Name: oral bacterial infection and shedding in drosophila melanogaster
Uploaded: 2018-05-31T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster at JoVE.com

Dokunulmazlık, enfeksiyon ve evrim (http://ciie.bio.ed.ac.uk; Hibe Başvuru no. 095831) için bu iş merkezi için Wellcome Trust stratejik bir ödülü tarafından desteklenmiştir. PFV Branco Weiss arkadaş grubu (https://brancoweissfellowship.org/) ve bir Başkan'ın bursu (Biyolojik Bilimler, University of Edinburgh) tarafından desteklenmiştir JASJ NERC E3 DTP doktora öğrencilik tarafından desteklenmiştir.

1. korumak sinekler
<ol><li>23 mL plastik şişeleri taze yapılmış Lewis orta 7 mL içeren sinekli korumak (başvuru31; modifiye 1 L üç kez distile H2O, 6.1 g agar, 93.6 g kahverengi şeker, 68 g Mısır, 18.7 g Instant Maya, 15 mL Tegosept anti-mantar ajan) İnkübatörler içinde 25 ± 1 ° C s açık: koyu bir 12 h:12 ~ %60 nem ile döngüsü. Emici olmayan Pamuk yün ile şişeleri takın.</li>
	<li>Her 14 gün sonra 20-30 yetişkin yeni bir gıda şişe için anlık, Kuru Maya yumurta döşeme-gerçekleşmesi izin vermek 2-3 gün için yüzeye eklendi aktarabilirsiniz. Bu süre sonunda yumurta gıda yüzeyinde görünür olduğundan emin olun. Yetişkin sinekler kaldırın. Not: Bu tek nesil nüfus yaş eşlemeli şişeleri sinekler tutar.</li>
	<li>Yumurta geliştirmek için bırakın. Not: 25 ° c, Yetişkin sinekler eclose için pupa gün 11 başlatın ve 12-14 gün içinde devam.</li>
</ol>2. deneysel sinekler hazırlayın
<ol><li>Maya Yapıştır formaya (mix Kuru Maya ile ile (1 L Üçlü distile H2O, 30 g agar, 33 g sükroz, 330 mL elma suyu, 7 mL Tegosept anti-mantar ajan) 75 mL elma-agar plaka üzerinde üst nesil yumurta bir nüfus/embriyo koleksiyonu kafeste toplamak «««su) bir fıstık ezmesi gibi tutarlılık. Suya batırılmış Pamuk yün nem sağlamak için kafes ekleyin. Not: larva yetiştirme yoğunluk farklılıkları kaynaklanan efektleri semptomlarıdır önlemek için bu farklı şişeleri deneysel sinekli benzer yoğunlukları yetiştirilen önemlidir. Yukarıda adım etkileri semptomlarıdır önlemek için gerçekleştirilir.</li>
	<li>12 h:12 h 25 ° C'de 24 h için kuluçkaya yumurta atarken oluştu kadar açık: koyu döngüsü. 24 saat sonra çok az yumurta varsa, daha uzun bir habituation süre sağlar. Elma-ağar kaplamalar değiştirin ve yumurta döşeme-daha fazla 24 h için gerçekleşmesi izin.</li>
	<li>Yumurta yüklü apple-ağar kaplamalar nüfus kafes al. Ağar'ın yüzeyindeki kalan Maya Yapıştır ve herhangi bir ölü sinekler çıkarmak.</li>
	<li>1 fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) x 20 ml agar daldırın ve yavaşça ince fırça ile elma agar yumurtadan çıkarmak. PBS içinde askıya iken, 50 mL santrifüj tüpü yumurta transferi, yumurta altına lavabo diye 5 min için bırak. Not: Çoğu yumurta agar dış kenarındaki bulunur.</li>
	<li>Alt p1000 süzülmüş pipet ucu 4 mm kesim tarafından kaldırmak ve pipet ucu 1 mL 50 mL santrifüj tüpü alttan alınan çözeltisi, çizmek için kullanın. Bu 1.5 mL microcentrifuge tüp aktarmak ve yerleşmek izin vermek. Not: yumurta pipetting zaman ek serbest dalgıç nazik bir yayın daha verimli olur.</li>
	<li>Alt p20 süzülmüş pipet ucu 4 mm kesim tarafından kaldırın. Pipet istenen bir ses ayarına ve microcentrifuge tüp alttan çizin. Not: uygulama ile 5 µL hacmi yaklaşık 100 yumurta içerir.</li>
	<li>Toplanan yumurtalar yemek üzerine dağıtmak ve gerekli süreyi için geliştirmek için bırakın.</li>
</ol>3. bakteri kültürü
<ol><li>P. entomophila ve P. aeruginosa kültürler büyümeye, Luria-Bertani (LB) suyu 10 mL 30 ° C'de donmuş bir bakteri stokunun 100 µL ile aşılamak (P. entomophila) ve 37 ° C (P. aeruginosa), anılan sıraya göre. 150 devir / dakikada gecede sallamak. Bakteriyel kültür doygunluk faz ulaştığından emin olmak.</li>
	<li>Sinekler aşı için kullanılan bakteri veya üssel faz ve hızlı bir şekilde çoğaltmak, gecede kültür yeni bir alt kültür istenen bir birimin, ertesi sabah aşılamak sağlamak için. Ön inoculum alt kültür kültür toplam hacminin % 10 olduğundan emin olun. Not: Oral enfeksiyon yüksek gerektirir. Bu nedenle böylece yeterli aşılama kültür istenilen doz ve deneysel boyut için üretilen bakteriyel kültürünün önemli bir birim genişletme gereklidir. Ne kadar alt kültür denklem MsVs kullanarak gerekli bulaşıcı dozlarda üretmek için gerekli hesaplamak burada bir kültür gösterir M MıVı, = optik yoğunluk temsil 600 nm (OD600) değeri ve V ölçülen'ın onun birim. Alt simge mektupları kültür bir alt kültür (s) veya bir bulaşıcı doz (i) olarak kullanılan için başvurun.</li>
	<li>Öyle ki alt kültür'ın yüzey (en az) sadece şişeye'nın yamaç başlangıç yukarıda düşüyor bu alt kültür bir birim bir 2 L konik şişesi içinde büyümek. Bakterilerin büyümesini dublör gibi bu işareti yukarıda doldurmayın.</li>
	<li>Bu alt kültür bakterilerde OD her 30 dk ölçerek üstel büyüme aşamasında olduğundan emin olun. Not: Bu nerede alt kültür 0.6-0.8 arasında bir OD600 ulaşır 3-5 h sonra oluşur.</li>
	<li>Bu alt kültür eşit miktarda santrifüj tüpleri arasında 50 mL dökün ve alt kültür 2500 x g 4 ° C'de bakteri cips için 15 dakika, spin. Pelleted bir zamanlar çıkarın ve sonra tekrar yukarıdaki koşulların bakteri büyük çoğunluğu kaldırılmasını onaylamak için süpernatant spin. Not: Bu bir Pelet ihmal edilebilir boyutta (1 mm içinde yükseklik küçüktür) doğrular.</li>
	<li>Onları yeniden 5 mL alt kültür süpernatant alınması ve bu çözümler tek 50 mL tüp içinde yeniden birleştirme tarafından ayrı tüpler bakteriyel granül birleştirin. 2500 x g 4 ° C'de bakteri cips için 15 dk için konsantre bu kültür spin.</li>
	<li>Süpernatant kaldırmak ve son bakteri Pelet %5 sükroz su çözümde yeniden askıya alma. OD kontrol edin ve istenen bulaşıcı doz için ayarlayın (OD600 = P. entomophila8 ve OD600 için 100 = 25 P. aeruginosa16,28), granül % 5'yeniden askıya sükroz su çözüm gerekli birim. Not: % 5 sükroz su solüsyonu eklenmesi gereken miktarda adım 3.2.1 denklemi kullanılarak hesaplanabilir (MsVs MıVı=).</li>
</ol>4. sözlü olarak sinekler bulaşmasını
<ol><li>Oral enfeksiyon emin olmak için (1 L üç kez distile H2O, 20 g agar, 84 g kahverengi şeker, 7 mL Tegosept anti-mantar ajan) standart agar şişeleri için sinekler aktararak sinekler için 2-4 h bakteri maruz önce açlıktan.</li>
	<li>Sinekler aç iken enfeksiyon tüpleri hazırlayın. Pseudomonas enfeksiyon şişe standart şeker agar pipetting 500 µL tarafından 7 mL örnek tüp kapağı yapmak ve kurumaya bırakın. Kapak filtre kağıdı bir disk yerleştirin ve doğrudan filtre disk üzerine bakteriyel kültürünün 100 µL pipet. Denetim enfeksiyonlar için bakteri kültürü %5 sükroz su çözüm filtre kağıt üzerinde aynı hacmi ile değiştirin.</li>
	<li>Tek sinekler için örnek tüp eklenir ve 18-24 h için bırakılır.</li>
	<li>Oral enfeksiyon onaylayın, ilk yüzey sterilize-sinekler hemen bakteriyel maruz kaldıktan sonra 100 µL % 70 etanol için 20-30 s. yerleştirerek etanol kaldırmak ve 100 Ekle Üçlü µL 20-30 s için su kaldırmadan önce distile su. 1 x PBS 100 µL ekleyin ve anında lunaparkçı.</li>
	<li>Homogenate bir 96-şey plaka üst satır için aktarmak ve her şey 1 x PBS 90 µL ekleyin.</li>
	<li>Seri olarak bir CFU aralığı değerleri ayırmak için bu örnek oranında seyreltin. Homogenate 10 µL üst kuyuda alıp bu de ekleyin. Bu ikinci şey, 10 µL üçüncü için de, aktarma işlemi tekrarlayın vb., gerektiği kadar çok seri dilutions için. Not: Bu önemli yeni pipet keyif dilutions her kümesi için kullanılır.</li>
	<li>Bütün damlacıklar ayrı kalır emin olmak için 5 µL damlacıkları bir LB besin agar tabakta seri dilutions plaka.</li>
	<li>LB ağar kaplamalar gecede 30 ° C ve 37 ° C de P. entomophila ve P. aeruginosa, sırasıyla kuluçkaya ve görünür CFUs saymak. Not: Drosophila gut mikroplar ayrı anaerobik büyüme koşulları gerektirirken, Seçmeli Orta, Pseudomonas yalıtım Orta (PIM) Örneğin, sadece Pseudomonas CFUs dikkate alınır emin olmak için kullanılabilir.</li>
	<li>CFUs sayısını sinek başı nerede 10-60 CFUs açıkça görülebilir koloniler seri seyreltme mevcut sayısını sayarak hesaplayın. Sonra sinek başı bakteri sayısını hesaplamak için mevcut seyreltme faktörle çarpmak.</li>
	<li>İstatistiksel çözümleme gerçekleştirme. Gerektiğinde, bir normal dağılım için sinek başı CFUs dönüşümü. Günlük-dönüştürme tarafından bunu. Dönüşüm sonra Genelleştirilmiş Doğrusal modeller (GLMs)30,31,32 nasıl tedavi grupları (R33gibi yaygın olarak bulunan istatistiksel yazılım paketlerini kullanarak) sinek başı CFUs içinde farklı sınamak için kullanın. Not: Kalan sinek homogenate gen ekspresyonu kantitatif Ters transkripsiyon PCR (RT-qPCR) analizi ile ölçmek için kullanılabilir. Homogenate RNA izolasyon reaktif 50 µL içinde düzeltmek, RNA ayıklamak ve RT-qPCR tarafından belirli bir bağışıklık gen titreleri ölçmek ( Örneğin, bkz: Gupta ve Vale16 detaylı bir iletişim kuralı için). Belirli bir bağışıklık gen transkript ifade bir temizlik gen (Örneğin, rp49) transkript düzeyleri için normalleştirilmiş ve bir kat 2−ΔΔCt yöntemi31kullanarak denetim sinekler göre değiştikçe ifade, 32,33,34.</li>
</ol>5. kayıt yaşayanlar enfeksiyon takip
<ol><li>4.2. adımda açıklandığı gibi sözlü olarak sinekler bulaştırmak.</li>
	<li>Enfekte aktarmak veya standart Lewis şişeleri ve koyu bir kuluçka 12 h:12 h 25 ° C'de tutmak içine onların anılan sıraya göre enfeksiyon tüpleri üzerinden kontrol sinekler döngüsü (veya koşulları istenilen). Onlar ölene uçar tutun.</li>
	<li>Ölü ya da diri sinekler her şişe her gün veya gerektiği gibi sık sık olarak saymak.</li>
	<li>Sinekler için yeni şişeleri getting şaşırıp kalmış içinde gıda sinekler önlemek için her 5 günde aktarın.</li>
	<li>Kaplan-Meier (KM) hayatta kalma eğrileri olarak bu veri mevcut veya ± SE orantılı hayatta kalma araziler demek. Analiz etmek için çeşitli faktörler ve/veya ilgili ilişkileri bir diğeriyle etkisini kullanın istatistik paketi (örneğin, paket R33"hayatta kalma") sağkalım Analizi Cox orantılı tehlikeler modeli35gibi çalıştırmak için.</li>
</ol>6. ölçüm bakteri yükü
<ol><li>İstenen saat noktada, tek bir virüslü sinek bir steril 1.5 mL microcentrifuge tüp aktarın.</li>
	<li>Yüzey 4.4 adımda anlatıldığı gibi sinekler sterilize et.</li>
	<li>Anında homojenize ve açıklanan adımları 4.5-4,10 protokolü kullanarak bakteriyel yük ölçmek.</li>
</ol>7. ölçü bakteri dökülme
<ol><li>Dahili yük dökülme ölçmek.</li>
	<li>Enfeksiyon sonra 1.5 mL microcentrifuge tüpler ~ 50 µL Lewis orta 24 h için içeren tek sinek aktarın.</li>
	<li>Dahili yük ölçümü için sinekler kaldırmak (bkz. Adım 6) ve 1 x PBS 100 µL tüplerini vortexing ağır için 3 tarafından yıkayın s.</li>
	<li>Bu yıkama CFUs LB besin agar 4.6-4,8 adımlarda açıklandığı gibi aynı iletişim kuralını kullanarak üzerine kaplama tarafından ölçmek.</li>
	<li>Enfeksiyon sonra 1.5 mL microcentrifuge tüpler ~ 50 µL Lewis orta 24 h için içeren tek sinek aktarın.</li>
	<li>Sinekler ~ 50 µL Lewis orta daha fazla 24 h yıkama için içeren yeni microcentrifuge Tüpler 1 x PBS 100 µL kirlenmiş tüplerini vortexing ağır için 3 tarafından transfer s.</li>
	<li>Bu yıkama CFUs tarafından açıklanan adımları 4.6-4,8 aynı iletişim kuralını kullanarak LB besin agar üzerine kaplama ölçmek.</li>
