500</td><td>http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-ynl500-translucent-round-deli-container-lid-60-pack/999YNL500.html</td></tr><tr><td>Stock Bottles</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-130</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=32-130</td></tr><tr><td>Droso-Plugs</td><td>Genesee Scientific</td><td>49-101</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=49-101</td></tr><tr><td>Nylon Mesh</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102&amp;nbsp;</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/715/?product=57-102</td></tr><tr><td>Plastic Bushing</td><td>Home Depot</td><td>100404002</td><td>http://www.homedepot.com/p/Carlon-1-in-Non-Metallic-Terminal-Adapter-E943FR-CTN/100404002</td></tr><tr><td>Plastic Bushing Cap</td><td>Home Depot</td><td>100153897</td><td>http://www.homedepot.com/p/1-1-4- in-Rigid-Plastic-Insulated-Bushing-2-Pack-27529/100153897</td></tr><tr><td>Specimen Cup</td><td>MedSupply Partners</td><td>K01-207067</td><td>http://www.medsupplypartners.com/covidien-specimen-containers.html</td></tr><tr><td>Repeater M4</td><td>Eppendorf</td><td>4982000322</td><td>https://online-shop.eppendorf.us/US-en/Manual-Liquid-Handling-44563/Dispensers--Burettes-44566/Repeater-M4-PF-44619.html</td></tr><tr><td>50 ml Centrifuge Tubes</td><td>TrueLine Centrifuge Tubes</td><td>TR2003</td><td>https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=TR2003</td></tr><tr><td>Food Boxes</td><td>USA Scientific</td><td>2316-5001</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=2316-5001</td></tr><tr><td>Lysing Matrix D Bulk</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>116540434</td><td>http://www.mpbio.com/search.php?q=6540-434&amp;amp;s=Search</td></tr><tr><td>Filter Pipette Tips, 300 &amp;mu;l</td><td>USA Scientific</td><td>1120-9810</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1120-9810</td></tr><tr><td>Petri Dishes</td><td>Laboratory Product Sales</td><td>M089303</td><td>https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=M089303</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Laboratories, INC.</td><td>2701</td><td>http://www.deconlabs.com/products.php?ID=88</td></tr><tr><td>Paintbrush</td><td>Walmart</td><td>5133</td><td>http://www.walmart.com/ip/Chenille-Kraft-5133-Acrylic-Handled-Brush-Set-Assorted-Sizes-colors-8-Brushes-set/41446005</td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fisher</td><td>08-882</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-medium-pointed-forceps-3/p-128693</td></tr><tr><td>Household Bleach (6-8% Hypochlorite)</td><td>Walmart</td><td>550646751</td><td>http://www.walmart.com/ip/Clorox-Concentrated-Regular-Bleach-121-fl-oz/21618295</td></tr><tr><td>Universal Peptone</td><td>Genesee Scientific</td><td>20-260</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=20-260</td></tr><tr><td>Yeast Extract</td><td>&amp;nbsp;Fisher Scientific</td><td>BP1422-500</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-bioreagents-microbiology-media-additives-yeast-extract-3/bp1422500?matchedCatNo=BP1422500</td></tr><tr><td>Dipotassium Phosphate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3786-1KG</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=P3786-1KG&amp;amp;interface=All&amp;amp;&lt;br/&gt;
N=0&amp;amp;mode=match%20partialmax&amp;amp;lang=&lt;br/&gt;
en&amp;amp;region=US&amp;amp;focus=product</td></tr><tr><td>Ammonium Citrate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>25102-500g</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=25102-500g&amp;amp;interface=All&amp;amp;N&lt;br/&gt;
=0&amp;amp;mode=match%20partialmax&amp;amp;lang=&lt;br/&gt;
en&amp;amp;region=US&amp;amp;focus=product</td></tr><tr><td>Sodium Acetate</td><td>VWR</td><td>97061-994</td><td>https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=97061-994</td></tr><tr><td>Magnesium Sulfate</td><td>Fisher Scientific</td><td>M63-500</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/magnesium-sulfate-heptahydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-3/m63500?matchedCatNo=M63500</td></tr><tr><td>Manganese Sulfate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10034-96-5</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=10034-96-5&amp;amp;interface=CAS%20No.&amp;amp;N=0&amp;amp;mode=match&lt;br/&gt;
%20partialmax&amp;amp;lang=en&amp;amp;region&lt;br/&gt;=US&amp;amp;focus=product</td></tr><tr><td>MRS Powder</td><td>Sigma Aldrich</td><td>69966-500G</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/69966?lang=en&amp;amp;region=US</td></tr><tr><td>96 Well Plate Reader</td><td>BioTek (Epoch)&amp;nbsp;</td><td>NA</td><td>http://www.biotek.com/products/microplate_detection/epoch_microplate_&lt;br/&gt;spectrophotometer.html</td></tr><tr><td>1.7 ml Centrifuge Tubes</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1615-5500</td></tr><tr><td>Filter Pipette Tips, 1,000 &amp;mu;l</td><td>USA Scientific</td><td>1122-1830</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1122-1830</td></tr><tr><td>96 Well Plates</td><td>Greiner Bio-One</td><td>655101</td><td>https://shop.gbo.com/en/usa/articles/catalogue/article/0110_0040_0120_0010/&lt;br/&gt;13243/</td></tr><tr><td>Ceramic Beads</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>6540-434</td><td>http://www.mpbio.com/product.php?pid=116540434</td></tr><tr><td>Tissue Homogenizer</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>116004500</td><td>http://www.mpbio.com/product.php?pid=116004500</td></tr><tr><td>Class 1 BioSafety Cabinet</td><td>Thermo Scientific&amp;nbsp;</td><td>Model 1395</td><td>http://www.thermoscientific.com/en/product/1300-series-class-ii-type-a2-biological-safety-cabinet-packages.html</td></tr></tbody></table>

