Bu yöntem, risk altındaki kelebeklerin laboratuvar seri üretimi için kullanılan daha büyük bir ex situ koruma ıslah ıprotokolünün bir kısmını temsil eder. Temel hayvancılık yöntemlerinin temel davranışsal, yaşam öyküsü veya ekolojik veri boşluklarını gidermeye yardımcı olmak için bilimsel araştırmalara nasıl uyarlanabileceğini göstermektedir. Larva gelişim süresini ve larva stadia sayısını değerlendirmek için sunulan özel yöntemler, diğer kelebek koruma ıslahı veya araştırma programlarına geniş ölçüde uygulanabilirliğe sahiptir.
Bu teknik, nesli tükenmekte olan bir kelebeğin yaşam öyküsü ölçümlerini belgelemek için etkili bir yaklaşımdır, örneğin larva yıldız sayısı, gelişim evrelerinin süresi ve tüm yaşam evrelerinin büyüklüğü gibi. Kısa bir zaman diliminde veri toplarken özellikle önemli olan laboratuvarda verimlilik ve verimliliğin arttırılması için protokolümüzü kolaylaştırdık. Kelebek larvaları özellikle neonat larvaları olarak çok küçük olduğundan, bu yöntem organizmanın zarar görmemesi için el becerisi ve detaylara dikkat gerektirir.
Prosedürü gösteren Jacob Hornfeldt, bizim laboratuvar bir lisans olacaktır. Başlamak için, dikkatle hareket ve tek bir larva izole etmek ve bir petri kabında bir diseksiyon mikroskobu altında yerleştirmek için küçük bir deve saç suluboya boya fırçası kullanın. Böcek kaleminin tek bir saçını larvanınkine zıt renkteki toksik olmayan parlak boyaya batırın ve larvanın arkasına küçük bir damla boya koyun.
30 saniye sonra boya kurur. Küçük bir deve saç suluboya boya fırçası yardımıyla, taze terminal konak malzeme yaklaşık bir ila üç küçük yaprakları içeren kendi iki ons net plastik porsiyon fincan her bir larva yerleştirin ve fincan ve kapak üzerinde benzersiz bir tanımlayıcı yazmak. Kapağı sıkıca sabitle.
Her larvayı her gün dikkatlice kontrol edin. Forceps ile, yaprakları çıkarın ve beyaz bir yüzeye yerleştirin. Bardağı ve şeffaf kapağı inceleyin.
Larva eksülonu ve baş kapsüllerinin varlığı için bir diseksiyon mikroskobu altında yaprakları inceleyin. Bir larva eksülegözlendiğinde, bardaktan çıkarın ve gliserin 0.2 mikrolitre ile dolu bir şişe yerleştirin. Kapağın üst kısmını ve yan tarafını larva numarası, molt tarihi ve baş kapsülü ile etiketlayın.
Larva exuvia ve açık bir plastik porsiyon fincan kapağı na bağlı baş kapsülü yerleştirin ve etanol damla bir çift koyun. Bir diseksiyon mikroskobu altında larva eksülesini gözlemleyin. Larva kafa kapsülü zaten eksüleden ayrılmışsa, sivri entimolojik truçların ucuna bir damla gliserin yerleştirin ve baş kapsülüne yavaşça gliserine dokunun.
Kafa kapsülünü ilişkili mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin. Baş kapsülü hala larva eksülene bağlıysa, baş kapsülü larva eksüleğinden ayırmak için sivri büşreler ve böcek iğnesi kullanın. Ayrıldıktan sonra baş kapsülü almak için gliserin tekniğini kullanın.
Her molt sonra, larvalar yeniden boya ve molt tarihleri kaydedin. Her gün, her larva son karın segmentine baş toplam vücut uzunluğu ölçmek için dijital kalipers kullanın. Üç ölçüm alın ve tarih ve saat ile birlikte üç ortalama kaydedin.
Hiçbir kalıp olduğundan emin olmak için ilgili plastik fincan kontrol edin. Tüm frass ve eski konak enkaz kaldırın ve gerektiği gibi taze ana malzeme ekleyin. Larvayı bardağa geri ver.
Optimum larva aktivitesi ve gelişimi için bardakları laboratuvar sıcaklığında 27 ile 32 santigrat derece arasında koruyun. Tüm larvalar son yıldızulaşıncaya ve hazırlık aşamasına başlayana kadar durumu koruyun. Larvalar beslenmeyi bıraktığında, düzgün bir mat yeşilimsi-kahverengi rengi açın, chevronlarını kaybedin ve genellikle ev sahibinden uzaklaşın, fincana küçük bir parça oluklu kağıt koyun.
Bir kez her larva tamamen pupated toplam uzunluğu ölçmek ve yavru tarihini kaydedin. Bu her bireyin son molt olduğunu. Her gün pupa'yı kontrol et.
Onlar kelebekler haline büyüdüklerinde, yetişkin kelebek tutmak ve yavaşça üst kanat yüzey rengini ortaya çıkarmak için kanatları darbe forseps kullanın. Erkeklerin kanatlarının her yerinde mavi var gibi görünüyor ve dişiler maviyi ve arka kanatta turuncu bir göz lekesini azalttılar. Ortaya çıkan her yetişkin kelebeğin künye tarihini ve cinsiyetini kaydedin.
Her kelebeğin kanat akoru uzunluğunu ölçmek için kelebeği hafifçe forsepsle tutun ve dijital kaliperler kullanın. Kelebek ölçülmeyecek kadar aktif olması durumunda 30 saniye veya daha kısa bir süre buzdolabında yerleştirin ve tekrar deneyin. Bu protokol, en iyi laboratuvar ıslahı ve hayvancılık uygulamalarını geliştirmek için önemli olan çok sayıda önemli veri açığı üzerinde yönlendirilmiş araştırma ve kapsamlı veri toplama olanağı sağlamıştır.
Burada bir kişi için toplanan dört kafa kapsülleri vardır. Larvaların çoğunda her olgunlaşmamış yaşam evresinde beş günden az dört molvardı. Dişiler genellikle tüm olgunlaşmamış evrelerde erkeklere göre daha hızlı gelişirler.
Bu 0.625 p değeri ile önemli bir etkisi olmamasına rağmen. Bu adım özellikle larvalar yeni yumurtadan çıkan neonatlar olduğunda çok titizdir. Boyanın tırtılın sırtındaki uygun yere uygulandığından emin olmak için bu adımda mikroskop kullanmayı unutmamak önemlidir.
Bu yöntemler, gelişimsel aşama sağkalım oranlarını, birden fazla larva konaklarında diferansiyel performansı değerlendirmeye yardımcı olmak ve araştırmacıların alandaki verileri daha iyi yorumlamalarına yardımcı olmak için genişletilebilir. Bu basit yöntem, biraz planlama temel organizma yetiştiriciliği uygulamaları ile kolayca bilimsel araştırma için adapte edilebilir nasıl göstermektedir. Sonuçlar daha sonra, başarıyı artırmak için ex situ yöntemlerini bilgilendirmek ve potansiyel olarak uyarlamak için kullanılabilir.