	<li>7.2 ve 7.3 ve kayıt uçmak ölüm her aktarma, adımları yineleyin.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Hoffmann, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+of+Drosophila.">The immune response of Drosophila.</a> Nature. 426 (6962), 33-38 (2003).</li><li>Buchon, N., Silverman, N., Cherry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+in+Drosophila+melanogaster+-+from+microbial+recognition+to+whole-organism+physiology.">Immunity in Drosophila melanogaster - from microbial recognition to whole-organism physiology.</a> Nat Rev Immunol. 14 (12), 796-810 (2014).</li><li>Bergman, P., Seyedoleslami Esfahani, S., Engstr&#246;m, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+Model+for+Human+Diseases-Focus+on+Innate+Immunity+in+Barrier+Epithelia.">Drosophila as a Model for Human Diseases-Focus on Innate Immunity in Barrier Epithelia.</a> Curr Top Dev Biol. 121, 29-81 (2017).</li><li>Apidianakis, Y., Rahme, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+as+a+model+host+for+studying+Pseudomonas+aeruginosa+infection.">Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection.</a> Nat Protoc. 4 (9), 1285-1294 (2009).</li><li>Khalil, S., Jacobson, E., Chambers, M. C., Lazzaro, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+Bacterial+Infection+and+Immune+Defense+Phenotypes+in+Drosophila+Melanogaster.">Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster.</a> JoVE J Vis Exp. (99), e52613-e52613 (2015).</li><li>Neyen, C., Bretscher, A. J., Binggeli, O., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+to+study+Drosophila+immunity.">Methods to study Drosophila immunity.</a> Methods San Diego Calif. 68 (1), 116-128 (2014).</li><li>Nehme, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Model+of+Bacterial+Intestinal+Infections+in+Drosophila+melanogaster.">A Model of Bacterial Intestinal Infections in Drosophila melanogaster.</a> PLOS Pathog. 3 (11), e173 (2007).</li><li>Bou Sleiman, M. S., Osman, D., Massouras, A., Hoffmann, A. A., Lemaitre, B., Deplancke, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic,+molecular+and+physiological+basis+of+variation+in+Drosophila+gut+immunocompetence.">Genetic, molecular and physiological basis of variation in Drosophila gut immunocompetence.</a> Nat Commun. 6, 7829 (2015).</li><li>Buchon, N., Broderick, N. A., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+homeostasis+in+a+microbial+world:+insights+from+Drosophila+melanogaster.">Gut homeostasis in a microbial world: insights from Drosophila melanogaster.</a> Nat Rev Microbiol. 11 (9), 615-626 (2013).</li><li>Kuraishi, T., Hori, A., Kurata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-microbe+interactions+in+the+gut+of+Drosophila+melanogaster.">Host-microbe interactions in the gut of Drosophila melanogaster.</a> Front Physiol. 4, (2013).</li><li>Ha, E. -. M., Oh, C. -. T., Bae, Y. S., Lee, W. -. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Direct+Role+for+Dual+Oxidase+in+Drosophila+Gut+Immunity.">A Direct Role for Dual Oxidase in Drosophila Gut Immunity.</a> Science. 310 (5749), 847-850 (2005).</li><li>Limmer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+RhlR+is+required+to+neutralize+the+cellular+immune+response+in+a+Drosophila+melanogaster+oral+infection+model.">Pseudomonas aeruginosa RhlR is required to neutralize the cellular immune response in a Drosophila melanogaster oral infection model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (42), 17378-17383 (2011).</li><li>Apidianakis, Y., Pitsouli, C., Perrimon, N., Rahme, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy+between+bacterial+infection+and+genetic+predisposition+in+intestinal+dysplasia.">Synergy between bacterial infection and genetic predisposition in intestinal dysplasia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (49), 20883-20888 (2009).</li><li>Vodovar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+host+defense+after+oral+infection+by+an+entomopathogenic+Pseudomonas+species.">Drosophila host defense after oral infection by an entomopathogenic Pseudomonas species.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (32), 11414-11419 (2005).</li><li>Chugani, S. A., Whiteley, M., Lee, K. M., D'Argenio, D., Manoil, C., Greenberg, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=QscR,+a+modulator+of+quorum-sensing+signal+synthesis+and+virulence+in+Pseudomonas+aeruginosa.">QscR, a modulator of quorum-sensing signal synthesis and virulence in Pseudomonas aeruginosa.</a> Proc Natl Acad Sci. 98 (5), 2752-2757 (2001).</li><li>Gupta, V., Vasanthakrishnan, R. B., Siva-Jothy, J., Monteith, K. M., Brown, S. P., Vale, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+route+of+infection+determines+Wolbachia+antibacterial+protection+in+Drosophila.">The route of infection determines Wolbachia antibacterial protection in Drosophila.</a> Proc R Soc B. 284 (1856), 20170809 (2017).</li><li>Martins, N. E., Faria, V. G., Teixeira, L., Magalh&#227;es, S., Sucena, &. #. 2. 0. 1. ;. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+Adaptation+Is+Contingent+upon+the+Infection+Route+Taken+by+Pathogens.">Host Adaptation Is Contingent upon the Infection Route Taken by Pathogens.</a> PLoS Pathog. 9 (9), (2013).</li><li>Chambers, M. C., Jacobson, E., Khalil, S., Lazzaro, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thorax+Injury+Lowers+Resistance+to+Infection+in+Drosophila+melanogaster.">Thorax Injury Lowers Resistance to Infection in Drosophila melanogaster.</a> Infect Immun. 82 (10), 4380-4389 (2014).</li><li>Gupta, V., Stewart, C., Rund, S. S., Monteith, K., Vale, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Costs+and+benefits+of+sublethal+Drosophila+C+virus+infection.">Costs and benefits of sublethal Drosophila C virus infection.</a> J Evol Biol. , (2017).</li><li>Ferreira, &. #. 1. 9. 3. ;. G., Naylor, H., Esteves, S. S., Pais, I. S., Martins, N. E., Teixeira, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Toll-Dorsal+Pathway+Is+Required+for+Resistance+to+Viral+Oral+Infection+in+Drosophila.">The Toll-Dorsal Pathway Is Required for Resistance to Viral Oral Infection in Drosophila.</a> PLoS Pathog. 10 (12), (2014).</li><li>Buchon, N., Broderick, N. A., Poidevin, M., Pradervand, S., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+Intestinal+Response+to+Bacterial+Infection:+Activation+of+Host+Defense+and+Stem+Cell+Proliferation.">Drosophila Intestinal Response to Bacterial Infection: Activation of Host Defense and Stem Cell Proliferation.</a> Cell Host Microbe. 5 (2), 200-211 (2009).</li><li>Wayland, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spotting+the+differences:+Probing+host/microbiota+interactions+with+a+dedicated+software+tool+for+the+analysis+of+faecal+outputs+in+Drosophila.">Spotting the differences: Probing host/microbiota interactions with a dedicated software tool for the analysis of faecal outputs in Drosophila.</a> J Insect Physiol. 69, 126-135 (2014).</li><li>Hori, A., Kurata, S., Kuraishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unexpected+role+of+the+IMD+pathway+in+Drosophila+gut+defense+against+Staphylococcus+aureus.">Unexpected role of the IMD pathway in Drosophila gut defense against Staphylococcus aureus.</a> Biochem Biophys Res Commun. 495 (1), 395-400 (2018).</li><li>Ren, C., Webster, P., Finkel, S. E., Tower, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Internal+and+External+Bacterial+Load+during+Drosophila+Aging+without+Life-Span+Trade-Off.">Increased Internal and External Bacterial Load during Drosophila Aging without Life-Span Trade-Off.</a> Cell Metab. 6 (2), 144-152 (2007).</li><li>Ezenwa, V. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+behaviour-parasite+feedback:+an+essential+link+between+animal+behaviour+and+disease+ecology.">Host behaviour-parasite feedback: an essential link between animal behaviour and disease ecology.</a> Proc R Soc B. 283 (1828), 20153078 (2016).</li><li>McCallum, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+beta:+deconstructing+the+parasite+transmission+function.">Breaking beta: deconstructing the parasite transmission function.</a> Phil Trans R Soc B. 372 (1719), 20160084 (2017).</li><li>Vale, P. F., Choisy, M., Little, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+nutrition+alters+the+variance+in+parasite+transmission+potential.">Host nutrition alters the variance in parasite transmission potential.</a> Biol Lett. 9 (2), 20121145 (2013).</li><li>Mulcahy, H., Sibley, C. D., Surette, M. G., Lewenza, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+as+an+Animal+Model+for+the+Study+of+Pseudomonas+aeruginosa+Biofilm+Infections+In+Vivo.">Drosophila melanogaster as an Animal Model for the Study of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections In Vivo.</a> PLoS Pathog. 7 (10), e1002299 (2011).</li><li>Kuraishi, T., Binggeli, O., Opota, O., Buchon, N., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+evidence+for+a+protective+role+of+the+peritrophic+matrix+against+intestinal+bacterial+infection+in+Drosophila+melanogaster.">Genetic evidence for a protective role of the peritrophic matrix against intestinal bacterial infection in Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci. 108 (38), 15966-15971 (2011).</li><li>Myllym&#228;ki, H., Valanne, S., R&#228;met, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+Imd+Signaling+Pathway.">The Drosophila Imd Signaling Pathway.</a> J Immunol. 192 (8), 3455-3462 (2014).</li><li>Lewis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+standard+food+medium.">A new standard food medium.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (9), pdb.rec081414 (2014).</li><li>Bolker, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generalized+linear+mixed+models:+a+practical+guide+for+ecology+and+evolution.">Generalized linear mixed models: a practical guide for ecology and evolution.</a> Trends Ecol Evol. 24 (3), 127-135 (2009).</li><li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> R: A Language and Environment for Statistical Computing. , (2015).</li><li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+CT+method.">Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method.</a> Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).</li><li>Kalbfleisch, J. D., Prentice, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Statistical Analysis of Failure Time Data. , (2002).</li><li>. Drosophila melanogaster, drawing.SVG Available from: <a target="_blank" href="https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Drosophila-drawing.svg">https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Drosophila-drawing.svg</a> (2007)</li><li>. Example of a survival curve estimated by Kaplan-Meier method including 95% confidence limits Available from: <a target="_blank" href="https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Kaplan-Meier-sample-plot.svg">https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Kaplan-Meier-sample-plot.svg</a> (2011)</li><li>Susi, H., Vale, P. F., Laine, A. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+Genotype+and+Coinfection+Modify+the+Relationship+of+within+and+between+Host+Transmission.">Host Genotype and Coinfection Modify the Relationship of within and between Host Transmission.</a> Am Nat. 186 (2), 252-263 (2015).</li><li>Fellous, S., Duncan, A. B., Quillery, E., Vale, P. F., Kaltz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+influence+on+disease+spread+following+arrival+of+infected+carriers.">Genetic influence on disease spread following arrival of infected carriers.</a> Ecol Lett. 15 (3), 186-192 (2012).</li></ol>