rearing the fruit fly drosophila melanogaster under axenic and gnotobiotic conditions

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is a model for understanding microbial interactions with animal hosts, facilitated by approaches to rear large sample sizes of Drosophila under microorganism-free (axenic) conditions, or with defined microbial communities (gnotobiotic). This work outlines a method for collection of Drosophila embryos, hypochlorite dechorionation and sterilization, and transfer to sterile diet. Sterilized embryos are transferred to sterile diet in 50 ml centrifuge tubes, and developing larvae and adults remain free of any exogenous microbes until the vials are opened. Alternatively, flies with a defined microbiota can be reared by inoculating sterile diet and embryos with microbial species of interest. We describe the introduction of 4 bacterial species to establish a representative gnotobiotic microbiota in Drosophila. Finally, we describe approaches for confirming bacterial community composition, including testing if axenic Drosophila remain bacteria-free into adulthood.

Aksenik sinekler başarılı yetiştirme D. tüm vücut homogenizations hiçbir CFU izolasyonu ile doğrulanır melanogaster yetişkin (Şekil 1). Kaplanmış Homojenat kolonileri verimleri Alternatif olarak, eğer şişeler kontamine ve atılmalıdır. Gnotobiyotik sinekler için, dört bakteriyel izolatların her yetişkin sinekler (Şekil 1) ile ilişkili toplam canlı CFU farklılıkları gösteren, 5 yetişkin erkeklerin havuzları...

Watch this Scientific Journal Video about Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions at JoVE.com

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

Aksenik ve gnotobiyotik koşullarda Drosophila melanogaster yetiştirme için bir yöntem sunulmuştur. Fly embriyolar, sodyum hipoklorit dechorionated steril diyet aseptik transfer ve kapalı kaplarda yetiştirilir. Bakteri ile diyet ve embriyolar aşılamak gnotobiyotik dernekler yol açar ve bakteriyel varlığı tüm vücut Drosophila homojenatları kaplama ile teyit edilir.

Meyve Fly Yetiştirme<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Aksenik ve gnotobiyotik Koşullarında

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is ...

rearing-fruit-fly-drosophila-melanogaster-under-axenic-gnotobiotic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

21.0K Görüntüleme.  Brigham Young University.  Aksenik ve gnotobiyotik koşullarda Drosophila melanogaster yetiştirme için bir yöntem sunulmuştur. Fly embriyolar, sodyum hipoklorit dechorionated steril diyet aseptik transfer ve kapalı kaplarda yetiştirilir. Bakteri ile diyet ve embriyolar aşılamak gnotobiyotik dernekler yol açar ve bakteriyel varlığı tüm vücut Drosophila homojenatları kaplama ile teyit edilir. 

