Farmakokinetik ve toksikokinetik çalışmalarda, ilaca maruz kalmayı tespit etmek için sıçanlarda belirli zaman noktalarında belirli miktarda kan toplamamız gerekir. Bu çalışmada, bu protokoldeki sıçanlarda subklaviyen damardan kan toplamak için basit ve etkili bir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik, anestezi olmadan tekrarlı, zamanında ve kolayca tanımlanabilir örnekleme sağlar ve tekrarlayan numune toplama yoluyla yüksek kaliteli kan elde eder.
Subklaviyen venin anatomisini, yetenekli sıçan kısıtlamasını ve iğne noktasını bilmelisiniz. Yöntem risklidir ve nitelikli bir profesyonel gerektirir. Başlamak için, subklaviyen üçgen fossa'nın boyun ve ön ayak arasındaki en düşük noktasını bir sıçanda bulun.
Başa doğru yaklaşık iki ila üç milimetre hareket ettirin ve kan alma bölgesindeki iğne noktasına ulaşın. Elektrikli tıraş makinesi kullanarak saçları çıkarın. Sıçanın başını, boynunu ve göğsünü dik tutmak için, boynun arkasındaki cildi bir elinizle kavrayın ve enjeksiyon bölgesini açığa çıkarın.
Seviyesini korumak için enjeksiyon bölgesinin yan tarafındaki ön ayağı düzeltin. Şırıngayı diğer elinizle sıçanın kafasına paralel tutun ve şırıngayı beş ila 10 derece dışa doğru eğin, böylece uç ventral yöne doğru eğilir. İğneyi tamamen ön boşluğa yerleştirin.
Tüp ile negatif basıncı korumak için şırıngayı geri çekin. İğneyi yavaşça derinlerden sığlığa doğru hareket ettirin ve aynı yolu yedekleyin. Şırınga iğnesine kan girdiğinde, iğnenin pozisyonunu sabitleyin.
Sıçanların ağırlığına ve sağlığına bağlı olarak, kurumun hayvan bakım ve kullanım komitesi tarafından belirlenen standartlara uygun olarak çekilecek maksimum kan miktarını izleyin. Diğer gereksinimlerin yokluğunda, hayvanın toplam kan hacminin% 20'sinden fazlasını 24 saat içinde çıkarmayın. Yeterli kan örneği toplandığında, derhal şırıngayı geri çekin ve kan tedavisine hazırlanın.
Kanamayı durdurmak için sıçanın enjeksiyon bölgesini bir ila iki dakika boyunca basınçlandırın. Toplama bölgesi boynun alt kısmında olduğundan, üzerine bastırarak kanamayı durdurmak için subklaviyen venin derisini sıkıştırın. İğneyi şırıngadan çıkarın ve keskin alet kabına atın.
Kanı yavaşça şırıngadan 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın. Kabarcık oluşumlarını önlemek için şırıngayı duvara bastırın. Mikrosantrifüj tüpünün kapağını kapatın ve hafifçe hafifçe kaydırın.
Kanı antikoagülanla en az beş kez baş aşağı çevirerek iyice karıştırın. Plazmayı topladıktan sonra 120 dakika içinde, tüm kan örneğini oda sıcaklığında 10 ila 15 dakika boyunca 2.000 RCF'de santrifüj yapın. Üst plazmayı taze bir mikrosantrifüj tüpüne aktarmak için bir pipet tabancası kullanın.
Pipet kafasına alt tam kan ile dokunmayın. Kırmızı kan hücreleri ile kontamine olmuş plazmayı atın veya yeniden santrifüj edin. Subklaviyen venden doğru olarak toplanan plazma örnekleri yarı saydam soluk sarıydı.
Yanlış kan toplanması veya manipülasyon hemoliz ile sonuçlandı. İlk örnekleme sırasında, erkek hayvanın vücut ağırlığı 268 ila 297 gram arasında ve dişiler için yaklaşık 214 ila 239 gram idi. Son örnekleme sırasında, erkek hayvanın vücut ağırlığı 376 ila 462 gram arasında ve dişiler için yaklaşık 254 ila 300 gram idi.
Toksikokinetik kan alımı arasında 28 günlük bir boşluk vardı. Hayvanın vücut ağırlığı her hafta istikrarlı bir şekilde arttı ve klinik gözlem normaldi. Hassas iğne yerleştirme yöntemi ve açısı, düzgün kan alımını sağlayabilir ve riskleri önleyebilir.
Bu işlem tekrarlanan uygulama gerektirir.