Biz güvenilir bir şekilde sözlü olarak D. melanogaster bakteriyel patojenler ile hastalık için bir iletişim kuralı mevcut. Biz P. aeruginosa ve P. entomophilaodaklanmak, ama bu protokolü kolayca diğer bakteriyel türler Örneğin, Serratia marcescens7. enfeksiyonu etkinleştirmek için adapte edilebilir Bu iletişim kuralının temel yönlerini bakteriyel türler arasında değişir. Buna göre en verimli bulaşıcı doz, karşılık gelen virülans ve ana genotip duyarlılık tüm kabul ve ideal olarak test pilot çalışmalar. Optik yoğunlukları çeşitli bakteri kültürleri uçmaktadır teşhir ve onların bulaşıcı doz ve hayatta kalma ölçme yeni bakteriyel türler veya sinek hatları ile çalışırken uygun bir başlangıç noktası olabilir.
İletişim kuralı adımları gibi açlık besleme önce sinek ve yeniden askıya bakteriyel granül %5 sükroz çözümde oral enfeksiyon sıradan ve pozlama7,8, sırasında bakteriyel enfeksiyon güvenilirliğini artırmak 9 , 10. ancak, pozlama sırasında sinekler aslında bakteri kültürü bir yüzey üzerinde yaşamak unutmamak önemlidir. Bu kültür üzerinde yürüme sürecinde, bakteri sinek 's yüzeyi, özellikle manikür veya çevresinde kıllar24teslim olmak. Epicuticular bu bakteri, başarılı bir enterik enfeksiyon yansıtmıyor ama hala sinek homojenizasyon ve kaplama tarafından algılanan. Yanlış pozitif olasılığını azaltmak için o yüzeye esastır sinekler % 70 etanol için 1 dakikaya kadar daldırma yoluyla sterilize.
Oral enfeksiyon bakteri dökülme oranları dikkate alınarak, esastır. Bir ana bilgisayar ortamına bültenleri patojenler sayısı genellikle ölçmek zordur ve dahili yük kez enfeksiyon ve bu nedenle iletim26,27şiddeti için bir proxy olarak kabul edilir. Bakteri dökülme yanında ölçüm bakteri yükü incelenmesi hastalığın şiddeti ve yaymak38bu iki önemli bileşenleri arasında ilişki sağlar. Yöntemi sunulan bir sınırlama sinekler iç bakteri yükünü raporlaması yıkıcı örnekleme gerektirmesidir. Bu zor uzunlamasına eğilimleri patojen büyüme ve izni aynı birey içinde araştırmak yapar. Ancak, ortalama mikrop yükü her kohort boyuna patojen dynamics verilen herhangi içinde yansıtır varsayımı altında enfeksiyon farklı aşamalarında bireylerin destructively örnekleme kohortlardan tarafından bu sınırlamayı aşmak mümkündür bireysel. Bakteri dökülme aynı kısıtlamalarla acı değil ve biz nasıl dökülme kesitsel bir örnek veya boyuna nasıl dökülme içinde tek bir zaman içerisinde değişen araştırmak için sayısal örnekleri sunuyoruz.
Birçok ev sahibi ve patojen özelliği ortaklaşa hastalık25,26,39iletimi için bireyin eğilimi belirlemek. Bu özellikler büyük olasılıkla önemi ana bilgisayar-patojen sistemleri arasında değişir, dökülme büyük olasılıkla önemli bir belirleyici fekal-oral iletim iken. Bakteri dökülme ölçmek için yetenek bu varsayımı test etme olanağı açar. Ana bilgisayar-patojen dynamics sinek satırlarının istenen bir panel ile karakterize, Denemecileri sözlü olarak bireyler bulaştırmak ve bulaşmamış, duyarlı ev sahibi bulaşıcı kendi dönemlerinde koyun. 'Alıcı' Bu sinekler sonra doğrudan iletim ölçmenin bir yolu olarak çeşitli zaman noktalarda iç bakteriyel yük denetlesinler.