Video: Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

A Drosophila In Vivo Injury Model for Studying Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System

The regrowth capacity of damaged neurons governs neuroregeneration and functional recovery after nervous system trauma. Over the past few decades, various intrinsic and extrinsic inhibitory factors involved in the restriction of axon regeneration have been identified. However, simply removing these inhibitory cues is insufficient for successful regeneration, indicating the existence of additional regulatory machinery. Drosophila melanogaster, the fruit fly, shares evolutionarily conserved genes and signaling pathways with vertebrates, including humans. Combining the powerful genetic toolbox of flies with two-photon laser axotomy/dendriotomy, we describe here the Drosophila sensory neuron &#8211; dendritic arborization (da) neuron injury model as a platform for systematically screening for novel regeneration regulators. Briefly, this paradigm includes a) the preparation of larvae, b) lesion induction to dendrite(s) or axon(s) using a two-photon laser, c) live confocal imaging post-injury and d) data analysis. Our model enables highly reproducible injury of single labeled neurons, axons, and dendrites of well-defined neuronal subtypes, in both the peripheral and central nervous system.

A Drosophila In Vivo Injury Model for Studying Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System

Here, we present a protocol using the Drosophila sensory neuron - dendritic arborization (da) neuron injury model, which combines in vivo live imaging, two-photon laser axotomy/dendriotomy, and the powerful fly genetic toolbox, as a platform for screening potential promoters and inhibitors of neuroregeneration.

Neuroregeneration periferik ve santral sinir sistemi çalışmak için bir Vivo Drosophila yaralanma modeli

The regrowth capacity of damaged neurons governs neuroregeneration and functional recovery after nervous system trauma. Over the past few decades, various ...

Tıp

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

The use of unconventional models to study innate immunity and pathogen virulence provides a valuable alternative to mammalian models, which can be costly and raise ethical issues. Unconventional models are notoriously cheap, easy to handle and culture, and do not take much space. They are genetically amenable and possess complete genome sequences, and their use presents no ethical considerations. The fruit fly Drosophila melanogaster, for instance, has provided great insights into a variety of behavior, development, metabolism, and immunity research. More specifically, D. melanogaster adult flies and larvae possess several innate defense reactions that are shared with vertebrate animals. The mechanisms regulating immune responses have been mostly revealed through genetic and molecular studies in the D. melanogaster model. Here a novel larval injection technique is provided, which will further promote investigations of innate immune processes in D. melanogaster larvae and explore the pathogenesis of a wide range of microbial infections.

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

Drosophila melanogaster adult flies have been extensively utilized as model organisms to investigate the molecular mechanisms underlying host antimicrobial innate immune responses and microbial infection strategies. To promote the D. melanogaster larva stage as an additional or alternative model system, a larval injection technique is described.

Drosophila melanogaster Larva Enjeksiyon Protokolü

The use of unconventional models to study innate immunity and pathogen virulence provides a valuable alternative to mammalian models, which can be costly ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Neural Stem Cell Reactivation in Cultured Drosophila Brain Explants

