Estos métodos pueden ayudar a responder preguntas clave en la atresia biliar. De opiniones de BA sobre enfermedades, patogénesis y tratamiento. La principal ventaja de esta técnica es que la técnica de inyección de ratón neonatal ayudará a los investigadores a familiarizarse con el método para otros estudios de modelos de ratón neonatal.
Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia de BA como varias nanopartículas de importancia Aunque este método puede proporcionar información sobre el tratamiento de BA, también se puede aplicar a otros sistemas como modelos de ratón neonatal de la patogénesis de este Generalmente de la manera que esto a este método será porque el pequeño tamaño de los ratones neonatales puede resultar en la construcción del proceso de inyección. Para establecer la atresia biliar en un modelo de ratón, cargue el rotovirus rhesus en una jeringa de insulina de un mililitro equipada con una aguja de calibre 29, y entregue intraperitonealmente 1,2 veces 10 a las unidades de virus que forman placas en 20 microlitros del medio de águila modificada de Dulbecco a cada neonato dentro de las 24 horas posteriores al nacimiento. A continuación, devuelva los neonatos a su madre para el monitoreo y pesaje diarios.
Cuando los animales neonatales comiencen a mostrar signos de ictericia, cargue una jeringa de un mililitro equipada con una aguja de calibre 29 con 50 microlitros de solución de colágeno nanopartícula de plata recién preparada por animal y use el dedo anular para presionar la pierna de un animal de ictericia oblicuamente sobre el muslo derecho. Introducir lentamente la aguja en un ángulo de 15 grados en el peritoneo, y al llegar a la superficie del borde inferior del hígado, inyectar la mezcla de colágeno de nanopartícula de plata. Cuando se haya inyectado toda la mezcla, retire lentamente la aguja y deje que el animal descanse durante diez minutos para permitir que el colágeno se solidifique y para evitar que la madre lame el lugar de inyección.
Luego devuelva los ratones a sus jaulas para su monitoreo diario. En el día nueve o doce después de la inoculación, esteriliza el abdomen superior e inferior con 75% de etanol e inmoviliza las extremidades de un ratón infectado. Abra la piel, el músculo y el peritoneo a lo largo de la línea media hasta el xyfoide, y utilice un hisopo de algodón estéril para eliminar el tracto gastrointestinal para exponer completamente el diafragma.
Inserte la aguja de una jeringa de insulina descargada de un mililitro en el ventrículo izquierdo del corazón y retraiga lentamente el émbolo de la jeringa para obtener el volumen máximo de sangre. Transfiera la sangre a un tubo de 1,5 mililitros para una incubación de 30 minutos a temperatura ambiente y pelete los glóbulos rojos por centrifugación. Luego recoja el suero para su análisis posteriores.
Para la colangiografía extrahepática, usa un hisopo de algodón para exponer completamente el hígado, la vesícula biliar y los conductos biliares extrahepáticos. Después de fotografiar la apariencia del hígado y los conductos biliares bajo un microscopio diseccionador, utilice fórceps oftálmicos para agarrar suavemente la parte inferior de la vesícula biliar e inserte lentamente la aguja de una jeringa de un mililitro cargada con solución azul de metileno en la cavidad de la vesícula biliar. Agarrar la aguja con los fórceps, infundir lentamente 10-20 microlitros de azul de metileno.
Cuando el tinte pase a través de los conductos biliares extrahepáticos hasta el yeyuno, obtenga otra fotografía del tejido. Luego, para la tinción de hematoxilina y eosina, cosechar el hígado de cada animal para la fijación durante la noche en 10%formalina. A la mañana siguiente, incrustar las muestras en parafina para secación, seguido de la rehidratación de desenceración con una serie de etanol y tinción de hematoxilina y eosina de acuerdo con los protocolos estándar de análisis histopatológico.
En comparación con los ratones con atresia biliar no tratada, los animales tratados con nanopartículas de plata demuestran una ictericia reducida y mantienen su peso corporal normal. Los niveles de metabolismo de la bilirrubina y transaminasas hepáticas caen a valores de control normales, lo que sugiere que las nanopartículas de plata mejoran en gran medida la función hepática. La coleniografía extrahepática con tinción azul de metileno confirma la paencia de los conductos biliares después del tratamiento de las nanopartículas de plata, y la tinción de H&E revela una disminución significativa de la infiltración de células inflamatorias en el área del portal hepático de ratones tratados con nanopartículas de plata en comparación con los controles.
El sitio de flujo y el análisis métrico indican la presencia de células NK significativamente menos en los hígados de animales tratados con nanopartículas de plata en comparación con ratones infectados por rhesus rotavirus no tratados. Otras tinciones inmunohistoquímicas revelan una expresión sustancialmente reducida de tinción de marcador de células NK en la tríada portal de ratones tratados con nanopartículas de plata en comparación con los animales infectados por rhesus rotavirus. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que la práctica dará los mejores resultados.
Siguiendo este procedimiento, como métodos como conjugar nanopartículas de plata con otras cosas se pueden realizar para responder preguntas adicionales sobre la actividad de las lesiones en los tratamientos de BA en modelos de ratón. es el desarrollo. Esta técnica proporcionó una manera para los investigadores en el campo de la gastroenterología a BA u otras enfermedades como la colestasis en el hígado.
No olvide que trabajar con rotavirus de investigación puede ser extremadamente peligroso, por lo que siempre se deben tomar precauciones como el uso del equipo de protección personal adecuado al realizar este procedimiento.