Meyve sineği (sirke sineği olarak da bilinir) D. melanogaster, kapsamlı bir model organizma enfeksiyon ve patojenler1,2çeşitli karşı bağışıklık için kullanılmıştır. Bu eser enfeksiyon fizyolojik sonuçlarını temel anlayışlar teklif etti ve ayrıca konak immün yanıt parasitoid, bakteriyel, fungal ve viral enfeksiyonlara karşı temel moleküler yolları çözülüyor öncü oldu. Bu bilgi sadece doğuştan gelen bağışıklık yanıtı böcek ve diğer omurgasızlar anlamak yararlı değil, ama çünkü birçok bağışıklık mekanizmaları örümceklerle böcekler ve memeliler arasında korunmuş, Drosophila de keşif mahmuzlu vardır büyük bağışıklık mekanizmaları memelilerde, insanlar3dahil.
Çoğu çalışma Drosophila enfeksiyon ve Dokunulmazlık patojenler doğrudan böcek gövdesine iğneleyici veya enjeksiyon4,5,6tarafından teslim aşılama yöntemleri kullanarak sistemik enfeksiyonlar odaklanmıştır. Bu yöntemler içinde kontrollü bir bulaşıcı doz teslimini bırakmak açık ve sistemik enfeksiyonlar çalışmalarına büyük bir vücut tarafından desteklenen avantajdır. Ancak, birçok doğal olarak meydana gelen bakteriyel patojenler D. melanogaster , organik madde nerede gut immunocompetence konak savunma7,8', önemli bir rol oynamaktadır çürüyen besleme yoluyla iktisap 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15. sistemik enfeksiyonlar istihdam deneyler bu savunma yan yol ve, bu nedenle, nasıl doğal patojenlere karşı savunma böcekler mount tamamen farklı bir resim sağlar. Bu çalışmanın amacı, ekoloji ve evrim enfeksiyon, hakkında tahminler test etmek doğal patojenler kullanımı ve yolları enfeksiyonunun önemli16,17nerede olduğunu özellikle uygundur. Son çalışmaları önemli ölçüde patojenler tarafından izlenen yolu hastalığı sonucu18,19etkilemesi vurgulanmış bulunmaktadır, farklı bağışıklık yolları20,21aydınlığa çıkartıyor, koruyucu etkisini belirlemek için Endosymbionts16miras ve hatta oyun ana savunma17gelişiminde önemli bir rol olabilir.
Sözlü yolları enfeksiyonu istihdam için bir başka neden bu varyasyon incelenmesi patojen iletimde bakteri dışkı atılımı oral enfeksiyon22,23, takip sırasında shedding ölçerek sağlanmıştır 24. hastalık iletim ana bilgisayar heterojenlik kaynaklarının anlama doğal nüfus25,26yılında zorlu, ancak iletim, patojen, altında kontrollü laboratuvar dökülme gibi bileşenleri ölçme koşulları yararlı alternatif yaklaşım27sağlamaktadır. Besleme sinekler bakteri ve ölçüm bakteriyel altında kontrollü deneysel koşullar genetik ve çevresel bağlamlarda çeşitli dökülme, iletim ana bilgisayarları arasında varyasyon kaynakları tanımlamak mümkündür.
Burada, biz sözlü olarak D. melanogaster bakteriyel patojenler ile hastalık için bir iletişim kuralı tanımlamak ve bakteriyel büyüme miktarının ve dökülme için bu (Şekil 1) izler. Biz bu protokol üzerinde iki Pseudomonas bakterileri tarif: zehirli bir fırsatçı patojen P. aeruginosa (PA14) suşu ve doğal patojen P. entomophilasinek daha az öldürücü bir tür. Psödomonadlar böcekler, nematod, bitkiler ve omurgalı, hastalık bir geniş ana bilgisayar aralığıyla ortak Ayagin Gram-negatif bakteriler ve çoğu ortamlarda4,6'. Drosophila P. aeruginosa ve P. entomophila tarafından enterik enfeksiyon patolojisi bağırsak epiteli12,13,14,-15sonuçları, 28. Biz bu iki bakteriyel patojenler üzerinde odaklanmak iken, yöntem tanımlamak burada prensip olarak küçük değişiklikler ile ilgi herhangi bir bakteriyel pathogen uygulanabilir. Sözlü pozlama, biz sonrası enfeksiyon hayatta kalma ölçmek ve bireysel sinek içinde mikrop yükü ölçmek ve birimleri (CFUs) oluşturan colony ifade ortamına uygun mikroplar döken. Çünkü bağırsak immunocompetence epitel bariyer ve humoral yanıt bir arada gelen sonuçlar, son olarak, aynı zamanda sinek satırları nerede bu savunma kesintiye yaşama ölçeriz. Özellikle, Drosocrystallin (Dcy) mutantlar daha önce gösterilmiştir sözlü bakteriyel enfeksiyon nedeniyle tükenmiş peritrophic matris29gut daha duyarlı olmak. Ayrıca hayatta kalma yolu ile IMD yolu30gram-negatif bakteri karşı antimikrobiyal peptidler üreten engellemiştir bir çeşni (Rel) mutant ölçüyoruz.

