Esses métodos podem ajudar a responder a perguntas-chave na atresia biliar. Da BA vê sobre doenças, patogênese e tratamento. A principal vantagem dessa técnica é que a técnica de injeção de camundongos neonatal ajudará os pesquisadores a se familiarizarem com o método para outros estudos de modelos de camundongos neonatais.
As implicações dessa técnica se estendem para a terapia da BA como várias nanopartículas de significância Embora este método possa fornecer insights sobre o tratamento da BA, ele também pode ser aplicado a outros sistemas, como modelos de camundongos neonatais da patogênese deste Geralmente, da forma como este método irá, pois o pequeno tamanho de camundongos neonatais pode resultar na construção de processo de injeção. Para estabelecer atresia biliar em um modelo de camundongo, carregue o rotovírus rhesus em uma seringa de insulina de um mililitro equipada com uma agulha de calibre 29, e entregue intraperitonealmente 1,2 vezes 10 às 5ª unidades formadoras de placas de vírus em 20 microliters da Águia Média Modificada de Dulbecco para cada recém-nascido dentro de 24 horas após o nascimento. Em seguida, devolva os recém-nascidos para sua mãe para monitoramento diário e pesagem.
Quando os animais neonatais começarem a apresentar sinais de icterícia, carregue uma seringa de um mililitro equipada com uma agulha de calibre 29 com 50 microliters de solução de colágeno de nanopartículas prateadas recém-preparada por animal e use o dedo anelar para pressionar a perna de um animal jaundiced obliquamente sobre a coxa direita. Introduza lentamente a agulha em um ângulo de 15 graus no peritônio, e ao atingir a superfície da borda inferior do fígado, injete a mistura de colágeno nanopartículas prateadas. Quando toda a mistura tiver sido injetada, retire lentamente a agulha e deixe o animal descansar por dez minutos para permitir que o colágeno se solidifique e para evitar que a mãe lamba o local da injeção.
Em seguida, devolva os ratos para suas gaiolas para monitoramento diário. No nono ou doze dias após a inoculação, esterilize o abdômen superior e inferior com 75% de etanol e imobilize os membros de um camundongo infectado. Abra a pele, o músculo e o peritônio ao longo da linha média até o xifoide, e use um cotonete estéril para remover o trato gastrointestinal para expor totalmente o diafragma.
Insira a agulha de uma seringa de insulina de um mililitro descarregada no ventrículo esquerdo do coração, e retraia lentamente o êmbolo da seringa para obter o volume máximo de sangue. Transfira o sangue para um tubo de 1,5 mililitro para uma incubação de 30 minutos à temperatura ambiente e pelota os glóbulos vermelhos por centrifugação. Em seguida, recolham o soro para análise posterior.
Para colangiografia extraháptica, use um cotonete para expor totalmente o fígado, vesícula biliar e ductos biliares extrahápticos. Depois de fotografar a aparência do fígado e dos canais biliares sob um microscópio dissecando, use fórceps oftálmicos para agarrar suavemente o fundo da vesícula biliar e lentamente inserir a agulha de uma seringa mililitro carregada com solução azul de metileno na cavidade da vesícula biliar. Segurando a agulha com os fórceps, infundir lentamente 10-20 microliters de azul metileno.
Quando o corante passar pelos dutos biliares extraháticos até o jejunum, obtenha outra fotografia do tecido. Em seguida, para a coloração de hematoxilina e eosina, colher o fígado de cada animal para fixação durante a noite em 10%. Na manhã seguinte, incorporou as amostras em parafina para secção, seguida de re-hidratação deserdação com uma série de etanol e hematoxilina e eosina de acordo com protocolos de análise histopatológica padrão.
Em comparação com camundongos de atresia biliar não tratada, os animais tratados com nanopartículas de prata demonstram icterícia reduzida e mantêm seu peso corporal normal. Os níveis de metabolismo de bilirrubina e queda hepática do transaminase para valores normais de controle, sugerindo que as nanopartículas de prata melhoram muito a função hepática. A colangiografia extraháptica com coloração azul de metileno confirma a patência do ducto biliar após o tratamento de nanopartículas de prata, e a coloração de H&E revela uma diminuição significativa na infiltração de células inflamatórias na área do portal hepático de camundongos tratados com nanopartículas de prata em comparação com os controles.
O local de fluxo e a análise métrica indicam a presença de significativamente menos células NK nos fígados de animais tratados com nanopartículas de prata em comparação com camundongos infectados por resus rotavírus não tratados. Outras manchas imunohistoquímicas revelam uma expressão substancialmente reduzida de manchas de marcadores de células NK na tríade portal de camundongos tratados com nanopartículas de prata em comparação com animais infectados por resus rotavírus. Ao tentar esse procedimento, é importante lembrar que a prática dará melhores resultados.
Após este procedimento, métodos como a conjugação de nanopartículas de prata para outras coisas podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre a atividade de lesões nos tratamentos de BA em modelos de camundongos. é desenvolvimento. Essa técnica forneceu um caminho para pesquisadores do campo da gastroenterologia para a BA ou outras doenças como a colestase no fígado.
Não se esqueça que trabalhar com o rotavírus de pesquisa pode ser extremamente perigoso e, portanto, precauções como o uso dos equipamentos de proteção individual adequados devem ser sempre tomadas ao realizar esse procedimento.