Neural stem cells (NSCs) have the ability to proliferate, differentiate, undergo apoptosis, and even enter and exit quiescence. Many of these processes are controlled by the complex interplay between NSC intrinsic genetic programs with NSC extrinsic factors, local and systemic. In the genetic model organism, Drosophila melanogaster, NSCs, known as neuroblasts (NBs), switch from quiescence to proliferation during the embryonic to larval transition. During this time, larvae emerge from their eggshells and begin crawling, seeking out dietary nutrients. In response to animal feeding, the fat body, an endocrine organ with lipid storage capacity, produces a signal, which is released systemically into the circulating hemolymph. In response to the fat body-derived signal (FBDS), Drosophila insulin-like peptides (Dilps) are produced and released from brain neurosecretory neurons and glia, leading to downstream activation of PI3-kinase growth signaling in NBs and their glial and tracheal niche. Although this is the current model for how NBs switch from quiescence to proliferation, the nature of the FBDS extrinsic cue remains elusive. To better understand how NB extrinsic systemic cues regulate exit from quiescence, a method was developed to culture early larval brains in vitro before animal feeding. With this method, exogenous factors can be supplied to the culture media and NB exit from quiescence assayed. We found that exogenous insulin is sufficient to reactivate NBs from quiescence in whole-brain explants. Because this method is well-suited for large-scale screens, we aim to identify additional extrinsic cues that regulate NB quiescence versus proliferation decisions. Because the genes and pathways that regulate NSC proliferation decisions are evolutionarily conserved, results from this assay could provide insight into improving regenerative therapies in the clinic.

Neural Stem Cell Reactivation in Cultured Drosophila Brain Explants

A method to reactivate quiescent neural stem cells in cultured Drosophila brain explants has been established. Using this method, the role of systemic signals can be uncoupled from tissue-intrinsic signals in the regulation of neural stem cell quiescence, entry and exit.

Kültürlü Drosophila Beyin Eksplantlarında Nöral Kök Hücre Reaktivasyonu

Neural stem cells (NSCs) have the ability to proliferate, differentiate, undergo apoptosis, and even enter and exit quiescence. Many of these processes ...

Nörobilim

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life cycle of Drosophila enables collection of large quantities of material from embryos, larvae, pupae and adult flies, in a synchronized way, at a low economic cost. A major strategy for propagating large numbers of flies is the use of a fly population cage. This useful and common tool in the Drososphila community is an efficient way to regularly produce milligrams to tens of grams of embryos, depending on uniformity of developmental stage desired. While a population cage can be time consuming to set up, maintaining a cage over months takes much less time and enables rapid collection of biological material in a short period. This paper describes a detailed and flexible protocol for the maintenance of a Drosophila melanogaster population cage, starting with 1.5 g of harvested material from the previous cycle.

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

This manuscript reports a detailed protocol for culturing, on a regular basis, a population of Drosophila melanogaster using a fly population cage.

Bir bakımı<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Nüfus Kafes

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...

Biyoloji

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ecologically-important endpoints, though they are rarely considered in toxicological studies. D. melanogaster is emerging as a toxicology model for the behavioral, neurological, and genetic impacts of toxicants, to name a few. More importantly, species in the genus Drosophila can be utilized as a model system for an integrative framework approach to incorporate emergent properties and answer ecologically-relevant questions in&#160;toxicology research. The aim of this paper is to provide a protocol for exposing species in the genus Drosophila to pollutants to be used as a model system for a range of phenotypic outputs and ecologically-relevant questions. More specifically, this protocol can be used to 1) link multiple biological levels of organization and understand the impact of toxicants on both individual- and population-level fitness; 2) test the impact of toxicants at different stages of developmental exposure; 3) test multigenerational and evolutionary implications of pollutants; and 4) test multiple contaminants and stressors simultaneously.

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

In this paper, we provide a detailed protocol for exposing species in the genus Drosophila to pollutants with the goal of studying the impact of exposure on a range of phenotypic outputs at different developmental stages and for more than one generation.

Drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız Model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic infections, there has been a recent increase of interest in the mechanisms of gut immunocompetence to pathogens, which require methods to orally infect flies. Here we present a protocol to orally expose individual flies to an opportunistic bacterial pathogen (Pseudomonas aeruginosa) and a natural bacterial pathogen of D. melanogaster (Pseudomonas entomophila). The goal of this protocol is to provide a robust method to expose male and female flies to these pathogens. We provide representative results showing survival phenotypes, microbe loads, and bacterial shedding, which is relevant for the study of heterogeneity in pathogen transmission. Finally, we confirm that Dcy mutants (lacking the protective peritrophic matrix in the gut epithelium) and Relish mutants (lacking a functional immune deficiency (IMD) pathway), show increased susceptibility to bacterial oral infection. This protocol, therefore, describes a robust method to infect flies using the oral route of infection, which can be extended to the study of a variety genetic and environmental sources of variation in gut infection outcomes and bacterial transmission.