<table><tbody><tr><td>Vials</td><td>Sarstedt Ltd.</td><td>58.490</td><td>Polystyrene flat base tube 75mm x 23.5mm, 23ml</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7002</td><td>Agar, ash 2.0-4.5%</td></tr><tr><td>Brown sugar</td><td>Bidvest</td><td>66032</td><td>Light brown soft sugar</td></tr><tr><td>Maize</td><td>Dove&#039;s Farm</td><td></td><td>Organic maize flour</td></tr><tr><td>Fermipan yeast</td><td>Bidvest</td><td>96360</td><td>Dry, instant yeast</td></tr><tr><td>Methyl-4-hydroxybenzoate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H5501</td><td>&gt;=99.0%, crystalline</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>84097</td><td>Sucrose BioUltra, for molecular biology, &gt;=99.5% (HPLC)</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td>Fisher Scientific UK Ltd.</td><td>15788517</td><td>X600 Petri Dish 90 X 16.2MM Sterile Triple Vent</td></tr><tr><td>Falcon tubes (50ml)</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>210261</td><td>Centrifuge tube, 50ml, skirted, bagged, sterile</td></tr><tr><td>Eppendorf tube (0.5ml)</td><td>Sarstedt Ltd.</td><td>72.699</td><td>Sarstedt Micro Tube Conical Base Push Cap 0.5ml Standard Neutral</td></tr><tr><td>Eppendorf tube (1.5ml)</td><td>Sarstedt Ltd.</td><td>72.690.001</td><td>Sarstedt Micro Tube Conical Base Push Cap 1.5ml Standard Neutral</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>VWR International Ltd.</td><td>20821.33</td><td>ETHANOL ABSOLUTE ANALAR NP ACS/R.PE - Analytical Grade</td></tr><tr><td>2 L Conical Flask</td><td>VWR International Ltd.</td><td>214-0038</td><td>Narrow neck, 2 L Erlenmeyer flask</td></tr><tr><td>Sterile filter paper</td><td>Fisher Scientific UK Ltd.</td><td>1001-020</td><td>Plain circle and sheets; Particle Retention: greater than11um; Filtration speed: 150 herzberg; Air flow: 10.5s/100mL/in2; Medium porosity; Smooth surface; Grade 1; Type: circle; Dia: 20mm</td></tr><tr><td>Bijou sample container</td><td>Fisher Scientific UK Ltd.</td><td>129A</td><td>7ml polystyrene sample container</td></tr><tr><td>Pseudomonas isolation agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>17208</td><td>Contains agar 13.6 g/L, magnesium chloride 1.4 g/L, peptic digest of animal tissue 20g/L, potassium sulfate 10g/L, triclosan 0.025g/L</td></tr><tr><td>LB broth, Miller</td><td>Fisher Scientific UK Ltd.</td><td>BP1426</td><td>Contains 10g tryptone, 5g yeast extract, 10g sodium chloride per litre</td></tr><tr><td>Large Embryo Collection Cages</td><td>Scientific Laboratory Supplies Ltd.</td><td>59-101</td><td>Flystuff- fits 100mm petri dish</td></tr><tr><td>TRI reagent solution</td><td>Life Technologies</td><td>AM9738</td><td></td></tr><tr><td>96-well microplate</td><td>Scientific Laboratory Supplies Ltd.</td><td>353072</td><td>Falcon 96 Well Clear Flat Bottom TC-Treated Polystyrene Cell Culture Microplate with Lid Sterile</td></tr><tr><td>Pestle</td><td>Fisher Scientific UK Ltd</td><td>12649595</td><td>Pestle, Presterilized; Axygen; Tissue grinder; Blue; Inert polypropylene construction; Fits 1.5 and 2.0mL centrifuge tubes; Individually wrapped; 100/Pk</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Scientific Laboratory Supplies Ltd.</td><td>CHE2068</td><td>Glycerol A.R. 99.5% 2.5 L</td></tr><tr><td>Cotton wool- non absorbent</td><td>Cowens Ltd</td><td>ABL</td><td>Non Absorbent Large quantity 20 bags x 500</td></tr><tr><td>Cotton wool- absorbent</td><td>Cowens Ltd</td><td>ABS</td><td>BP small quantity 20 bags x 500</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Fisherbrand</td><td></td><td>Whirlimixer 75W 50-6-Hz 220-240V</td></tr><tr><td>Orbital incubator</td><td>Gallenkamp</td><td>INR-200-010V</td><td>220 V, 50 Hz, 5 A. Nominal temperature: 70&amp;ordm;C. Shaking frequency: 0...400 rpm.</td></tr><tr><td>Absorbance Microplate Reader</td><td>Biotek Instruments Ltd</td><td></td><td>ELx808&amp;trade; Absorbance Microplate Reader</td></tr><tr><td>Gen 5 Microplate Reader and Imager Software</td><td>Biotek Instruments Ltd</td><td></td><td>For Absorbance Microplate Reader</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>392304</td><td>Allegra X-12R Benchtop Centrifuge, refridgerated 50Hz 230V</td></tr><tr><td>Step One Plus Real Time qPCR System</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>4376600</td><td>Applied biosystems Step One Plus real time qPCR system</td></tr><tr><td>Step One Software 2.3</td><td>Thermofisher Scientific</td><td></td><td>For Stepone and SteponePlus real time qPCR systems</td></tr><tr><td>R Statistical Software</td><td>https://cran.r-project.org/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 &amp;micro;L pipette tips</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>741015</td><td>Easlyload gilson-style. Graduated, clear, refill, 960 pcs</td></tr><tr><td>200 &amp;micro;L pipette tips</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>741065</td><td>Easlyload gilson-style. Graduated, clear, refill, 960 pcs</td></tr><tr><td>1000 &amp;micro;L pipette tips</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>741045</td><td>Easlyload gilson-style. Graduated, clear, refill, 960 pcs</td></tr><tr><td>20 &amp;micro;L filtered pipette tips</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>774288</td><td>Filter tip gilson-style. Clear, rack blue, single packed, R/Dnase free, 10 racks of 96pcs</td></tr><tr><td>200 &amp;micro;L filtered pipette tips</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>739288</td><td>Filter tip gilson-style. Clear, rack blue, single packed, R/Dnase free, 10 racks of 96pcs</td></tr><tr><td>1000 &amp;micro;L filtered pipette tips</td><td>Greiner Bio-one Inc</td><td>740288</td><td>Filter tip gilson-style. Clear, rack blue, single packed, R/Dnase free, 10 racks of 60pcs</td></tr></tbody></table>

