これらの方法は、胆道閉鎖症の主要な質問に答えるのに役立ちます。病気、病因、治療に関するBAの見解の。この技術の主な利点は、新生児マウス注射技術が研究者が他の新生児マウスモデル研究の方法に精通するのに役立つということです。

この技術の意味合いは、いくつかのナノ粒子としてのBAの治療に及ぶ重要な方法であるが、この方法はBA治療に関する洞察を提供することができるが、新生児マウスの小さなサイズが注射プロセスの構築をもたらす可能性があるため、この方法に一般的にこの方法の新生児マウスモデルなどの他のシステムにも適用することができる。マウスモデルで胆道閉鎖症を確立するには、アカゲスロトウイルスを29ゲージ針を備えた1ミリリットルのインスリン注射器にロードし、腹腔内は20マイクロリットルのウイルスの5番目のプラーク形成ユニットに1.2回10回を送達する。その後、毎日の監視と計量のために彼らの母親に新生児を返します。

新生児動物が黄疸の徴候を示し始めると、動物ごとに50マイクロリットルの新しく調製された銀ナノ粒子コラーゲン溶液を備えた29ゲージの注射器を1ミリリットルにロードし、薬指を使って右太ももの上に斜めに1匹の黄疸の動物の脚を押し付ける。ゆっくりと腹膜に15度の角度で針を導入し、肝臓の下端の表面に達すると、銀ナノ粒子コラーゲン混合物を注入する。すべての混合物が注入されたら、ゆっくりと針を取り除き、動物が10分間休んでコラーゲンを固めさせ、母親が注射部位を舐めるのを防ぎます。

その後、毎日の監視のためにケージにマウスを返します。接種後9日目または12日目に、上腹部と下腹部を75%エタノールで殺菌し、感染したマウスの手足を固定化する。皮膚、筋肉、腹膜をキシフォイドに沿って開き、滅菌綿棒を使用して消化管を取り除き、横隔膜を完全に露出させます。

アンロードされた1ミリリットルのインスリン注射器の針を心臓の左心室に挿入し、注射器プランジャーをゆっくりと引き込んで最大の血液量を得る。血液を1.5ミリリットルチューブに移し、室温で30分間インキュベーションし、遠心分離によって赤血球をペレットにします。その後、後で分析するために血清を収集します。

肝外胆管造影のために、綿棒を使用して肝臓、胆嚢および肝外胆管を完全に露出させる。肝臓と胆管の外観を解剖顕微鏡で撮影した後、眼用鉗子を使用して胆嚢の底を優しくつかみ、メチレンブルー溶液を装填した1ミリリットルの注射器の針を胆嚢腔にゆっくりと挿入します。針を鉗子でつかみ、10~20マイクロリットルのメチレンブルーをゆっくりと注入する。

色素が肝外胆管を通過して、腸管を通過すると、組織の別の写真を得る。次にヘマトキシリンとエオシン染色のために、10%ホルマリンで一晩固定するために各動物から肝臓を収穫する。翌朝、切り離しのためにパラフィンにサンプルを埋め込み、続いてエタノール系列と標準的な組織病理学的分析プロトコルに従ってヘマトキシリンおよびエオシン染色による脱ワックス再水和処理を行う。

未処理の胆道閉鎖マウスと比較して、銀ナノ粒子処理動物は黄疸の減少を示し、正常体重を維持する。ビリルビン代謝と肝トランスアミナーゼのレベルは、正常な制御値に低下し、銀ナノ粒子が肝機能を大幅に改善することを示唆している。メチレンブルー染色による肝外胆管造影は、銀ナノ粒子処理後の胆管の開腸を確認し、H&E染色は、コントロールと比較して銀ナノ粒子で処理されたマウスの肝門門領域における炎症細胞浸潤の有意な減少を明らかにする。

フローサイトおよびメトリック分析は、未処理のアカゲサロタウイルス感染マウスと比較して、処理された動物の銀ナノ粒子の肝臓におけるNK細胞の存在が有意に少ないことを示している。さらに免疫ヒストリカル染色は、アカゲスロタウイルス感染動物と比較して、処理されたマウスの銀ナノ粒子の門脈におけるNK細胞マーカー染色の発現を実質的に減少させたことを明らかにする。この手順を試みる際には、練習が最良の結果を得ることを覚えておくことが重要です。

この手順に従って、銀ナノ粒子を他のものに結合するような方法として、マウスモデルにおけるBAの治療における病変の活性に関する追加の質問に答えるために行うことができる。開発です。この技術は、BAや肝臓のコレスタシスなどの他の疾患に消化器科の分野の研究者のための方法を提供しました.

研究ロタウイルスで作業することは非常に危険であり、したがって、適切な個人的な保護具を着用するなどの予防措置は、常にこの手順を実行するときに取られるべきであることを忘れないでください。