Diese Methoden können helfen, schlüsselhafte Fragen in Gallenatresie zu beantworten. Von BA Ansichten über Krankheit, Pathogenese und Behandlung. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass die neonatale Maus-Injektionstechnik Forschern helfen wird, sich mit der Methode für andere neonatale Mausmodellstudien vertraut zu machen.
Die Implikationen dieser Technik reichen auf die Therapie von BA als mehrere Nanopartikel von Bedeutung Obwohl diese Methode Einblick in die BA-Behandlung bieten kann, kann es auch auf andere Systeme wie neonatale Mausmodelle der Pathogenese dieser allgemein in der Weise angewendet werden, wie dies zu dieser Methode wird, weil die geringe Größe von neonatalen Mäusen in den Aufbau eines Injektionsprozesses führen kann. Um die Gallenatresie in einem Mausmodell zu etablieren, laden Sie das Rhesus-Rotovirus in eine einMilliliter-Insulinspritze, die mit einer 29-Spur-Nadel ausgestattet ist, und liefern Sie innerhalb von 24 Stunden nach der Geburt 1,2 mal 10 bis 10. Plaque-bildende Viruseinheiten in 20 Mikroliter n.G. Dulbeccos Modifiziertem Adlermedium zu jedem Neugeborenen. Dann geben Sie die Neonate an ihre Mutter für die tägliche Überwachung und Wiegen.
Wenn die neugeborenen Tiere beginnen, Anzeichen von Gelbsucht zu zeigen, laden Sie eine Ein-Milliliter-Spritze mit einer 29-Spur-Nadel mit 50 Mikroliter frisch zubereiteten Silber Nanopartikel Kollagen Lösung pro Tier ausgestattet und verwenden Sie den Ringfinger, um das Bein eines verblendeten Tieres schräg über den rechten Oberschenkel drücken. Führen Sie die Nadel langsam in einem 15-Grad-Winkel in das Peritoneum ein und injizieren Sie beim Erreichen der Oberfläche des unteren Leberrandes die Silber-Nanopartikel-Kollagenmischung. Wenn die gesamte Mischung injiziert wurde, entfernen Sie langsam die Nadel und lassen Sie das Tier für zehn Minuten ruhen, damit das Kollagen verfestigt werden und um zu verhindern, dass die Mutter die Injektionsstelle lecken.
Dann bringen Sie die Mäuse zur täglichen Überwachung in ihre Käfige zurück. Am neunten oder zwölften Tag nach der Impfung den Ober- und Unterbauch mit 75% Ethanol sterilisieren und die Gliedmaßen einer infizierten Maus immobilisieren. Öffnen Sie die Haut, den Muskel und das Peritoneum entlang der Mittellinie zum Xyphoiid und verwenden Sie einen sterilen Wattestäbchen, um den Magen-Darm-Trakt zu entfernen, um das Zwerchfell vollständig freizulegen.
Setzen Sie die Nadel einer entladenen Ein-Milliliter-Insulinspritze in den linken Herzschlitz ein und ziehen Sie den Spritzenkolben langsam zurück, um das maximale Blutvolumen zu erhalten. Übertragen Sie das Blut in eine 1,5 Milliliter-Röhre für eine 30-minütige Inkubation bei Raumtemperatur und pellet die roten Blutkörperchen durch Zentrifugation. Dann sammeln Sie das Serum für die spätere Analyse.
Für die extrahepatische Cholangiographie verwenden Sie einen Wattestäbchen, um die Leber, Gallenblase und extrahepatische Gallengänge vollständig freizulegen. Nachdem Sie das Auftreten der Leber- und Gallengänge unter einem Sezierendes Mikroskop fotografiert haben, verwenden Sie die ophthalmologische Zange, um den Boden der Gallenblase sanft zu erfassen und langsam die Nadel einer ein Milliliter-Spritze, die mit Methylenblau-Lösung beladen ist, in die Gallenblase einzufügen. Greifen Sie die Nadel mit den Zangen, langsam infundieren 10-20 Mikroliter Methylenblau.
Wenn der Farbstoff durch die extrahepatischen Gallengänge zum Jejunum gelangt, erhalten Sie ein weiteres Foto des Gewebes. Dann für Hämatoxylin und Eosin Färbung, ernten Sie die Leber von jedem Tier für die über Nacht Fixierung in 10%formalin. Am nächsten Morgen, einbetten sie die Proben in Paraffin für die Schnittung, gefolgt von der Entwachsung der Rehydratation mit einer Ethanol-Serie und Hämatoxylin- und Eosinfärbung nach standardhistopathologischen Analyseprotokollen.
Im Vergleich zu unbehandelten Gallenatresie-Mäusen zeigen silbernanopartikelbehandelte Tiere eine reduzierte Gelbsucht und halten ihr normales Körpergewicht aufrecht. Die Konzentrationen des Bilirubin-Stoffwechsels und der Lebertransaminase sinken auf normale Kontrollwerte, was darauf hindeutet, dass die Silber-Nanopartikel die Leberfunktion stark verbessern. Die extrahepatische Cholangiographie mit Methylenblaufärbung bestätigt die Gallengangsdurchgängigkeit nach der Behandlung von Silber-Nanopartikeln, und die H&E-Färbung zeigt eine signifikante Abnahme der entzündlichen Zellinfiltration im Leberportalbereich von Mäusen, die mit Silber-Nanopartikeln behandelt wurden, im Vergleich zu Kontrollen.
Flow Site und metrische Analyse zeigen das Vorhandensein von deutlich weniger NK-Zellen in den Lebern von Silber Nanopartikel behandelt enthäuten Tieren im Vergleich zu unbehandelten Rhesus-Rotavirus infizierten Mäusen. Weitere immunhistochemische Färbung zeigt eine wesentlich reduzierte Expression von NK-Zellmarker-Färbung in der Portal-Triade von Silber-Nanopartikel behandelt Mäuse im Vergleich zu Rhesus rotavirus infizierten Tieren. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Praxis die besten Ergebnisse liefert.
Im Anschluss an dieses Verfahren können Methoden wie das Konjugieren von Silber-Nanopartikeln zu anderen Dingen durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen über die Aktivität von Läsionen bei der Behandlung von BA in Mausmodellen zu beantworten. ist Entwicklung. Diese Technik bot Forschern auf dem Gebiet der Gastroenterologie eine Möglichkeit, BA oder andere Krankheiten wie Cholestase in der Leber.
Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Forschung Rotavirus extrem gefährlich sein kann, und daher Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen der entsprechenden persönlichen Schutzausrüstung sollte immer bei der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden.