oral bacterial infection and shedding in drosophila melanogaster

Meyve sineği Drosophila melanogaster enfeksiyon ve doğuştan gelen bağışıklık en gelişmiş modeli sistemlerinden biridir. Çoğu iş sistemik enfeksiyonlar üzerinde odaklanmıştır iken, gut immunocompetence sözlü olarak sinekler bulaştırmak için yöntemler gerektirir patojenlere mekanizmaları ilgi son bir artış olmuştur. Burada sözlü olarak bireysel sinekler bir fırsatçı bakteriyel patojen (Pseudomonas aeruginosa) ve D. melanogaster (Pseudomonas entomophila) doğal bir bakteriyel patojen ortaya çıkarmak için bir iletişim kuralı mevcut. Erkek ve dişi sinekler bu patojenler için ortaya çıkarmak için sağlam bir yöntem sağlamak amacıyla bu iletişim kuralı hedefidir. Biz hayatta kalma fenotipleri, mikrop yükler ve dökülme, bakteriyel gösteren temsilcisi sonuçları hangi heterojenite patojen iletim çalışmanın ilgilidir sağlar. Son olarak, biz bunu teyit (bağırsak epitel koruyucu peritrophic matrisinde eksik) Dcy mutantlar ve zevkle (fonksiyonel bağışıklık yetersizliği (IMD) yolu eksik) mutantlar, oral enfeksiyon bakteri artan duyarlılık göstermek. Bu iletişim kuralı, bu nedenle, bağırsak enfeksiyonu sonuçları ve bakteriyel iletim varyasyon bir çeşitli genetik ve çevresel kaynakları çalışma genişletilmiş enfeksiyonu ağız yolu kullanmanın sinekler bulaştırmak için sağlam bir yöntem açıklanır.

Burada, açıklayıcı deney sonuçlarından nerede D. melanogaster sözlü olarak P. aeruginosa veya P. entomophilaile enfekte oldu mevcut. Şekil 2 bir 12 saat veya 24 saat pozlama süre OD600 bakteri kültürleri aşağıdaki sinekler başarılı oral enfeksiyon gösterir 25 ile 100 = P. aeruginosa (Şekil 2A) ve P. entomophila (Şekil 2B için C), anılan sıraya göre. Şekil 2B P. entomophila, zaman sinekler fazla optik yoğunluk bakteri kültürleri maruz artış tarafından bakteri yükü olarak gösterilen daha yoğun bir kültür kullanmanın önemini göstermektedir. Erkek ve dişi Oregon R (örer) sinekler P. aeruginosa enfeksiyon aynı oranda (Şekil 3) temizleyin ve P. aeruginosa CFUs (Şekil 4A) aynı sayıda döken. P. entomophila ile ancak bulaştığında, erkek ve dişi örer sinekler (Şekil 4B) zaman içerisinde değişen bir şekilde bakteri döken cinsinden farklı. Kadın ve erkek P. aeruginosa (Şekil 5A) ve P. entomophila (Şekil 5B) farklı oranlarda ölür. Ayrıca (Bu bağırsak epitel koruyucu peritrophic matrisinde eksikliği) Dcy mutantlar ve (Bu bir işlevsel IMD bağışıklık yol eksikliği) Relish mutantlar azalmış hayatta kalma P. entomophila ve P. aeruginosa takip göstermek görmek oral enfeksiyon (Şekil 5C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig1.jpg"> Resim 1: Hayatta kalma, dökülme ve iç bakteri yükü Drosophila melanogasterağız enfeksiyonu takip ölçmek için protokolleri şematik bakış. D. melanogasterağız enfeksiyonu takip 3 potansiyel deneyler görülmektedir. 'Yaşam' tek sinek şişeleri için aktarmak ve onların virüslü ömrü kayıt ölçmek. 'Tek sinek 1.5 mL microcentrifuge tüpler 50 µL Lewis orta Cap ile aktararak akıtan' ölçmek. Tüp içinde 24 saat sonra sinek ve girdap tüp 100 µL 1 x PBS ile kaldırın. Kaldırmak ve bu çözüm LB besin agar bakteri dökülme hesaplamak için üzerinde plakası. Aynı sinek boyuna, 24 saat sonra kap ortamda Lewis ile taze tüpler sinekler aktarılması ve yıkama ve şimdi kirlenmiş boru kaplama dökülme ölçmek. Bir sinek 's 'dahili yük' bir virüslü sinek, yüzey bu sterilize alarak ve sonunda homogenate LB besin agar üzerinde kaplama önce homojenizasyon ölçülebilir. Sonra dökülme hesaplamak için ölçülen bu yapılabilir nasıl 'dahili yük' ve dökülme ilişkili. Bu şekilde kullanılan sinek illüstrasyon aslında B. Nuhanen36tarafından çizilmiştir. Yazarlar bu Wikimedia Commons37alınan örnek Kaplan-Meier eğrisi eşlik edecek değiştirdiniz. Tüm diğer resimler orijinal. <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig2.jpg"> Şekil 2: bulaşıcı doz oral enfeksiyon takip bakteri. (A) erkek ve dişi Oregon-R bulaşıcı doz uçar P. aeruginosa kültür maruz takiben (OD600 = 25) 12 h için. Ortalama ve SE 3 kadın ve 3 erkek hesaplanır. (B) bulaşıcı bir dört P. entomophila kültürlerin maruz takip outcrossed vahşi tipi kadın doz (OD600 = 100, 75, 50 ve 25) veya % 5 sükroz çözüm 24 h için kontrol. İstatistiksel farkı (F3,76 18.567, p = < 0.001) maruz kalma tedaviler arasında bulaşıcı doz barlar yukarıda farklı harfler tarafından gösterilir. Anlamına gelir 5 sinekler OD600 üzerinden hesaplanan = 0 doz ve 18-20 diğer dozlarda için. (C) erkek ve dişi Oregon-R bulaşıcı doz P. entomophila kültür maruz takiben uçar (OD600 = 100) 24 h için. Ortalama ve SE 20 ve 20 erkek hesaplanır. <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig3.jpg"> Şekil 3: İç P. aeruginosa yük oral enfeksiyon sonra sinek içinde. Erkek ve dişi Oregon-R ortalama ± SE bakteriyel yük uçar P. aeruginosa ile oral enfeksiyon takip (OD600 = 25) 168 h sonrası enfeksiyon e kadar. Ortalama ve SE her zaman noktasının 3 bireyler hesaplanır. Bir sinek 's iç bakteri yükü önemli ölçüde zaman içerisinde değişen (p < 0.001). <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig4.jpg"> Şekil 4: oral enfeksiyon sonrasında dökülme bakteriyel. (A) P. aeruginosa döken Şekil 3, en fazla 120 h sonrası enfeksiyon için kullanılan aynı sinekler tarafından. Ortalama ve SE 3 kadın ve 3 erkek hesaplanır. (B) P. entomophila erkek ve dişi Oregon-R tarafından döken uçar P. entomophila ağız mantar enfeksiyonu takip (OD600 = 100) en çok 120 h sonrası enfeksiyon. Ortalama ve SE 34 ve 38 erkek hesaplanır. P. aeruginosa ve P. entomophilaiçin bir sinek barakanın CFUs sayısını önemli ölçüde zaman içinde değiştirir (p < 0.001). <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57676/57676fig5.jpg"> Şekil 5: oral enfeksiyon bakteri takip sinekler yaşama. Kaplan-Meier (KM) hayatta kalma eğrileri (A) Oregon-R erkek ve dişi sinekler P. aeruginosa ile oral enfeksiyon takip (OD600 = 25) veya % 5 sükroz çözüm kontrol. KM sağkalım eğrisi tedavi grubu başına 20 Sineklerin Tanrısı 4 tüpleri üzerinden hesaplanır. (B) P. entomophila ile oral enfeksiyon sonra örer erkek ve dişi sinekler (OD600 = 100). KM sağkalım eğrisi 4 tek kontrol sinekler ve kadın ve erkek için 34 virüslü sinekler üzerinden hesaplanır. (C) bağışıklık mutantlar: Dcy (Drosocrystallin-peritrophic matris mutant) ve Rel (Relish IMD mutant), maruz P. entomophila (Pe), P. aeruginosa (Pa14) veya kontrol % 5 sükroz çözümü için. Tüm enfekte grupları önemli ölçüde denetim sinekler daha hızlı ölmek (p < 0.001). <a href="/files/ftp_upload/57676/57676fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster at JoVE.com

