שיטות אלה יכולות לעזור לענות על שאלות מפתח ב atresia המרה. של BA תצוגות על מחלה, פתוגנזה וטיפול. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי טכניקת הזרקת עכבר יילודים יעזור לחוקרים להכיר את השיטה עבור מחקרים אחרים מודל עכבר יילודים.
ההשלכות של טכניקה זו להרחיב לכיוון הטיפול של BA כמו מספר חלקיקים של משמעות למרות שיטה זו יכולה לספק תובנה לתוך הטיפול BA, זה יכול להיות מיושם גם על מערכות אחרות כגון מודלים עכבר יילודים של הפתוגנזה של זה בדרך כלל בדרך זו לשיטה זו יהיה כי גודל קטן של עכברים יילודים יכול לגרום לבניית תהליך ההזרקה. כדי להקים atresia המרה במודל העכבר, לטעון את rotovirus רזוס לתוך מזרק אינסולין מיליליטר אחד מצויד מחט 29-מד, ולספק תוך-עינית 1.2 פעמים 10 ליחידות 5 לוח להרכיב של וירוס ב 20 microliters של דולבקו שונה הנשר בינוני לכל ניאון בתוך 24 שעות של הלידה. ואז להחזיר את הנידון לאמא שלהם לניטור יומי ושיקול.
כאשר חיות יילודים מתחילות להפגין סימנים של צהבת, לטעון מזרק אחד מיליליטר מצויד מחט 29 מד עם 50 microliters של פתרון קולגן ננו חלקיקי כסף מוכן טרי לכל בעל חיים ולהשתמש באצבע הטבעת ללחוץ על רגלו של בעל חיים צהבהב אחד אלכסוני מעל הירך הימנית. לאט להציג את המחט בזווית של 15 מעלות לתוך הצמיטונום, ועל ידי הגעה לפני השטח של הקצה התחתון של הכבד, להזריק את תערובת קולגן חלקיקי כסף. כאשר כל התערובת הוזרקה, להסיר לאט את המחט ולאפשר את החיה לנוח במשך עשר דקות כדי לאפשר קולגן להתגבש ולמנוע את האם מלקק את אתר ההזרקה.
ואז להחזיר את העכברים לכלובים שלהם לניטור יומי. ביום תשע או שתים עשרה לאחר החיסון, לחסן את הבטן העליונה והתחתון עם 75%אתנול, ולשתק את הגפיים של עכבר נגוע. פתח את העור, השריר ואת צפק לאורך קו האמצע כדי xyphoid, ולהשתמש ספוגית כותנה סטרילית כדי להסיר את מערכת העיכול כדי לחשוף באופן מלא את הסרעפת.
הכנס את המחט של מזרק אינסולין אחד מיליליטר לא טעון לתוך החדר השמאלי של הלב, ולאט לאט לסגת בוכנה מזרק כדי להשיג את נפח הדם המרבי. מעבירים את הדם לצינור 1.5 מיליליטר עבור דגירה של 30 דקות בטמפרטורת החדר ומעבירים את תאי הדם האדומים על ידי צנטריפוגה. ואז לאסוף את הנסיוב לניתוח מאוחר יותר.
עבור cholangiography extrahepatic, להשתמש ספוגית כותנה לחשוף באופן מלא את הכבד, כיס המרה ותעלות מרה extrahepatic. לאחר צילום המראה של צינורות הכבד והמרה תחת מיקרוסקופ ניתוח, השתמש במטלות עיניים כדי לתפוס בעדינות את תחתית כיס המרה ולהכניס לאט את המחט של מזרק מיליליטר אחד טעון בתמיסה כחולה מתילן לחלל כיס המרה. אוחז את המחט עם המדפים, לאט להחדיר 10-20 microliters של כחול מתילן.
כאשר הצבע עובר דרך צינורות המרה החוץ-פתגמית אל הג'ג'ונום, השג תמונה נוספת של הרקמה. לאחר מכן להמטוקסילין וכתמי אאוסין, לקצור את הכבד מכל בעל חיים עבור קיבעון לילה ב 10% פורמלין. למחרת בבוקר, להטמיע את הדגימות בפרפין עבור חתך, ואחריו דה שעווה לחות מחדש עם סדרת אתנול ו מכתים hematoxylin ו אאוסין על פי פרוטוקולי ניתוח היסטופתולוגי סטנדרטי.
בהשוואה לעכברי אטרסיה מרה לא מטופלים, בעלי חיים שטופלו בננו-חלקיקים מכסף מדגימים צהבת מופחתת ושומרים על משקל גופם הרגיל. רמות חילוף החומרים בילירובין ו transaminase הכבד לרדת לערכי שליטה נורמלית, מה שמרמז כי חלקיקי כסף לשפר מאוד את תפקוד הכבד. cholangiography extrahepatic עם כתמים כחולים מתילן מאשר רפיון צינור המרה לאחר טיפול ננו-חלקיקים כסף, וכתמים H&E מגלה ירידה משמעותית חדירת תאים דלקתיים באזור פורטל ההפטי של עכברים שטופלו חלקיקים כסף לעומת פקדים.
אתר זרימה וניתוח מטרי מצביעים על נוכחותם של פחות תאי NK באופן משמעותי בכבדים של בעלי חיים שטופלו בננו-חלקיקים מכסף בהשוואה לעכברים נגועים רזוס rotavirus מטופלים. כתמים אימונוהיסטוכימיים נוספים חושפים ביטוי מופחת באופן משמעותי של כתמי סמן תא NK בשלישיית הפורטל של עכברים שטופלו בננו-חלקיקים מכסף בהשוואה לבעלי חיים נגועים רזוס rotavirus. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי התרגול ייתן את התוצאות הטובות ביותר.
בעקבות הליך זה, כמו שיטות כמו העלאת חלקיקי כסף לדברים אחרים ניתן לבצע כדי לענות על שאלות נוספות על פעילות של נגעים בטיפולים של BA במודלים העכבר. היא התפתחות. טכניקה זו סיפקה דרך לחוקרים בתחום הגסטרואנטרולוגיה ל BA או מחלות אחרות כגון cholestasis בכבד.
אל תשכח כי עבודה עם rotavirus מחקר יכול להיות מסוכן מאוד, ולכן אמצעי זהירות כגון לבישת ציוד מגן אישי המתאים תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.
