Sonraki Adım Taking: Bir Nöral Coaptation Ortotopic Hind Limb Transplant Modeli Sıçan Fonksiyonel Kurtarma Maksimize etmek

Bu video ayrıntılı açıklama sağlayacak, nasıl bir ortotopik sağ arka ekstremite gerçekleştirmek için, orta uyluk nakledilen sıçan. Donör sıçan sağ arka ekstremite orta uyluk seviyesinde kesilir, sonra buz üzerinde saklanır. Alıcı sıçan sağ arka ekstremite de orta uyluk düzeyinde ampütlü.

Donör sıçan uzvu daha sonra alıcı sıçana bağlanır. Biz kemik, arter, damar, sinir, kas ve cilt sistemleri yeniden nasıl açıklayacağız. Ekstremite nakli, daha spesifik olarak, vaskülarize kompozit allotransplant, VCA, geniş terapötik söz vardır.

Ama şu anda teknikler, immünsupresyon ve kötü fonksiyonel nöromotor kurtarma ile sınırlıdır. Modelimiz, elle dikilmiş vasküler anastomoz ve nöral uyum gibi zaman içinde test edilmiş mikrocerrahi teknikleri vurgulamaktadır. Bu ameliyatların 200'den fazlaını bir yılda gerçekleştirdik.

Her ne kadar başlangıç mikrocerrah için bir başlangıç öğrenme eğrisi olsa da, bizim yöntemi ve özel uygulama taahhüt öğrenmek için bu videoyu kullanarak, herhangi bir mikrocerrah bu modelde usta mümkün olacak. Tüm deneyler, Ulusal Sağlık Enstitüleri, NIH'nin laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı kılavuzuna uygun olarak yürütülmüş ve Northwestern Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Belirli yordamlar bir protokol IS 00001663 yapıldı.

Ameliyat sırasında 250 ila 400 gram ağırlığında 8 ila 16 haftalık bir sıçan seçin. Sıçan ın arka ekstremite kürk kesmeden önce bir buharlaştırıcı ile% 5 izofluran ile genel anestezi indüklemek. Anesteziyi korumak için bir burun konisi kullanarak% 2 ila 2.5 pozisyon altında bir ısıtıcı ile ameliyat panosunda sıçan.

Tüysüz cildi %70 sürtünme alkolile dezenfekte edin ve cerrahi alanı steril gazlı bezle koruyun. Uygun bir mikrocerrahi mikroskop ve burada gösterilen mikrocerrahi aletleri kullanarak, kolay erişilen bipolar ve monopolar elektrokoter ile birlikte, diseksiyon başlamak için hazır olacak. Sağ arka ekstremite etrafında bir çevre ve deri kesi yapmak için bir makas kullanın.

Inguinal ligament ile kabaca aynı düzeyde hemen inguinal kırışık başlayın ve çevresel kesi tamamlamak için yanal dorsal uzatmak. Ve sonra kesinin hemen altında kas tabakasıortaya çıkarmak, incelemek ve yüzeyel epigastrik damarları kadürmek, hangi kas tabakasından proksimal deri flep sadece oluşturulan yol. Proksimal flebi inguinal ligamente ve distal deri flebi inferolaterally dize süperomedial yansıtın.

Alanı ortaya çıkarmak için bir tel retraktör veya haddelenmiş gazlı bez kullanın. Sıçan inguinal anatomisi insanlara benzer gözlenen;lateral medial sinir yalan, arter, ve ven. Femoral sinir iksiyon, mümkünse, bifurkasyon için inguinal ligament proksimal de keskin bir şekilde bölmek.

Bölünmüş sinirinferior geri, güvenli bir şekilde şekilde tutmak, nemli gazlı bez altında kaplı. Femoral arter ve ven dikkat dönüm doğrudan onları işlemek yerine damarları atravmatik olarak geri çekmek için dört santimetre uzunluğunda 7-0 ipek bağları kullanın. Şimdi yakın dikkat son anastomoz sonucu artıracaktır.

7-0 ipek bağları ile femoral damarların tüm dalları ligate. Dalları bağlar arasında böl. Bölünme gerektiren arteriyel ve venöz dallar yüzeysel circumflex iliak ve kas damarları içerir.

Yüzeysel circumflex iliac genellikle en büyük ve insanlarda profunda femoral gibi derin dalış gibi görünüyor, ama profunda sıçan yok. Femoral damarların daha distal dalları, en yüksek geniküler ve safenöz dal gibi genellikle bölünme gerektirmez. Şimdi mümkün olduğunca inguinal ligament için proksimal olarak 7-0 ipek bağları ile femoral arter ligate ve bağlar arasında bölmek.

Arter benzer, ligate ve femoral ven bölmek. Arter ve damar inferiora yansıtın, güvenli bir şekilde dışarı, femoral sinir ile birlikte nemli gazlı bez altında daha önce kaplı kaplı. Ventral kas gruplarını inceleyin, ortaya çıkan herhangi bir görünür damar cauterize dikkat.

Hemostaz dikkat şimdi daha sonra reprofüzyon sırasında alıcı kan kaybını en aza indirecektir. Derin ventral kas grupları, tanımlamak ve keskin dalları için siyatik sinir proksimal bölmek. Her üç siyatik dalları genellikle görünür, tibial, peroneal ve sural.

Üçü de donör uzuvlarında korunmalıdır. Dördüncü kutanöz dal genellikle bu diseksiyonda görülmez. Titiz hemostaz ile orta uyluk düzeyinde kalan ventral ve dorsal kas grupları bölen bitirmek.

Bu kasları bölen tamamlamak için medily ekstremite geri çekmek için gerekli olabilir. Femur kemiğini el telsizi döner testere kullanarak orta şaftta geçirin. Uzuv artık donörden kurtuldu.

Donörden ekstremite grefti çıkarıldıktan sonra, greft tarafı femoral arter ve damar kütüklerinden ipek bağlı uçları keserek damarları yeniden açar. Greft arter kütüğüne 24-gauge anjiyokateter yerleştirin ve açık damardan akmasını izlemek için dikkatli olmak için, 5 mililitre buz gibi normal tuzlu seyreltilmiş 250 uluslararası heparin birimi ile greft floş. Yavaşça, yavaşça yaklaşık üç dakika boyunca greft floş.

Aşırı güçlü yıkama endotel zarar verebilir. Grefti, nakil yapılana kadar buz kovasında iç içe olan soğutulmuş tuzlu bir tabağa koyun. Donör sıçanı bilateral torakotomi ile ötenazi.

Alıcı cerrahi donör cerrahi benzer başlar, sıçan anestezi, kürk kırpma, inguinal kırışık bir çevresel kesi yapma, deri flepleri yansıtan, femoral sinir, arter ve damar dışarı diseksiyon. Ve daha önce açıklandığı gibi aynı dal damarları bağlama. Ancak, bu operasyon sırasında, daha donör için daha distally femoral sinir bölmek, ama mümkünse çatallanma için proksimally.

Bölmek ve femoral arter ve ven serbest ve yakın mikrocerrahi bulldog kelepçeler ile inguinal ligament düzeyinde sırasıyla onları kelepçe. Daha önce açıklandığı gibi ameliyata devam, titiz hemostaz ile uyluk düzeyinde uyluk solunum onsör kasları bölerek, gerekli medily ekstremite geri çekerken. Tanımlamak ve dal noktasına siyatik sinir proksimal bölmek ve döner testere kullanarak orta şaftta femur transect.

Alıcının sağ arka ekstremitesini çıkarın ve yerel Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi yönergelerine uygun şekilde imha edin. Bu aşamada burun konisi ile isoflurane'yi %1-1,5'e düşürmek çok önemlidir. İşlemin bu daha az acı veren kısmı sırasında çok fazla anestezi farenin ölümüne yol açacaktır.

Kemikleri bir araya getireme zamanı. El döner testere kullanarak, hem donör hem de alıcı uyluk kesim uçları herhangi bir düzensizlik leri tıraş. Femur intramedüller çubuk olacak bir 18-gauge iğne, hub ucu kesti.

Kemiği manipüle etmeden önce, reaming işlemi sırasında ilik kanamasını azaltmak için femur kemiğinin alıcı kesim ucuna az miktarda kemik balmumu uygulayın. Bir intramedüller çubuk olarak 18-gauge iğne kullanarak donör ve alıcı femoral kemikleri Coapt. Bazı kuvvet gereklidir, ama şimdiye kadar korteks kırık olarak her iki kemik ream yok.

Gerektiği gibi, iğneyi çıkarın ve her iki kemiğin de kemik arasında iğne görünmeden iğnenin üzerine düzgün bir şekilde sığması için uygun olmayan uzunluğa doğru kırpın. Gerginlikten uzak tutmak için donör ekstremitenin altına gazlı bez veya küçük bir kaya veya modelleme kil gibi küçük bir destek yerleştirin. Greftin femur iğnesi etrafında dönmemesi için 8-10 basit kesilen 5-0 poliglactin sütür ile ventral kas gruplarını yeniden approximatea.

Bu anastomozlar için ekstremite stabilitesi verir. Şimdi anastomusa başlayın. Daha iyi görüntüleme ve iskemik reperfüzyon yaralanmasını azaltmak için greft ve cerrahi alanı buz gibi tuzlu suile periyodik olarak sulandırın.

Donörü ve alıcı femoral arterleri ve anastomozları basit bir şekilde 10-0 naylon dikiş kullanarak uçtan uca moda edin, hem gerginlikten hem de döngüden kaçının. Arter ortalama altı dikiş gerektirir. Arter benzer, anastomoz donör ve alıcı femoral venler uçten uca moda.