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

This protocol describes methods to orally expose and infect the fruit fly Drosophila melanogaster with bacterial pathogens, and to measure the number of infectious bacteria shed following gut infection. We further describe the effect of immune mutants on fly survival following oral bacterial infection.

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in practice, as adult flies fly. Demonstrated here is how to make some simple and cost-effective tools to address difficult issues in the handling of Drosophila. Holes in foam stoppers are made and pipette tips or funnels are inserted into the holes. Flies then move only in one direction into the pipette tip/funnel assemblage, allowing efficient control of the transfer of adult Drosophila into or out of a vial. Existing protocols have been modified for cool-anesthetizing flies by chilling in crushed ice and transferring them onto a cold, hard icepack surface. The icepack is covered with a piece of medical gauze that keeps immobilized flies from the condensed water when examined under a stereomicroscope. The flies are finally euthanized for counting and sorting or discarded by microwaving. A bottle-shaped cage has also been developed for collecting eggs, as well as a labor-saving device and accompanying protocol for cleaning glass culture vials.

Described here is the use of several homemade tools to transfer, chill, and kill adult Drosophila, as well as to clean glass culture vials and collect eggs. These tools are easy to make and are rather efficient in handling Drosophila.

Meyve sinekleri Işlemek için basit ev yapımı Araçlar-Drosophila melanogaster

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...

An Introduction to Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster, also known as the fruit fly, is a powerful model organism widely used in biological research that has made significant contributions to the greater scientific community over the last century. First, this video introduces the fruit fly as an organism, including its physical characteristics, life cycle, environment, and diet. Next, the reasons why fruit flies make an excellent model organism are discussed. For example, fruit flies are inexpensive to maintain in the laboratory, have simplified genetics, and short generation times allow for quick experiments with high sample numbers. Then, key discoveries and important Drosophila researchers, such as Thomas Hunt Morgan are profiled. Finally, applications of Drosophila research, ranging from genetics to cardiac and neurological development and disease, are provided. This video serves as an overview of the highly-important and influential model organism that is Drosophila melanogaster.

Drosophila melanogaster Fruit Fly as a Model Organism

Drosophila melanogaster, also known as the fruit fly, is a powerful model organism widely used in biological research that has made significant ...

Education

JoVE Science Education

Temel Biyoloji

Biyoloji I: Maya, Drosophila ve C. elegans

Drosophila Maintenance

Drosophila melanogaster, commonly known as fruit flies, are a frequently used model organism for life science research. Although starting a collection of these critters may seem as easy as leaving a banana on your kitchen counter for too long, a productive fly colony in the lab requires careful husbandry and maintenance.
This video demonstrates the necessary steps for maintaining a healthy fly stock. The overview begins with the preparation and storage of the yeast and sugar-containing media on which flies feed. Next, the vessels most commonly used for housing Drosophila are shown, as well as how and when to move flies between these containers. Finally, the presentation also includes examples of the ways in which housing and feeding conditions are manipulated for biological experiments.

Maintenance and Husbandry of Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster, commonly known as fruit flies, are a frequently used model organism for life science research. Although starting a collection of ...

Drosophila Egg Collection and Dechorionation: A Method to Remove the Outermost Egg Layer

Source: Koyle, M. L., et al. <a href="https://www.jove.com/video/54219/" target="_blank">Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions</a>. J. Vis. Exp. (2016).
The Drosophila embryo is surrounded by protective outer membranes. To gain access to the embryo, the chorion&#8211;the outermost of the membranes&#8211;is often removed. This video describes a commonly used method of dechorionation using sodium hypochlorite. The example protocol demonstrates the procedure while employing sterile techniques necessary for axenic or gnotobiotic animal rearing.

Drosophila Yumurta Toplama ve Dekoryonasyon: En Dıştaki Yumurta Tabakasını Çıkarmak İçin Bir Yöntem

Source: Koyle, M. L., et al. Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions. J. Vis. Exp. (2016).
The Drosophila ...

Meyve Fly Yetiştirme

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler