Tümörleri gözün arka kısmı olarak belirlemek zordur. Bu yöntem, farelerde tekrarlanabilir koroidal melanom tümörlerinin indüksiyonunu ve değerlendirme için tümör büyümesinin canlı görüntülenmesini sağlar. Bu protokol, tümör hücresi aşılaması sırasında tümörlerin yerini değerlendirmek ve canlı hayvanlarda tümör büyümesini takip etmek için OCT canlı görüntülemeyi kullanır.
Üveal melanom %50'ye yakın metastaz oranı ile yıkıcı bir hastalıktır. Deneysel modeller geliştirmek, yeni terapötik olasılıklara yönelik araştırmaları ilerletmenin anahtarıdır. Bu yöntemin bir avantajı, enjeksiyon başarısının derhal değerlendirilmesinin, homojen tümörleri olan çalışma gruplarına ulaşmayı ve canlı görüntüleme ile sürekli takip etmeyi sağlamasıdır.
Tümör progresyonunu incelemek. Küçük farenin gözlerine enjekte etmek pratik gerektirir. Enjekte edilen hücreleri görselleştirme yeteneği, başarınızı hemen değerlendirmenize ve gerektiğinde daha fazla fareyle tekrarlamanıza olanak tanır.
Prosedürü gösteren, Kaplan Tıp Merkezi'ndeki Oftalmoloji Araştırma Laboratuvarı'ndan Dr. Dimitri Gaber olacaktır. Başlamak için, anestezi uygulanan farenin her iki gözüne% 0.4 topikal oftalmik anestezik, Oxybuprocaine uygulayın. Daha sonra topikal olarak, göz bebeklerini genişletmek için her iki göze de% 0.5 Tropikamid, ardından gözlerin kurumasını önlemek için bir yağlayıcı olarak% 1.4 hidroksietil selüloz uygulayın.
Farenin bir gözünü ameliyat mikroskobu altında gözlemleyin. Göz kapaklarını steril göz içi forseps ile açık tutun. Daha sonra üstün temporal limbo-konjonktivayı tutun ve bir infra nazal pozisyonuna doğru çekin.
İşlem boyunca limbo-konjonktivayı tutarak bu pozisyonu güvence altına alın. 30 gauge'lik bir iğne ucu kullanarak, dorsal temporal bölgede limbusun yaklaşık bir ila iki milimetre arkasında küçük bir konjonktival peritomi yapın. Fazla tendon kapsülünü peritominin açıklığından çıkarın.
Skleraya nüfuz etmek için iğne ucunu yerleştirin ve koroidin kahverengi rengi skleranın maruz kalan beyaz maddesinden görünene kadar subkoroidal boşluğa bir iz bırakın. Hücreleri, 45 derecelik bir açıyla bükülmüş 32 gauge künt bir iğne ile monte edilmiş steril bir 10 mikrolitrelik cam Hamilton şırıngasına yükleyin. Yüklenen şırınganın iğnesini oluşturulan kanala yaklaşık iki milimetre yerleştirin ve hücre süspansiyonunun iki mikrolitresini enjekte edin.
Enjeksiyondan sonra iğneyi tüm sıvı temizlenene kadar iki ila üç saniye boyunca yerinde tutun. Kanaldan sızıntıyı önlemek için iğneyi yavaşça dışarı çekerek çıkarın. Melanom hücresi aşılamasından hemen sonra, OCT taramaları ile hayvanın enjekte edilen gözünü gözlemleyin.
Taramalara dayanarak, retina dekolmanı veya RD paternlerini üç kategoriye göre sınıflandırın yerel RD, Vitreus İçine Sızıntı veya Genişletilmiş RD. RD yüksekliğine göre tümör boyutunu tahmin etmek için bir OCT segmentasyon analiz yazılımı açın. OCT taramalarında Yerel RD'nin yüksekliğini ölçün ve bunları üç gruba ayırın. Postoperatif aşamada, topikal olarak% 0.3 oranında Ofloksasin uygulayın.
Subkoroidal hücre enjeksiyonunu takiben tümör büyümesinin OKT temelli tahmini bu şekilde gösterilmiştir. Fareler RD, Focal, Leakage To The Vitreus ve Extended RD'nin üç modelini sergiledi. Enjeksiyondan hemen sonra RD paterni ile enjeksiyondan beş gün sonra tümörlerin lokalizasyonu arasında bir ilişki vardı. Fokal RD, koroid ile sınırlı tümör hücresi büyümesi ile ilişkiliydi.
Bununla birlikte, Fokal RD gösteren hayvanlarda enjeksiyondan sonra vitreustaki hücrelerin gözlemlenmesi, vitreal boşlukta ve koroidde tümör büyümesini göstermiştir. Enjeksiyondan sonra uzamış RD gözlendiğinde, tümörler beş gün sonra koroid ve vitreus boyunca dağıldı. Bu modelde indüklenen tümör boyutlarının aralığı küçük, orta ve büyük olarak ayrılabilir.
Burada, enjeksiyondan sonra RD yüksekliğinin OCT ölçümünün temsili görüntüleri ve buna karşılık gelen fundus görüntüsü, enjeksiyondan sonraki beşinci günde tümör yüksekliğinin ve genişliğinin yatay bir OCT taraması ve buna karşılık gelen fundus görüntüsü ve karşılaştırılabilir tümör ölçümlerini gösteren ilgili H &E lekeli göz bölümü gösterilmektedir. Hücre enjeksiyonundan hemen sonra küçük, orta veya büyük RD sunan farelerin tümör hacim ölçümleri burada sunulmuştur. Enjeksiyon kuvvetinin ayarlanması tümör boyutunu ve yerini etkileyebilir.
Bunu kalibre etmek ve enjeksiyondan sonra OCT ile indüklenen retina dekolmanı paternini değerlendirmek önemlidir. Koroidal tümörlerin canlı görüntülenmesi, farklı faktörlerin veya potansiyel tedavilerin tümör progresyonu üzerindeki etkisini incelemeyi sağlayan önemli bir deneysel araçtır.