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

Bu iletişim kuralı sözlü olarak ortaya çıkarmak ve bakteriyel patojenler ile meyve sineği Drosophila melanogaster bulaştırmak ve bağırsak enfeksiyonu takip bulaşıcı bakteri döken sayısını ölçmek için yöntemler açıklanır. Daha fazla sinek hayatta kalma sözlü bakteriyel enfeksiyonu takip bağışıklık mutantlar etkisini açıklar.

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the best developed model systems of infection and innate immunity. While most work has focused on systemic ...

oral-bacterial-infection-and-shedding-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

11.5K Görüntüleme.  University of Edinburgh. Bu iletişim kuralı sözlü olarak ortaya çıkarmak ve bakteriyel patojenler ile meyve sineği Drosophila melanogaster bulaştırmak ve bağırsak enfeksiyonu takip bulaşıcı bakteri döken sayısını ölçmek için yöntemler açıklanır. Daha fazla sinek hayatta kalma sözlü bakteriyel enfeksiyonu takip bağışıklık mutantlar etkisini açıklar.

Video: Oral Bacterial Infection and Shedding in Drosophila melanogaster

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

My name is Voia Friedman. I am associate researcher at Princeton University. And today I'm going to tell you about a few protocols that I developed to trans infect, to I initially to isolate, to go back from the heli of infected flies, and later on help to inject the heli feed to unaffected flights.So basically, this is a very simple protocol to isolate him oly for basics. And you will use this device from, from mepo that contains a filter that goes on top of an E.So you basically needs to put you, we start from around a hundred flies. You anize the flies, you put them into the filter device, you can just use a funnel and that will add our other fit very easily on this device and wash it with 70%ethanol.You just take the, take the future away, you can throw away the ethanol, and then after three times your last wash you do with molecule water because you don't want have the bacteria from the, with traces of ethanol. Well, and then you just go to a new weapon door and, and then you spin down on a micro, real micro for two minutes And later on how you can inject that. He only feed do unaffected flies.So basically take a double stick tape and usually these double stick tapes have two side, one side is a sticker than the other. So leave the sticker side up because that's the side that you're gonna glue that flies on top of it. And basically you'll, the gas apparatus, if you have this light on top of it, you'll be no gas flow and the flies you wake up if they're on top of the slide.So you can just direct the flow, making a little hood, a little chamber using tape. Then you direct the gas over the flies. So then you put your, this light here with the tape and you, you have your flies.Stick the flies on the top of the tape, all of them the same orientation, and put their head towards the direction that you'll be bringing the needle from. Because then you can just over the, the wing, you make sure since they fly, you don't want to fly. If they woke up during the procedure, don't want them to go away.So make sure that you take a little tip and pressure against the, the, the wings of the fly on the tail. And it's okay if they wings get damaged. And when you get rid, when you take the flies up the injection, most likely they'll lose their wings anyway, so they'll survive.That can, that can be useful because you're not gonna lose the flies that, so he puts a mineral oil on the micrometer for the back of the needle, then the needle injection polar, and then the, you can just adjust the pressure to bring the material up to the tip of the needle. I, I did to inject Somewhere between 10 to 15 nanoliters, but as, as long, as long as I'm consistents. Okay, so one important detail there is a cushion of this experiment is that the, the fly, once the apply is being injected when you saw the needle needs to come as far as you can through the upper part of the abdomen.Because here, basically when the needle penetrates, you have a, a, a, a, a bigger space to go up and down. And basically if it's close, closer to the cuticle, it's less likely they're gonna penetrate vital organs in the flight. You, it is very likely unlikely that you're gonna punch a hole in your gut, for instance, if that is gonna kill the flight that you are performing the surgery.My name is Voia Friedman. I am associate researcher at Princeton University in the lab of Eric Hels. And today I would like to tell you about this protocol that you just saw, the demonstration.So this protocol was done because we wanted to prove that UBA is capable of crossing tissues. So UBA is one of the most successful intracellular paras on the face of the earth. Infects from 20 to 70%of insects and many particles.And also is, is very important in terms of human diseases because also infect nematodes that transmit diseases like river blindness or s and ssis. And so, and CCA is our obligatory endo in, in these worms. And there's a great, a very big interest in using CCA also as means to control parasitic diseases transmitter by mosquito and Danny and this and by mosquito such as malaria and dengue.So this, this, this protocol basically was developed to show that once CCA inside the abdominal cavity of a fly, they can cross tissues and reach the germ. So basically what you can see here is the oph of the drosophila ovary and go back once present in the he leaf it, it can cross a pink peronial. She that is around the ovary.And then they cross a muscle layer. And actually one of the first places that they, they go inside the ovary is the somatic stem cell image. And then they can reach the germline.And this bacteria is transmitted the same way that mitochondria is transmitted is through, is through the mother transmitted, through the mother cyop plants present in the egg. So of course they needs to be present into the germline. So that's why this protocol is developed.And this protocol is, can be very useful to basically traditionally the way that people would try to trans infect wbaa basically take wbaa and introduce a new insect species. It would be through doing micro injections into the, into the embryo. But those are much more complicated.And basically here we are just taking advantage of the o biology since they are capable to cross tissues and moving into the stem cell tissues from, they can pass to the, through to the germline. So that's make easier taking UBA from certain, from, from certain species of insects that are infected and they can be transmitted to uninfected species. Prob I think it's the injection itself.Basically you need to be careful to mobilize the fly as well as you can. We are using double sided stick tape and you need to penetrate the needle basically as close to the, as parallel to the fly as possible so you don't go to deep. And it's less likely that we're gonna kill the fly after they're performing the surgery.

Drosophila Wolbachia Bakteriyel Enfeksiyon

Biyoloji

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is a model for understanding microbial interactions with animal hosts, facilitated by approaches to rear large sample sizes of Drosophila under microorganism-free (axenic) conditions, or with defined microbial communities (gnotobiotic). This work outlines a method for collection of Drosophila embryos, hypochlorite dechorionation and sterilization, and transfer to sterile diet. Sterilized embryos are transferred to sterile diet in 50 ml centrifuge tubes, and developing larvae and adults remain free of any exogenous microbes until the vials are opened. Alternatively, flies with a defined microbiota can be reared by inoculating sterile diet and embryos with microbial species of interest. We describe the introduction of 4 bacterial species to establish a representative gnotobiotic microbiota in Drosophila. Finally, we describe approaches for confirming bacterial community composition, including testing if axenic Drosophila remain bacteria-free into adulthood.

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

A method for rearing Drosophila melanogaster under axenic and gnotobiotic conditions is presented. Fly embryos are dechorionated in sodium hypochlorite, transferred aseptically to sterile diet, and reared in closed containers. Inoculating diet and embryos with bacteria leads to gnotobiotic associations, and bacterial presence is confirmed by plating whole-body Drosophila homogenates.

Meyve Fly Yetiştirme<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Aksenik ve gnotobiyotik Koşullarında

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is ...

