Bu yöntemler safra atrezisi anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Hastalık, patogenez ve tedavi hakkında BA görüşleri. Bu tekniğin en büyük avantajı, yenidoğan fare enjeksiyon tekniğinin araştırmacıların diğer neonatal fare modeli çalışmaları için yönteme aşina olmalarına yardımcı olmasıdır.
Bu tekniğin etkileri ba tedavisine kadar uzanır, çünkü bu yöntem BA tedavisine ışık verebilir, aynı zamanda bu yöntemin patogenezinin neonatal fare modelleri gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Bir fare modelinde biliyer atrezi kurmak için, 29-gauge iğne ile donatılmış bir mililitre insülin şırınga içine rhesus rotovirus yük, ve intraperitoneally 1.2 kez 10 virmüsün 5 plak oluşturan birimleri için Dulbecco's Modifiye Kartal Orta 20 mikrolitre doğumdan sonra her yenidoğan için. Sonra günlük izleme ve tartma için annelerine neonates dönün.
Yenidoğan hayvanlar sarılık belirtileri sergilemeye başladığınızda, hayvan başına taze hazırlanmış gümüş nanopartikül kollajen çözeltisi 50 mikrolitre ile 29-gauge iğne ile donatılmış bir mililitreşli şırınga yük ve sağ uyluk üzerinde eğik bir sarılıklı hayvanın bacak bastırmak için yüzük parmağı kullanın. Yavaş yavaş periton içine 15 derecelik bir açıyla iğne tanıtmak, ve karaciğerin alt kenarının yüzeyine ulaştıktan sonra, gümüş nanopartikül kollajen karışımı enjekte. Tüm karışım enjekte edildiğinde, yavaş yavaş iğne çıkarın ve kollajen katılaşmak ve enjeksiyon site yalama anne önlemek için izin vermek için hayvan on dakika dinlenmek için izin verin.
Sonra günlük izleme için kendi kafeslerine fareler dönün. Aşılamadan sonra dokuzuncu veya on iki günde, üst ve alt karın%75 etanol ile sterilize edin ve enfekte olmuş bir farenin uzuvlarını hareketsiz hale getirin. Ksifoid orta hat boyunca cilt, kas ve periton açın ve tamamen diyafram ortaya çıkarmak için gastrointestinal sistem kaldırmak için steril bir pamuklu bez kullanın.
Boşbir mililitrelik insülin şırıngasının iğnesini kalbin sol ventrikülüne yerleştirin ve maksimum kan hacmini elde etmek için şırınga pistonuna yavaşça geri çekin. Oda sıcaklığında 30 dakikalık kuluçka için kanı 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın ve kırmızı kan hücrelerini santrifüj le peletlendirin. Sonra daha sonra analiz için serum toplamak.
Ekstrahepatik kolanjiyografi için, karaciğer, safra kesesi ve ekstrahepatik safra kanallarını tamamen ortaya çıkarmak için pamuklu bir bez kullanın. Bir diseksiyon mikroskobu altında karaciğer ve safra kanallarının görünümünü fotoğraflandıktan sonra, yavaşça safra kesesi alt kavramak ve yavaş yavaş safra kesesi boşluğuna metilen mavi solüsyon yüklü bir mililitre şırınga iğne eklemek için oftalmik forseps kullanın. İğneyi forceps ile kavrayarak, 10-20 mikrolitre metilen mavisi yavaşça aşıla.
Boya jejunum için ekstrahepatik safra kanalları geçer, doku başka bir fotoğraf elde. Sonra hematoksilin ve eozin boyama için,% 10 formalin gecede fiksasyon için her hayvandan karaciğer hasat. Ertesi sabah, örnekleri kesit için parafine gömün, ardından etanol serisi ve hematoksilin ve eozin boyama ile standart histopatolojik analiz protokollerine göre yeniden hidrasyon un de-waxing'i yapın.
Tedavi edilmeyen safra atrezisi farelerile karşılaştırıldığında, gümüş nanopartikül tedavi edilen hayvanlar azalmış sarılık gösterir ler ve normal vücut ağırlıklarını korurlar. Bilirubin metabolizması ve hepatik transaminaz düzeyleri normal kontrol değerlerine düşer, gümüş nano tanecikleri büyük ölçüde karaciğer fonksiyonunu artırmak düşündürmektedir. Metilen mavisi boyama ile ekstrahepatik kolanjiyografi gümüş nanopartikül tedavisi sonrası safra kanalı açıklığını doğrular ve H&E boyama kontrollere göre gümüş nano tanecikleri ile tedavi edilen farelerin hepatik portal bölgesinde inflamatuar hücre infiltrasyonunda önemli bir azalma olduğunu ortaya koymaktadır.
Akış yeri ve metrik analiz, tedavi edilmeyen rhesus rotavirüs enfekte farelere kıyasla gümüş nanopartikül tedavi edilmiş hayvanların karaciğerlerinde önemli ölçüde daha az NK hücresi nin varlığını göstermektedir. Daha fazla immünohistokimyasal boyama rhesus rotavirüs enfekte hayvanlara göre gümüş nanopartikül tedavi farelerin portal triad NK hücre belirteci boyama önemli ölçüde azaltılmış bir ifade ortaya koymaktadır. Bu yordamı denerken, uygulamanın en iyi sonuçları vereceğini unutmamak önemlidir.
Bu prosedürü takiben, fare modellerinde BA tedavisinde lezyonların aktivitesi hakkında ek sorulara cevap vermek için gümüş nano tanecikleri başka şeylere konjuge etme gibi yöntemler yapılabilir. geliştirmedir. Bu teknik BA veya karaciğerde kolestaz gibi diğer hastalıklara gastroenteroloji alanında araştırmacılar için bir yol sağladı.
Araştırma rotavirüs ile çalışan son derece tehlikeli olabilir unutmayın, ve bu nedenle bu işlemi yaparken her zaman uygun kişisel koruyucu ekipman giyen gibi önlemler alınmalıdır.