Damar altı ila sekiz dikiş gerektirir. Cömert soğuk tuzlu sulama, atravmatik damar işleme tekniği ve damar geri çekilmesi için dikiş olarak hizmet etmek için uzun kuyrukları bırakarak etkili mikrocerrahi anastomozlar için önemli araçlardır. Her iki anastomoz üzerinde hemostatik selüloz tozu Orta miktarda yerleştirin, ve daha sonra damar ve arter proksimal mikrocerrahi bulldog kelepçeler kaldırın.

İyi bir açıklık ve akış için her iki anastomoz inceleyin. Nazikçe damar prod ve her iki anastomoz üzerinde iyi hemostaz için incelemek için pamuklu bez çubukları kullanın. Her iki anastomoz tatmin edici doğrulandı, diğerleri maç için kalan uzun kalmak dikiş kuyrukları kırpma.

Sol lateral dekübitus pozisyonuna sıçan repositioning, herhangi bir reperfüzyon kas kanaması titiz hemostaz elde etmek için liberal elektrokoter kullanın. Kas hemostazı sağlandıktan sonra dikkat sinir anastomozlarına döner. Basit kesilen 5-0 poliglactin sütür ile doğrudan siyatik sinir altında yatan dorsal kas grupları reapproximate.

Yırtık gibi görünen sinir kesik uçlarını geri alın. Epinöral ısırıklar için çabalayan 10-0 naylon dikişler ile siyatik sinir reapproximate. 8-10 basit kesilmiş dikiş genellikle yeterli olacaktır.

Kalan dorsal kas gruplarını 5-0 poliglactin sütürile yeniden approximate. Sonra 4-0 poliglactin sürekli çalışan dikiş ile dorsal deri kapatın. Sıçanın supine pozisyonuna geri konumlandırılması, femoral siniri 10-0 naylon dikişle yeniden reapproximate, yine epinalinal ısırıklar için çabalıyor.

2-3 basit kesilmiş dikiş genellikle yeterli olacaktır. Kalan ventral deriyi sırt derisiyle aynı şekilde kapatın. Bir kez uyanık sıçan için rahatsız edici olabilir aşırı dikiş kuyruk, kaçının.

Hayvanlar hemen postoperatif pencereden çıktıktan sonra nöromotor iyileşme için test edilebilirler. Hargreaves testi termal hissi test etmek için kullanılır. Test kabına sıçan yerleştirin ve 20 dakika boyunca alışmak için izin verdi.

Cihaz camı temiz onaylandı ve ısı kaynağının araştırmacının parmağıyla çalıştığı doğrulandı. Testten önce, farenin uyanık olduğunu ve test edilen pençenin kızılötesi hareket dedektörü üzerine yerleştirilip yerleştirilen olduğunu doğrulayın. Termal enerjiyi yoğunluk seviyesi 90'da iletin.

Hayvanın pençesini ısı kaynağından uzaklaştırmasında zaman gecikmesi kaydedilir. 20 saniye içinde herhangi bir hareket oluşursa, yaralanmayı önlemek için test iptal edilir. Her hayvan için ortalama çekilme gecikme süresini hesaplamadan önce en yüksek ve en düşük değer hariç olmak üzere, test edilen ekstremite başına beş deneme alın.

Burada karikatür formatında operatif tasarım tasvir's. Hem donör hem de alıcı sıçanların sağ arka ekstremitesi siyatik kesit olarak orta uyluk seviyesinde kesilir. Femoral arter, ven, ve sinir, yanı sıra siyatik sinir ve femur kemiği daha sonra alıcı cerrahi de yeniden bağlanmalıdır.

Model bağışıklık bastırma ve nakil stratejisididial sağkalım etkilerini göstermek için kullanılabilir. Bu teknikle uzun süreli sağkalım sağlanabilir. Model duyusal sinir kurtarma araştırmak için kullanılabilir, hangi ameliyat sonrası dört hafta ile belirgin olabilir.

Motor fonksiyonu da bir yürüyüş analiz platformu kullanılarak sorgulanabilir. Burada, devam eden rakamlarda görüldüğü gibi duyusal ve motor geri kazanımı araştırmak için kullandığımız uygun sağkalım özelliklerine sahip bir fare modeli platformu sunduk. VCA geniş kategorisi altında ekstremite nakli, vaskülarize komponent allotransplantasyonu yaygın olarak uygulanabilir terapötik söz henüz yerine getirilmemiştir.

Ana barikatlar mevcut immünsupresyon ve nöromotor kurtarma tekniklerini sıralar. Yeni tekniklerin geliştirilmesi esnek, sağlam ve tekrarlanabilir hayvan modellemebağlıdır. Bu platformu kullanarak, araştırmacıların uzuv naklinin birçok yönünü ilerletebileceği umudumuzdur.

İzlediğiniz için teşekkür ederiz ve sonraki adımları iyi şanslar.