Gelişim Biyolojisi

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the premier model organisms for studying the function and evolution of immune defense. Many aspects of innate immunity are conserved between insects and mammals, and since Drosophila can readily be genetically and experimentally manipulated, they are powerful for studying immune system function and the physiological consequences of disease. The procedure demonstrated here allows infection of flies by introduction of bacteria directly into the body cavity, bypassing epithelial barriers and more passive forms of defense and allowing focus on systemic infection. The procedure includes protocols for the measuring rates of host mortality, systemic pathogen load, and degree of induction of the host immune system. This infection procedure is inexpensive, robust and quantitatively repeatable, and can be used in studies of functional genetics, evolutionary life history, and physiology.

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

Drosophila melanogaster is an outstanding model organism for studying innate immune systems and the physiological consequences of infection and disease. This protocol describes how to deliver robust and quantitatively repeatable bacterial infections to D. melanogaster, and how to subsequently measure infection severity and quantify the host immune response.

Sistemik Bakteriyel Enfeksiyon ve Bağışıklık Savunma FENOTİPİ içinde<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the premier model organisms for studying the function and evolution of immune defense. Many aspects of ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the goal of this protocol is to develop a method to visualize the pathogen invasion in a specific immune compartment of flies, namely hemocytes. Using the method presented here, up to 3 &#215; 106 live hemocytes can be obtained from 200 Drosophila 3rd instar larvae in 30 min for ex vivo infection. Alternatively, hemocytes can be infected in vivo through injection of 3rd instar larvae followed by hemocyte extraction up to 24 h post-infection. These infected primary cells were fixed, stained, and imaged using confocal microscopy. Then, 3D representations were generated from the images to definitively show pathogen invasion. Additionally, high-quality RNA for qRT-PCR can be obtained for the detection of pathogen mRNA following infection, and sufficient protein can be extracted from these cells for Western blot analysis. Taken together, we present a method for definite reconciliation of pathogen invasion and confirmation of infection using bacterial and viral pathogen types and an efficient method for hemocyte extraction to obtain enough live hemocytes from Drosophila larvae for ex vivo and in vivo infection experiments.

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

This method demonstrates how to visualize pathogen invasion into insect cells with three-dimensional (3D) models. Hemocytes from Drosophila larvae were infected with viral or bacterial pathogens, either ex vivo or in vivo. Infected hemocytes were then fixed and stained for imaging with a confocal microscope and subsequent 3D cellular reconstruction.

Hemocytes mikrobiyal enfeksiyon ve çözümleme çekme--dan Drosophila melanogaster larva

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our knowledge of prevention and treatment of viral infection. The fruit fly Drosophila melanogaster has proven to be one of the most efficient and productive model organisms to screen for antiviral factors and investigate virus-host interaction, due to powerful genetic tools and highly conserved innate immune signaling pathways. The procedure described here demonstrates a nano-injection method to establish viral infection and induce systemic antiviral responses in adult flies. The precise control of the viral injection dose in this method enables high experimental reproducibility. Protocols described in this study include the preparation of flies and the virus, the injection method, survival rate analysis, the virus load measurement, and an antiviral pathway assessment. The influence effects of viral infection by the flies' background were mentioned here. This infection method is easy to perform and quantitatively repeatable; it can be applied to screen for host/viral factors involved in virus-host interaction and to dissect the crosstalk between innate immune signaling and other biological pathways in response to viral infection.

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

This protocol describes how to establish viral infection in vivo in Drosophila melanogaster using the nano-injection method and basic techniques to analyze virus-host interaction.

Viral enfeksiyon ve analiz Drosophila Melanogaster ana bilgisayar virüs etkileşimin kurulması

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay

In all animals, innate immunity provides an immediate and robust defense against a broad spectrum of pathogens. Humoral and cellular immune responses are the main branches of innate immunity, and many of the factors regulating these responses are evolutionarily conserved between invertebrates and mammals. Phagocytosis, the central component of cellular innate immunity, is carried out by specialized blood cells of the immune system. The fruit fly, Drosophila melanogaster, has emerged as a powerful genetic model to investigate the molecular mechanisms and physiological impacts of phagocytosis in whole animals. Here we demonstrate an injection-based in vivo phagocytosis assay to quantify the particle uptake and destruction by Drosophila blood cells, hemocytes. The procedure allows researchers to precisely control the particle concentration and dose, making it possible to obtain highly reproducible results in a short amount of time. The experiment is quantitative, easy to perform, and can be applied to screen for host factors that influence pathogen recognition, uptake, and clearance.

Assessing the Cellular Immune Response of the Fruit Fly, Drosophila melanogaster, Using an In Vivo Phagocytosis Assay

This protocol describes an in vivo phagocytosis assay in adult Drosophila melanogaster to quantify phagocyte recognition and clearance of microbial infections.

Bir In Vivo fagositoz tahlil kullanarak Drosophila melanogaster, meyve sineği hücresel bağışıklık yanıtı değerlendirirken

In all animals, innate immunity provides an immediate and robust defense against a broad spectrum of pathogens. Humoral and cellular immune responses are ...

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

The use of unconventional models to study innate immunity and pathogen virulence provides a valuable alternative to mammalian models, which can be costly and raise ethical issues. Unconventional models are notoriously cheap, easy to handle and culture, and do not take much space. They are genetically amenable and possess complete genome sequences, and their use presents no ethical considerations. The fruit fly Drosophila melanogaster, for instance, has provided great insights into a variety of behavior, development, metabolism, and immunity research. More specifically, D. melanogaster adult flies and larvae possess several innate defense reactions that are shared with vertebrate animals. The mechanisms regulating immune responses have been mostly revealed through genetic and molecular studies in the D. melanogaster model. Here a novel larval injection technique is provided, which will further promote investigations of innate immune processes in D. melanogaster larvae and explore the pathogenesis of a wide range of microbial infections.

Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol

Drosophila melanogaster adult flies have been extensively utilized as model organisms to investigate the molecular mechanisms underlying host antimicrobial innate immune responses and microbial infection strategies. To promote the D. melanogaster larva stage as an additional or alternative model system, a larval injection technique is described.

Drosophila melanogaster Larva Enjeksiyon Protokolü

The use of unconventional models to study innate immunity and pathogen virulence provides a valuable alternative to mammalian models, which can be costly ...

Infecting Flies with Bacterial Suspension Using a Nanoinjector

Source: Khalil, S. et al., <a href="https://app.jove.com/v/52613">Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160; (2015)
This video demonstrates the nano-injection of bacterial suspension into the fly body cavity, resulting in bacterial multiplication and infection. The fly&#39;s immune response clears some bacteria, while others escape immune clearance and survive within the host causing an infection.

Nanoenjektör Kullanarak Sinekleri Bakteriyel Süspansiyonla Enfekte Etmek

Source: Khalil, S. et al., Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster.&#160;J. Vis. Exp.&#160; (2015)
This ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

İmmünoloji

Bağışıklık Yanıtları

Konak-Patojen Etkileşimi

A Septic Pinprick Technique to Introduce Systemic Bacterial Infection in Flies

Source: Khalil, S., et al. <a href="https://app.jove.com/v/52613">Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (2015)
This video demonstrates a technique to infect Drosophila by introducing a pathogenic bacteria directly into their body cavity. This method bypasses epithelial barriers and other passive defense mechanisms, allowing for the induction of systemic infection. Upon infection, the resulting immune response is assessed by monitoring fly mortality and performing downstream assays.

Sineklerde Sistemik Bakteriyel Enfeksiyonu Tanıtmak İçin Septik Bir İğne Ucu Tekniği

Source: Khalil, S., et al. Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster. J. Vis. Exp. (2015)
This video ...

Measuring E. coli Bacterial Load in Drosophila melanogaster following E. coli Infection

Source: Khalil, S., et al. <a href="https://app.jove.com/v/52613">Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster.</a> J. Vis. Exp. &#160;(2015)
In this video, we demonstrate a technique for measuring the E. coli bacterial load after injecting E. coli into the thorax of Drosophila melanogaster.

E. coli Enfeksiyonunu Takiben Drosophila melanogaster'de E. coli Bakteri Yükünün Ölçülmesi

Source: Khalil, S., et al. Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster. J. Vis. Exp. &#160;(2015)
In this video, ...

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler